Aplicação Avançada da Eletroforese Capilar na Detecção de Proteínas Monoclonais Séricas de Alta Resolução

Resumo

Aqui apresentamos um protocolo para análise de proteínas séricas de alta resolução usando eletroforese capilar. Sob um campo elétrico de alta voltagem, proteínas séricas migram por um capilar com base na carga e na mobilidade eletroforética. O eletroferograma resultante permite a detecção, localização e quantificação dos picos monoclonais de proteínas.

Resumo

A imunoglobulina monoclonal, também conhecida como proteína M ou paraproteína, é produzida pela proliferação clonal de células plasmáticas ou linfócitos B e serve como um biomarcador chave para gammopatias monoclonais. A detecção e quantificação precisas da proteína M sérica são essenciais para o diagnóstico precoce da doença, classificação clínica e monitoramento terapêutico. Este protocolo descreve um método que utiliza eletroforese capilar (CE) para separação de alta resolução de proteínas séricas. As proteínas são separadas em um tampão alcalino sob eletroforese de alta voltagem e detectadas por absorção ultravioleta, gerando eletroferogramas que permitem visualização clara e quantificação de picos anormais de proteínas monoclonais. Comparado aos métodos tradicionais, o CE oferece melhor resolução da região beta e possibilita uma análise automatizada e rápida com requisitos mínimos de manuseio da amostra. Cinco eletroferogramas representativos demonstraram migração da proteína M nas regiões β1, β2 e γ, com níveis de proteína M de 0, 44,1% (45,8 g/L), 10,5% (8,6 g/L), 35,5% (28,4 g/L) e picos duplos de 41,3% (46,0 g/L) e 12,4% (13,8 g/L). Em um estudo retrospectivo com 700 amostras clínicas de soro, a CE alcançou uma taxa de detecção positiva de 51,86%, comparada a 52,86% para a eletroforese por imunofixação (IFE). Usando o IFE como método de referência, a CE demonstrou sensibilidade de 92,70% e especificidade de 93,94%. Esses achados confirmaram que a CE é uma abordagem rápida e automatizada para triagem e quantificação da proteína M sérica em laboratórios clínicos rotineiros.

Introdução

Distúrbios relacionados à proteína M são caracterizados pela presença de uma imunoglobulina monoclonal (proteína M) no soro e/ou na urina. Essas proteínas são tipicamente secretadas por células plasmáticas clonais ou linfócitos B e estão principalmente associadas a discrasias malignas de células plasmáticas ou gammopatias monoclonais^{benignas 1,2}. O espectro clínico dessas condições inclui gammopatia monoclonal de significado indeterminado (MGUS), plasmocitoma solitário (SPC), mieloma múltiplo fumegante (SMM), mieloma múltiplo (MM), leucemia de células plasmáticas (PCL), macroglobulinemia de Waldenström (WM), amiloidose sistêmica de cadeia leve (AL), linfoma não Hodgkin de células B (B-NHL) e outros distúrbios linfoproliferativos de células B (LPD)³. Um estudo retrospectivo realizado na Espanha relatou que, entre essas condições, a MGUS é a mais prevalente, respondendo por 54,1% dos casos, seguida pela MM (31,3%) e outras gammopatias malignas (14,6^%). Também é importante notar que a proteína M pode ser produzida em resposta a certas condições não neoplásicas, como a síndrome nefrótica⁵.

O teste da proteína M desempenha um papel fundamental no diagnóstico e monitoramento de distúrbios relacionados à proteína^{M 6}. No entanto, o diagnóstico precoce continua sendo um desafio clínico, pois pacientes com MM frequentemente apresentam assintomas nos estágios iniciais, levando a um diagnóstico atrasado em uma fase relativamente avançada da doença. Aproximadamente 1% dos indivíduos com MGUS progridem para uma condição maligna anualmente — mais comumente para MM, WM ou SPC⁷. Embora quase todos os casos de MM sejam considerados como originários do MGUS, menos de 10% dos pacientes com MM possuem histórico documentado de diagnóstico prévio de MGUS. Consequentemente, a identificação oportuna da proteína M no soro e/ou urina pode fornecer pistas valiosas para o diagnóstico precoce desses distúrbios, o que é crucial para melhorar a sobrevivência e o prognóstico dos pacientes. Pesquisas indicam que pacientes com MGUS identificados por meio de triagem ativa apresentam menos complicações do que aqueles diagnosticados^{incidentalmente 8}. Durante o monitoramento terapêutico, informações sobre o isotipo e o padrão de migração eletroforética da proteína M são essenciais para distinguir entre a recorrência da proteína monoclonal original e o surgimento de bandas oligoclonais ou de uma proteína M⁹ reativa secundária. O aparecimento de uma nova proteína M, frequentemente observado após o transplante autólogo de células-tronco, é geralmente considerado um indicador prognóstico favorável para a maioria dos^{pacientes 10}. De acordo com essa observação, dados comparativos de sobrevivência indicam que pacientes que desenvolvem uma proteína M secundária apresentam uma sobrevivência geral mediana de 115,3 meses, em contraste com 31,0 meses entre aqueles que não desenvolvem¹¹.

A eletroforese proteica é uma técnica analítica altamente sofisticada. Uma variedade de métodos está disponível para detectar a proteína M sérica, incluindo eletroforese proteica sérica (SPE), IFE, imunotipagem por eletroforese capilar (IT), ensaio de cadeia leve livre (FLC), detecção de cadeias pesadas e leves (HLC) e espectrometria de massa (EM). Cada abordagem oferece vantagens distintas, ao mesmo tempo em que enfrenta limitações inerentes. A SPE pode ser subdividida ainda em eletroforese em gel de agarose (AGE) e EC. O AGE, que utiliza um meio à base de agarose, é um método simples e econômico, adequado para separação e análise rápidas. No entanto, é limitado por uma sensibilidade relativamente baixa, com um limite típico de detecção de 0,3-0,5 g/^{L 12}, o que pode resultar na falha na detecção de proteínas M de pequeno volume ou baixa concentração. Além disso, a técnica é suscetível à flexão e deformação da banda, o que compromete a reprodutibilidade.

O IFE é amplamente reconhecido como o padrão ouro para tipagem da proteína M. Após a eletroforese inicial, anticorpos específicos (anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM, κ, λ) são aplicados para formar bandas imunoprecipitadas, permitindo a identificação do tipo de imunoglobulina e do subtipo de cadeia leve. A IFE pode detectar a proteína M em concentrações tão baixas quanto 0,05-0,15 g/L, proporcionando uma sensibilidade mais de 10 vezes maior que a da SPE. Apesar dessa vantagem, é necessário um pré-tratamento especializado para certas amostras, como aquelas que contêm polímeros da proteína M, para garantir a dissociação com β-mercaptoetanol. Tratamento inadequado pode levar a resultados enganosos. Além disso, pacientes que estão submetendo novas terapias combinadas (por exemplo, esquemas contendo daratumumabe, bortezomib, dexametasona e talidomida/lenalidomida) podem apresentar resultados falsos positivos em^{IFE 13}. Uma limitação fundamental da IFE é que ela fornece apenas resultados qualitativos, pois não pode quantificar os níveis da proteína M e, portanto, é inadequada para monitorar a eficácia terapêutica¹⁴. Entre os pacientes tratados, os resultados do IFE podem permanecer positivos mesmo com a diminuição da concentração de proteína M durante o tratamento bem-sucedido.

Em contraste, a TI emprega buffers capilares como meio de separação, oferecendo resolução maior do que o IFE convencional. No entanto, o processo exige etapas laboriosas de pré-tratamento da amostra, como a mistura de antissoro, o que prolonga o fluxo de trabalho geral da detecção. FLCs, que são cadeias leves de imunoglobulina (κ e λ) não ligadas a cadeias pesadas, são quantificadas diretamente no soro usando anticorpos direcionados aos seus epítopos da "zona oculta", proporcionando alta sensibilidade para detectar distúrbios relacionados à cadeia leve com um limite de detecção tão baixo quanto 10–30 mg/L. Na MM, níveis elevados de FLC sérico correlacionam-se com a carga tumoral e permitem uma avaliação mais precoce da resposta ao tratamento, devido à sua meia-vida mais curta em comparação com imunoglobulinas^{intactas 15}. No entanto, sua aplicação clínica deve ser combinada com outros métodos diagnósticos, como a eletroforese, para descartar outras condições e garantir uma avaliação abrangente. Por exemplo, a função renal comprometida pode levar a níveis falsamente elevados na cadeia luminosa. Os ensaios HLC representam outra abordagem quantitativa que utiliza anticorpos direcionando epítopos tanto nas cadeias constantes quanto leves da imunoglobulina. Esse projeto permite a quantificação separada de emparelhamentos de imunoglobulinas específicas de isotipo (por exemplo, IgGκ e IgGλ), e a razão HLC derivada serve como um indicador sensível de clonalidade. No entanto, os resultados podem ser influenciados pelos níveis de imunoglobulina policlonal de fundo, e o método pode ser menos confiável ao analisar variantes complexas da proteína M. A EM oferece sensibilidade excepcional e permite uma caracterização proteômica aprofundada para proteínas M. No entanto, sua aplicação é limitada por altos custos de equipamentos, procedimentos analíticos longos e expertise especializada exigida para interpretação de dados.

A CE é uma poderosa técnica analítica de separação que utiliza capilares elásticos de sílica fundida como canais de separação e um campo elétrico direto de alta voltagem como força motriz. Ele proporciona separação de alta resolução ao aproveitar diferenças na mobilidade eletroforética e/ou no comportamento de partição dos analitos-alvo. Desde sua criação, a tecnologia evoluiu de configurações capilares únicas para matrizes capilares de alto rendimento e dispositivos microfluídicos miniaturizados. Suas aplicações agora abrangem diversos campos, incluindo análise farmacêutica, diagnóstico biomédico e clínico, testes de segurança alimentar e caracterização^{bioterapêutica 16,17}. A CE é cada vez mais reconhecida como uma ferramenta crucial para a triagem e análise quantitativa das proteínas M. Ele determina a porcentagem de proteína M em relação à proteína total, que pode então ser multiplicada pela concentração total de proteína para calcular os níveis absolutos de proteína M. Mais notavelmente, sua exigência mínima de amostras o torna particularmente adequado para analisar espasmes preciosos ou com volume limitado.

A CE oferece três vantagens técnicas chave. Primeiramente, sua alta sensibilidade analítica (0,1–0,5 g/L) permite a detecção eficaz de proteínas M de baixa concentração, reduzindo assim o risco de diagnóstico errado em condições como MGUS e doenças da cadeia leve. Em segundo lugar, o fluxo de trabalho totalmente automatizado elimina os erros subjetivos de interpretação inerentes aos métodos tradicionais de coloração à base de gel. Por fim, o tempo de ensaio é significativamente reduzido para 15–20 min, notavelmente mais curto do que os 60–90 min necessários para a eletroforese convencional. Como uma técnica analítica fundamental entre a eletroforese por zonas e a cromatografia líquida, a CE realiza separação eletroforética em solução livre. Sob um campo elétrico aplicado, as moléculas de proteína são separadas principalmente por fluxo eletroosmótico dentro de um tampão alcalino em um pH específico. Após diluição com um tampão dedicado, as amostras são injetadas no ânodo capilar sob alta voltagem para iniciar uma separação rápida e eficiente de proteínas, e então detectadas no cátodo a 200 nm. Após cada ciclo analítico, os capilares passam por limpeza automatizada e reposição do tampão para processar amostras subsequentes. A separação das proteínas ocorre na seguinte ordem: gama-globulina, beta-2-globulina, beta-1-globulina, alfa-2-globulina, alfa-1-globulina e albumina, permitindo a identificação de anormalidades em uma ou mais frações séricas de proteínas. Notavelmente, a CE oferece resolução aprimorada dentro da região beta, separando-a distintamente em componentes de globulina beta-1 e beta-2, fornecendo assim informações clínicas mais^{detalhadas 18}. Impulsionada pela integração da inteligência artificial e avanços contínuos na detecção multiparâmetro, a CE está prestes a evoluir para uma modalidade de triagem de primeira linha para a detecção da proteína M. Portanto, este protocolo descreve o uso da eletroforese capilar para a rápida detecção, localização e análise quantitativa de proteínas monoclonais séricas em amostras clínicas.

Protocolo

O protocolo do estudo foi revisado e aprovado pelo Comitê de Revisão de Ética do Hospital Popular Provincial de Guangdong (Número de Aprovação: KY2025-176-01). Todos os participantes forneceram consentimento informado por escrito antes da coleta da amostra.

1. Preparação de materiais

NOTA: O kit de reagentes deve ser armazenado a 2–30 °C e tem vida útil de até 3 anos.

1. Armazene o buffer de funcionamento entre 2 e 8 °C e deixe que ele atinja a temperatura ambiente antes do uso. Uma vez aberta, a solução permanece estável por até 3 meses. Use essa solução como tampão contínuo para a separação de proteínas séricas na eletroforese capilar.
   NOTA: O buffer de funcionamento está pronto para uso com pH de 9,9 ± 0,5. O kit de reagentes contém três frascos de 700 mL de tampão alcalino usados como tampão contínuo para separação de proteínas séricas.
2. Dilua 75 mL de solução concentrada para enxágue até 750 mL com água desionizada antes do uso. Armazene a solução diluída de enxágue em temperatura ambiente. Uma vez aberta, a solução permanece estável por até 3 meses. Use essa solução para limpar tubos capilares após eletroforese.
   NOTA: A solução de enxágue contém hidróxido de sódio e é usada para limpeza capilar.
   ATENÇÃO: A solução de enxágue contém hidróxido de sódio, uma substância corrosiva que pode causar queimaduras graves. Em caso de contato visual, enxágue imediatamente com bastante água e procure atendimento médico. Se a pele ou roupa estiver contaminada, remova imediatamente as roupas contaminadas. Sempre use roupas de proteção adequadas e proteção para os olhos e o rosto.
3. Armazene os copos de reagente na embalagem original lacrada a 2–30 °C em um local limpo e seco. Use os copos de reagente para diluição de amostras em instrumentos totalmente automatizados.
4. Armazene o filtro selado em um local seco à temperatura ambiente (15–30 °C). Use os filtros descartáveis para filtrar soluções amortecedora e água desionizada.
5. Armazene a solução de limpeza capilar (veja Tabela de Materiais) a 2–8 °C e evite a precipitação.
   NOTA: Cada frasco de concentrado de solução de limpeza capilar (25 mL/frasco) contém enzimas proteolíticas, surfactantes e outros aditivos. Aditivos são não perigosos na concentração de aplicação e são necessários para o desempenho ideal. A solução previne o bloqueio capilar e mantém o desempenho ideal.
6. Use água deionizada filtrada com tamanho de poro ≤ 0,45 μm, condutividade abaixo de 3 μS/cm e resistividade superior a 0,33 MΩ·cm. Troque a água diariamente para evitar contaminação microbiana. Use essa água para limpar os tubos capilares do analisador de eletroforese.
7. Prepare uma solução de hipoclorito de sódio contendo 2–3% de cloro disponível. Use essa solução para limpeza da amostra e da sonda para remover proteínas adsorvidas. Armazene a solução clorada em funcionamento em temperatura ambiente em um recipiente fechado. A solução permanece estável por até 3 meses. Não armazene perto da luz solar, calor, fontes de ignição, ácidos ou amônia.

2. Coleta de amostras

1. Certifique-se de que os pacientes jejuem por no mínimo 8 a 12 horas antes da coleta de sangue.
2. Peça aos pacientes que descansem sentados ou em posição deitada por 10 a 15 minutos para estabilizar a hemodinâmica.
3. Prepare os seguintes suprimentos: agulhas venosas descartáveis, tubos de coleta de sangue a vácuo (tubos de soro), torniquete, cotonetes estéreis, desinfetante com álcool 75% ou iodóforo, curativo adesivo médico e recipiente de resíduos de risco biológico.
   NOTA: A veia cubital mediana na fossa do cotovelo é o local preferido da perfuração.
4. Aplique um torniquete de 3 a 5 cm acima do local da perfuração para engorjar suficientemente a veia.
5. Desinfete a pele com álcool ou iodóforo 75% em um padrão espiral centrífugo do centro para fora, cobrindo uma área de ≥5 cm de diâmetro, e deixe o desinfetante secar naturalmente ao ar, sem tocar novamente na área.
6. Segure a agulha com o bisel para cima em um ângulo de 15–30° em relação à pele e perfure a parede da veia suavemente.
7. Ao observar o retorno do sangue, prenda a agulha e conecte o tubo a vácuo. Deixe o sangue preencher o tubo passivamente sob pressão negativa, sem compressão manual, para evitar hemólise.
8. Após a coleta, primeiro solte o torniquete, depois retire a agulha com cuidado e imediatamente aplique pressão no local da perfuração com um cotonete estéril por 3 a 5 minutos para garantir a hemostasia.
9. Coloque a amostra coletada em pé em temperatura ambiente e deixe o sangue coagular naturalmente.

3. Avaliação da qualidade da amostra

1. Amostre soro de centrífuga a 2.095 x g por 10 minutos em temperatura ambiente.
2. Sujeitem as amostras de soro a uma rigorosa avaliação visual da qualidade sob luz natural adequada contra um fundo branco simples.
3. Avalie a hemólise examinando a cor e a clareza do sobrenadante. A classificação é amostrada como não hemolizada se o sobrenadante parecer claro e amarelo, enquanto qualquer descoloração rosa ou vermelha indica hemólise leve a severa.
   NOTA: A hemólise pode produzir uma zona dupla alfa-2. A fração de beta-2 pode diminuir em amostras de soro envelhecidas ou armazenadas de forma inadequada.
4. Inspecione a interferência de fibrinogênio verificando fitas visíveis, coágulos ou redes gelatinosas dentro do sobrenadante, bem como separação de fase incompleta, opacidade ou sinais analíticos inconsistentes.
   NOTA: O fibrinogênio migra na posição beta-2 (ombro sobre beta-2 ou sobreposto à zona beta-2, com possível aumento dessa fração). Em algumas amostras (plasma, soro não totalmente desfibrinado ou pacientes em tratamento anticoagulante), o fibrinogênio pode interferir na análise e levar a interpretações imprecisas, como a suspeita de uma banda monoclonal ou o aumento da fração de beta-2.
5. Exclua amostras que mostrem hemólise, interferência de fibrinogênio ou outras anomalias pré-analíticas após serem detectadas na análise.
6. Colete uma nova amostra de sangue seguindo protocolos padronizados de flebotomia e processamento, garantindo tempo adequado de coagulação e parâmetros padronizados de centrifugação. Use apenas amostras com aparência satisfatória — claras, livres de hemólise, fibrina, lipemia ou contaminação para testes subsequentes.
7. Teste as amostras separadas do soro o mais rápido possível em temperatura ambiente. Se não for possível realizar testes imediatos, armazene as amostras entre 2 e 8 °C por até 10 dias e a -20 °C por até 30 dias. Não congele e descongele amostras repetidamente.
   NOTA: Evite amostras de plasma. Ao analisar amostras de plasma envelhecido (o que não é recomendado), componentes lábeis como o complemento C3 se degradam com o tempo, então a zona beta-2 corresponde essencialmente ao fibrinogênio.
8. Antes do teste, restaure as amostras à temperatura ambiente e misture cuidadosamente. Certifique-se de que as amostras congeladas estejam completamente descongeladas antes do uso.
   NOTA: Use amostras de proteína sérica não diluída. Alguns soros refrigerados podem se tornar viscosos ou turvos, especialmente aqueles que contêm crioglobulinas ou criogel. Use amostras contendo poliimunoglobulinas diretamente, sem tratamento prévio adicional.

4. Procedimentos operacionais

1. Ligue o analisador automático de eletroforese capilar (veja Tabela de Materiais) e o sistema de computador conectado. Espere até que o instrumento esteja totalmente inicializado.
   NOTA: O comprimento capilar e o diâmetro interno são de 17,5 cm e 25 μm, respectivamente. A tensão de separação varia de 8.000 a 10.000 V. É usada injeção eletrocinética, e a temperatura de separação é mantida em aproximadamente 25 °C. O tempo total de execução é de aproximadamente 10 minutos por amostra.
2. Inicie o software PHORESIS (veja Tabela de Materiais) instalado no computador para processamento de dados.
3. Na interface do software, selecione o programa PROTEIN (E) 6 e então insira a garrafa de buffer em funcionamento no instrumento.
   NOTA: Este programa é um protocolo pré-ajustado calibrado em fábrica, especificamente projetado para fracionamento de proteínas séricas. Todos os parâmetros são pré-configurados no software PHORESIS do instrumento, sem necessidade de modificação manual.
4. Se necessário, coloque o frasco de reagente contendo a solução de limpeza resolubilizada dentro do instrumento.
5. Monte um novo copo de reagente na plataforma automática de carregamento do analisador de eletroforese capilar.
6. Instale uma nova caixa de resíduos na posição padrão de descarte do analisador de eletroforese capilar para copos de reagentes usados.
7. Carregue os racks de amostras no analisador pela abertura do lado direito (capacidade máxima: 15 racks).
   NOTA: Cada rack pode acomodar até 8 tubos de amostras. O código de barras em cada tubo de ensaio deve ser visível através da abertura do rack.
8. Use o sample rack nº 0 para o soro de controle. Use controle de qualidade de terceiros baseado na média acumulada e coeficiente de variação calculados a partir de 20 pontos de dados de teste.
9. Remova o suporte de amostras completo da bandeja de descarga do lado esquerdo. Remova e descarte a caixa de resíduos contendo os copos de reagentes usados, se necessário.
   ATENÇÃO: Manuseie os copos de reagentes usados com cautela, pois podem conter amostras biológicas.
10. Coloque a solução de limpeza capilar na posição S2 na câmara secundária do reagente. Clique em Manutenção e Limpeza na tela do instrumento, depois selecione Iniciar Capiclean.
11. Coloque uma solução de hipoclorito de sódio a 2-3% na câmara do reagente secundário (posição T1). Clique em Manutenção e Limpeza na tela do instrumento e selecione Iniciar Descontaminação.
    NOTA: Todo o processo de limpeza capilar funciona automaticamente por 45 minutos.
12. Inicie a sequência de limpeza pelo menos uma vez por semana.

5. Análise de resultados

1. Após concluir cada execução de análise, transmita dados brutos do instrumento para o software para processamento. O software gera um eletroferograma que é exibido na tela do computador.
2. Analise o eletroferograma e quantifique as intensidades relativas de absorção de cada banda proteica em um comprimento de onda de 200 nm usando o software.
   NOTA: Com base nas concentrações totais de proteínas medidas pelo analisador bioquímico totalmente automatizado, o software calcula a concentração de cada faixa proteica.
3. Use os eletroferogramas gerados para avaliação visual e identificação de bandas anormais.
   NOTA: Por padrão, o sistema exibe eletroferogramas no modo de redesenho.
4. Use um modo padrão para apresentar eletroferogramas iniciais derivados de dados brutos, se necessário.
   NOTA: Os intervalos de referência do analisador eletroforético capilar foram estabelecidos por análise estatística de 246 participantes adultos saudáveis (homens e mulheres) com níveis normais de triglicerídeos (Tabela 1). Recomenda-se que cada laboratório estabeleça seus próprios padrões.

6. Desligamento do instrumento

1. Ao final de cada sequência de análise, inicie o procedimento de desligamento do analisador de eletroforese capilar para armazenar o capilar sob condições ideais.
   1. Para iniciar o procedimento de desligamento, selecione "Desligamento" no menu principal ou use o rack de desligamento fornecido com o analisador.
   2. Pressione "Desligar" no menu principal. Na janela exibida na tela, pressione para iniciar o procedimento. O processo de paralisação começará automaticamente após a conclusão do programa de análise em andamento.
   3. O rack de desligamento está rotulado como "EXTINCTION/SHUTDOWN CAPILLARYS 3 & MC". Insira esse rack no final da fila do sample rack, e o instrumento iniciará automaticamente o procedimento de desligamento.
      NOTA: Quando o procedimento de desligamento é concluído, o instrumento é desligado e a tela será desligada.
2. Use o interruptor físico de energia na parte traseira do instrumento para desconectar o analisador da rede elétrica.
3. Remova todos os frascos de reagentes das duas câmaras de reagentes e armazene-os sob as condições de armazenamento recomendadas. Falhas comuns, possíveis causas e soluções do analisador de eletroforese totalmente automatizado são apresentadas na Tabela Suplementar 1.

7. Parâmetros de desempenho

1. Para determinar a sensibilidade analítica do procedimento de eletroforese capilar, prepare e analise diluições seriadas de uma amostra de soro contendo uma proteína anormal na zona gama a 1,198 g/dL. A maior diluição com anomalia perceptível corresponde a uma concentração de 19 mg/dL da proteína anormal.
   NOTA: Dependendo da posição da proteína anormal e do fundo policlonal na zona gama, o limite de detecção pode variar.
2. Avaliação da precisão – Correlação interna
   1. Para garantir a integridade da amostra, processe todas as amostras de soro (incluindo 18 amostras normais e 100 amostras patológicas) de forma idêntica e manuse-as de acordo com as mesmas diretrizes.
   2. Meça os níveis de cada fração proteica tanto por separações eletroforéticas obtidas com o procedimento eletroforético capilar no analisador quanto por outra técnica comercialmente disponível de eletroforese capilar para análise de proteínas.
   3. Analise os valores medidos de ambos os procedimentos por meio de um procedimento estatístico de regressão linear. Os resultados obtidos demonstraram uma correlação perfeita entre ambos os procedimentos.

Resultados

As posições de migração, características de pico e porcentagens relativas de cada faixa proteica foram analisadas quantitativamente pela detecção da absorção da proteína sérica. A interpretação clínica foi posteriormente realizada com base na presença e no padrão de bandas anormais observadas no eletroferograma. Um eletroferograma capilar representativo mostrando o padrão normal de migração das frações de proteína sérica é mostrado na Figura 1. Variações nos tempos máximos de migração são at...

Discussão

A SPE é uma técnica diagnóstica fundamental em laboratórios clínicos, separando proteínas séricas com base em diferenças em seus pontos isoelétricos, pesos moleculares e^{conformações 19}. Este estudo delineia sistematicamente um protocolo para a rápida detecção e quantificação da proteína M sérica usando CE. O protocolo destaca o excelente desempenho analítico do método, com suas principais vantagens sendo alta sensibilidade, alta taxa de transferência e automação

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
TAMPONADOR DA PROTEÍNA CAPI 3 (E) 6	SEBIA	2503	Tampão de corrida usado para separação de proteínas séricas na eletroforese capilar (referido como tampão de corrida no manuscrito).
Solução de lavagem de lavagem	SEBIA	2062	Solução diluída de enxágue usada para limpar tubos capilares após eletroforese.
Copos reagentes	SEBIA	2582	Para diluição de amostras em instrumentos totalmente automáticos.
CAPILARES DE FILTRO	SEBIA		Filtro descartável usado para filtrar soluções tampão e água desionizada durante a limpeza capilar.
CAPICLEAN	SEBIA	2060	Para limpeza de tubos capilares dos instrumentos CAPILLARYS 3 OCTA (referidos como solução de limpeza capilar no manuscrito)
Solução de hipoclorito de sódio	Fábrica de Reagentes Químicos de Guangzhou	1703079	Para limpeza da sonda de amostra.
Água desionizada	Watsons	/	Usado para enxágue capilar no analisador automático de eletroforese capilar.
Controle de qualidade Randox	Randox	HN1530	Para controle de qualidade.
Analisador totalmente automatizado de eletroforese capilar	SEBIA	CAPILARES 3 OCTA	Instrumento usado para análise de proteínas séricas de alta resolução e alto rendimento.
Software PHORESIS 9.30	SEBIA	/	Software usado para aquisição e análise automatizada de padrões de eletroforese.