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Artigo de método
* These authors contributed equally
Este estudo teve como objetivo desenvolver e validar um método rápido e sensível de cromatografia líquida-espectrometria de massas tandem (LC-MS/MS) para a quantificação do carfilzomibe em plasma humano. O método totalmente validado apoia o monitoramento terapêutico de medicamentos em pacientes com mieloma múltiplo, permitindo assim otimização personalizada da dose.
O carfilzomib, um inibidor de proteassoma de segunda geração, requer monitoramento terapêutico de medicamentos (TDM). Este estudo teve como objetivo desenvolver e validar um método sensível e robusto de cromatografia líquida-espectrometria de massas tandem (LC-MS/MS) para a quantificação do carfilzomibe em plasma humano. Amostras de plasma foram processadas usando precipitação proteica com acetonitrila (ACN). A separação cromatográfica foi alcançada em uma coluna C18 (2,1 mm × 100 mm, 3,5 μm) mantida a 40 °C, com uma fase móvel composta por ACN e 10 mmol/L de acetato de amônio em água (80:20, v/v) entregues a uma vazão de 0,35 mL/min. O método demonstrou excelente linearidade em uma faixa de concentração de 2,00-1000,00 ng/mL. Além disso, foram observadas altas precisões e exatidão intradiárias e interdias, com taxas de recuperação do carfilzomibe variando de 84,1% a 93,0%. Esse método validado de LC-MS/MS permite a determinação precisa, eficiente e sensível das concentrações de carfilzomib no plasma de pacientes com mieloma múltiplo, apoiando assim a otimização da terapia baseada em carfilzomib.
O mieloma múltiplo (MM) é uma malignidade hematológica caracterizada pela proliferação clonal de células plasmáticas na medulaóssea 1. Representa a segunda malignidade hematológica mais comum nomundo 2, representando aproximadamente 10% de todos os câncereshematológicos 3. Ao longo dos anos, avanços na terapia medicamentosa, incluindo a introdução de inibidores de proteasomosmos, fármacos imunomoduladores e anticorpos monoclonais, levaram a melhores resultados terapêuticos. No entanto, uma proporção significativa (20%-30%) dos pacientes com MM continua a apresenta....
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Esse protocolo de pesquisa foi aprovado pelo Comitê de Ética do Segundo Hospital da Universidade Médica Naval (Hospital Changzheng de Xangai). Todos os pacientes inscritos no estudo assinaram o consentimento informado.
1. Instrumentação LC-MS/MS
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Otimização LC-MS/MS
Para otimizar a detecção do carfilzomib, os valores de resposta do analito foram comparados sob modos de ionização positivo e negativo. O modo de ionização negativa gerou uma resposta maior para carfilzomib do que o modo de ionização positiva e, portanto, foi selecionado para análise subsequente. Comparamos o desempenho das colunas C8,C 18 e T3-C18 para selecionar a mais ótima. A coluna C
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Em contraste com os métodos tradicionais HPLC-UV e ELISA, o LC-MS/MS oferece seletividade, sensibilidade e velocidade excepcionais, abordando efetivamente as limitações de seus predecessores. Essas vantagens consolidam seu papel como a técnica padrão ouro para análise de fármacos em biomatrices complexas, especialmente para TDM e investigaçõesfarmacocinéticas 17. Desenvolvemos e validamos um método LC-MS/MS para quantificar carfilzomibe em plasma humano. Uma vanta.......
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Os autores declaram que não possuem interesses financeiros concorrentes conhecidos ou outros conflitos de interesse.
Esse trabalho foi apoiado pela Fundação de Caridade Bethune: Shining China - Financiamento para Capacitação em Pesquisa Farmacêutica (Z04JKM2023E040), Projetos de Cooperação e Intercâmbio Internacional (nº 2014DFA33010) e Programa Líder de Talentos de Xangai do Plano de Talentos do Leste (SHSLJRC-TX)
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Acetonitrila (ACN) | Empresa Merck (Darmstadt, Alemanha) | 34888 | Grau LC-MS |
| Acetato de amônio | Empresa Merck (Darmstadt, Alemanha) | 9689 | Pureza da análise: ≥ 99.0% |
| Balanço de análise | Sartorius (Alemanha)) | Precisão: 0,01 mg | |
| Coluna analítica | Agilent Technologies (EUA) | Agilent ZORBAX SB-C18, 2.1 e vezes; 100 mm, 3,5 e micro; m | |
| Carfilzomib | Biotecnologia yuanye de Xangai (Xangai, China) | 868540-17-4 | Analisar a amostra padrão, pureza > 99% |
| Carfilzomib-d8 | Biotecnologia yuanye de Xangai (Xangai, China) | Analise a amostra padrão, pureza > 98% | |
| Software de aquisição de dados | Agilent Technologies (EUA) | Software de processamento de dados Agilent Masshunter (versão 6.0) | |
| Software de análise de dados | Agilent Technologies (EUA) | Software de análise quantitativa Agilent MassHunter (versão 10.1) | |
| Água destilada | Shenzhen Watsons Distilled Water Co., Ltd (Shenzhen, China) | Grau LC-MS | |
| Frascos e frascos de HPLC; Inserts | Shanghai Titan Technology Co., Ltd. ((Xangai, China)) | - | |
| Sistema de cromatografia líquida | Agilent Technologies (EUA) | A série Agilent 1200 inclui bombas binárias, degasser online, amostrador automático e caixa de temperatura na coluna. | |
| Metanol (MeOH) | Empresa Merck (Darmstadt, Alemanha) | 1.06035 | Grau LC-MS |
| Micropipetas | Eppendorf (Alemanha) | Múltiplas faixas de medição (por exemplo, 10 e micro; L, 100 & micro; L, 200 & micro; L, 1000 & micro; L) | |
| Escritório & Software estatístico | - | Microsoft Office 365; GraphPad Prism 9.5 | |
| Ácido fosfórico | Empresa Merck (Darmstadt, Alemanha) | 49685 | Pureza da análise, 85% em peso |
| Centrífuga refrigerada | Eppendorf (Alemanha) | Para amostras centrifugadas a 4° C | |
| Espectrômetro de massa quadrupolar triplo | Agilent Technologies (EUA) | G6475AA | Série Agilent 1200, equipada com fonte de ionização por eletrospray (ESI) |
| Misturador de vórtice | Labnet (EUA) | S0200 | Velocidade ajustável |
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