Artigo de método

Um modelo combinatório de camundongos de perturbação circadiana e estresse alimentar para investigar a fisiopatologia do envelhecimento acelerado pelo estilo de vida

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DOI:

10.3791/70866

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28 de abril de 2026

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1Department of Chinese Materia Medica, Chengde Medical University, 2School of Pharmacy, Hebei Medical University, 3State Key Laboratory for Innovation and Transformation of Luobing Theory, 4College of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, Hebei University of Chinese Medicine, 5The Second Clinical Medical College, Heilongjiang University of Chinese Medicine

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer um modelo murino de ritmo circadiano desordenado mais dieta rica em gordura e açúcar (HFHS), que imita estilos de vida pouco saudáveis e induz distúrbios metabólicos e fenótipos de envelhecimento.

Resumo

O objetivo desse protocolo é estabelecer um modelo padronizado de camundongos que recapitule os danos multifatoriais induzidos por estilos de vida modernos e pouco saudáveis. Para isso, desenvolvemos um modelo inovador C57BL/6J que combina a disrupção randomizada do ritmo circadiano e uma dieta rica em gordura e açúcar (HFHS), com grupos de HFHS de fator único e de perturbação circadiana como controles. Comparado aos controles, o modelo composto apresentou distúrbios metabólicos mais graves, incluindo aumento do peso corporal, níveis elevados de glicose e lipídios em jejum e esteatose hepática marcante, além de óbvios défices cognitivos e motores. O modelo composto também apresentou envelhecimento acelerado mais significativo, conforme confirmado pelo índice de fragilidade e pela coloração de hematoxilina e eosina (HE). Esse modelo integrado imita de forma confiável o declínio metabólico-cognitivo relacionado ao estilo de vida e o envelhecimento prematuro. Esse protocolo reproduzível passo a passo apoia estudos mecanicistas sobre o envelhecimento mediado pelo estilo de vida e a avaliação de estratégias terapêuticas direcionadas.

Introdução

Estilos de vida modernos acelerados expõem cada vez mais as populações a comportamentos que desregulam o ritmo e dietas obesogênicas, com evidências convincentes que ligam esses fatores ao declínio funcional sistêmico e à patogênese de doençascrônicas 1. Dados epidemiológicos revelam comorbidades marcantes: trabalhadores em turnos apresentam alta prevalência de marcadores metabólicos da síndrome, enquanto a ingestão prolongada de uma dieta rica em gorduras e açúcar está fortemente associada a um risco elevado dedemência 2,3. Esses insultos convergem para impulsionar a patologia multiorgânica — disfunção metabólica frequentemente coincide com declínio cognitivo acelerado e remodelação cardiovascular, demonstrando interferência bidirecional entre deterioração periférica e central. Apesar das sinergias clínicas reconhecidas, modelos pré-clínicos padronizados que capturam a fisiopatologia integrada do declínio dos órgãos induzidos pelo estilo de vida permanecem subdesenvolvidos.

No nível molecular, o desalinhamento circadiano crônico inicia uma cascata patológica originada no núcleo supraquiasmático, interrompendo a sinalização glutamatérgica para o hipotálamo paraventricular e embotando a pulsatilidade do hormônio liberador de corticotropina. Isso prejudica o feedback negativo do eixo hipotálamo-hipófise-adrenal(HPA) 4, causando dessensibilização dos receptores de glucocorticoide e elevação sustentada do cortisol. Consequentemente, a ativação da gliconeogênese hepática e a supressão da fosforilação do substrato do receptor de insulina do músculo esquelético impulsionam coletivamente a resistência periférica à insulina, estabelecendo uma base metabólica para hiperglicemia edislipidemia 5,6. Simultaneamente, ácidos graxos saturados na dieta permeiam a barreira hematoencefálica comprometida por meio da regulação para baixo das proteínas da junção estreitaendotelial 7,8, ativando a sinalização microglial TLR4/NF-κB. Isso desencadeia neuroinflamação9 mediada por TNF-α/IL-1β. O ponto chave é que esses dois fatores de estilo de vida pouco saudável não agem de forma independente, mas sim de forma sinérgica. No entanto, ainda há uma significativa falta de pesquisas sistemáticas sobre a exposição combinada deles na literatura atual. Portanto, é significativo realizar estudos de modelagem integrando a perturbação do ritmo circadiano com dietas ricas em gordura e açúcar como fatores compostos.

Apesar de sua utilidade no estudo de mecanismos isolados de envelhecimento, os modelos murinos atuais não conseguem recapitular a fisiopatologia integrada da deterioração induzida pelo estilo de vida. O envelhecimento natural apresenta uma variabilidade interindividual pronunciada e requer prazos prolongados incompatíveis com a eficiência experimental. Agentes farmacológicos como a doxorrubicina induzem principalmente danos ao DNA e senescência aguda sem replicar desregulação metabólicacrônica 10. Modelos geneticamente modificados têm como alvo vias moleculares simples, ignorando a intercomunicação neuroendócrina-metabólicasistêmica 11,12. A administração de d-galactose, embora induza estresse oxidativo, imita inadequadamente o impacto da perturbação circadiana na ritmicidade dos glicocorticoides ou na neuroinflamação mediada por lipídios na dieta13. Criticamente, intervenções de fator único não conseguem capturar padrões sinérgicos de declínio multiorgânico observados clinicamente. Essa lacuna translacional exige uma plataforma combinatória avançada que incorpore simultaneamente a perturbação crônica da circadiana e estressores alimentares obesogênicos para acelerar fielmente a neurodegeneração interdependente, a disfunção cardíaca e o comprometimento metabólico.

Para resolver essa questão, desenvolvemos um modelo de camundongos C57BL/6J integrando a perturbação circadiana estocástica com uma dieta rica em gordura e açúcar para recapitular insultos sinérgicos do estilo de vida contemporâneo contemporâneos. Submeter camundongos a horários de luz rotativos combinados com alimentação obesogênica sustentada induziu desequilíbrios metabólicos significativamente agravados, incluindo adiposidade elevada, hiperglicemia em jejum e dislipidemia. Avaliações cognitivas revelaram déficits pronunciados na memória espacial e de reconhecimento, enquanto os testes locomotores indicaram redução da resistência. Crucialmente, a quantificação longitudinal do índice de fragilidade demonstrou acúmulo acelerado de déficits relacionados à idade. Nosso paradigma de duplo desafio, portanto, recapitula robustamente o envelhecimento acelerado multifacetado, fornecendo uma plataforma nova e validada para estudar a fisiopatologia orientada pelo estilo de vida.

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Protocolo

Todos os procedimentos experimentais foram aprovados pelo Comitê de Ética em Pesquisa Animal do Instituto de Pesquisa Farmacêutica de Hebei Yiling (Aprovação nº: N2024043). Trinta e dois camundongos machos C57BL/6J de 8 meses (veja Tabela de Materiais) foram alojados em uma instalação específica livre de patógenos (SPF) afiliada ao Centro de Avaliação de Novos Medicamentos, Instituto de Pesquisa Farmacêutica de Hebei Yiling. O ambiente de criação foi mantido sob condições padronizadas: a temperatura ambiente variava de 20–26 °C, a umidade relativa era controlada entre 40% e 70%, e um ciclo de 12 horas de luz e 12 horas de escuridão foi implementado. Os camundongos tinham acesso livre a uma dieta padrão de laboratório para roedores e água potável esterilizada.

1. Estabelecimento de um modelo combinatório de camundongos para a perturbação circadiana e o estresse alimentar (Figura 1)

NOTA: Animais que morreram inesperadamente durante o experimento, apresentaram perda de peso severa ou não completaram o procedimento de modelagem foram excluídos da análise final. O número inicial de animais era 8 por grupo, e o tamanho final válido da amostra era 5 por grupo.

  1. Prepare uma dieta rica em gordura/açúcar (HFHS) (veja Tabela de Materiais) e uma sala independente equipada com um temporizador programável para controle flexível do ciclo luz-escuro antes do experimento.
    NOTA: Armazene a dieta a 4 °C ou -20 °C para evitar oxidação; Leve-o à temperatura ambiente antes do uso para evitar que a condensação afete sua composição.
  2. Adaptação animal e agrupamento aleatório
    1. Abrigue todos os camundongos de 8 meses em condições padrão durante um período de alimentação adaptativa de 7 dias antes de iniciar o experimento.
    2. Distribuir aleatoriamente os camundongos em quatro grupos com base no peso corporal (n = 8 por grupo) após o período de adaptação: grupo controle, grupo modelo combinado de estresse (Modelo), grupo HFHS e grupo de estresse de perturbação do ritmo circadiano (CR).
  3. Administrar uma intervenção de 8 meses da dieta HFHS combinada com a perturbação do ritmo circadiano ao grupo modelo combinado de estresse. Alimente o grupo HFHS apenas com uma dieta HFHS pelo mesmo período.
  4. Expõe o grupo CR apenas à perturbação do ritmo circadiano. Alimente o grupo controle com uma dieta padrão de manutenção durante todo o experimento. Ofereça acesso gratuito à água potável para todos os animais.
    NOTA: A intervenção de 8 meses pode ser pausada temporariamente (por exemplo, para exames de saúde de rotina de camundongos) sem afetar o resultado experimental, e a intervenção pode ser retomada após a conclusão do exame.
  5. Protocolo de interrupção do ritmo circadiano (Figura 2A,B)
    1. Use um temporizador programável (veja Tabela de Materiais) para controlar de forma flexível o ciclo semanal de luz e sombra. Aplique quatro regimes de luz distintos: comutação rápida de luz e escuridão (alternando luz e escuridão a cada 7 minutos por 2 horas consecutivas diárias), ciclo inverso de luz-escuro (luzes apagadas às 8:00 e acesas às 20:00 diariamente), luz constante (iluminação 24 horas) e escuro constante (escuridão 24 horas).
    2. Gerar uma sequência aleatória usando software estatístico (linguagem R, com uma semente aleatória fixa) no início de cada semana. Atribua aleatoriamente os quatro modos de luz a cada dia da semana para garantir que cada modo seja aplicado consecutivamente por 1–2 dias.
  6. Forneça a dieta HFHS aos camundongos ad libitum e monitore a ingestão de alimentos semanalmente. A composição detalhada da dieta HFHS é apresentada na Tabela 1.
    NOTA: A inspeção do suprimento de alimentos é necessária para evitar subalimentação ou privação de alimentos.
  7. Pese os camundongos semanalmente em um horário fixo (9h00 às quintas-feiras) usando uma balança eletrônica durante o período de intervenção de 8 meses. Registre todos os dados de peso corporal em detalhes.
    NOTA: Realize o processo de pesagem rapidamente (cada sessão concluída em menos de 30 segundos) para minimizar o estresse e a interrupção do ritmo circadiano.

2. Reconhecimento de objetos inovadores

  1. Coloque os camundongos em uma caixa de teste de 60 cm × 60 cm × 40 cm um dia antes do treinamento, e permita que explorem livremente por 5 minutos para se acostumarem ao ambiente de teste.
    NOTA: Remova fezes e urina da caixa após cada teste. Limpe a caixa com etanol 75% para eliminar odores residuais.
  2. Coloque dois cilindros idênticos (A e B) nos cantos inferior esquerdo e inferior direito da caixa de teste, respectivamente. Introduza cada mouse na caixa voltada para longe dos objetos e permita que o mouse explore livremente por 5 minutos.
    1. Alterne aleatoriamente as posições esquerda-direita dos dois cilindros entre os sujeitos para evitar viés posicional.
    2. Após o treinamento de exploração de 5 minutos, pause o experimento por até 23 horas e complete a etapa subsequente de substituição de objeto novo (passo 2.3) dentro de 24 horas após o treinamento para garantir a validade do teste de reconhecimento.
  3. Substitua o objeto A no canto inferior esquerdo por um cubo novo (objeto C) 24 horas após o treinamento. Ative a câmera aérea. Coloque o mouse na caixa e registre o comportamento por 5 minutos.
    NOTA: Use um objeto novo que seja semelhante em tamanho aos objetos familiares, mas distintamente diferente em material, cor ou textura para garantir que o mouse reconheça sua novidade.
  4. Analise os vídeos usando o sistema de rastreamento de vídeo (veja Tabela de Materiais).
    1. Defina exploração como o camundongo orientando seu focinho em direção ou a menos de 2 cm de um objeto. Registre o tempo gasto explorando o objeto familiar (TB) e o objeto novo (TC).
    2. Calcule um índice de reconhecimento de acordo com a seguinte fórmula: Índice de reconhecimento = TC / (TB + TC) × 100%.
      NOTA: Mantenha o analista cego para os grupos experimentais para evitar viés subjetivo; Excluem sistematicamente comportamentos não exploratórios, como escalar ou roer, dos registros de tempo de exploração.

3. Teste de força de aderência

  1. Meça a força de aderência dos membros anteriores dos camundongos usando um medidor de forçade pega 14 (veja a Tabela de Materiais). Gire o medidor de força 90 graus verticalmente e fixe-o firmemente em um suporte metálico antes de cada sessão de teste para garantir a imobilização completa do sistema.
  2. Segure o rato suavemente pela base da cauda. Permita que as patas dianteiras agarrem a barra naturalmente. Ajuste o medidor depois que a leitura estabilizar, depois puxe a cauda horizontalmente para trás em uma velocidade constante e lenta até que o mouse solte a pega.
  3. Registre a força máxima máxima (kgf) no momento da liberação como força de pegada. Realize três testes consecutivos por mouse por dia. Use a média de três medições para análises subsequentes.
    NOTA: Mantenha a velocidade de puxada uniforme e suficientemente lenta para permitir que o mouse gere resistência total contra a puxada.
  4. Exclua qualquer teste da análise se ocorrer uma das seguintes condições: o camundongo usa apenas uma pata dianteira, os membros posteriores tocam a barra ou contribuem para a pegada, o rato torce o corpo durante o puxar, ou a barra é liberada sem resistência ativa.
    NOTA: Sinalize ensaios ambíguos ou fora do comum para revisão. Repita as medições quando necessário.

4. Índice de fragilidade (FI)

NOTA: Calibre todos os parâmetros do equipamento para configurações padronizadas antes do teste. Limite o tempo total de avaliação de cada camundongo a menos de 30 minutos para evitar mudanças fenotípicas induzidas pela fadiga. Realize todos os exames dentro de uma janela fixa da manhã (9:00–12:00) para minimizar os efeitos do ritmo circadiano.

  1. Jejue os camundongos por 12 horas com livre acesso à água antes do teste para minimizar os efeitos agudos da ingestão de alimentos nas medições fisiológicas.
  2. Mova os camundongos para o ambiente de teste 30 minutos antes da avaliação para aclimatá-los e reduzir a interferência relacionada ao estresse.
  3. Exclua camundongos com condições patológicas graves, como tumores, infecções ou deformidades nos membros, para evitar efeitos de confusão na avaliação da fragilidade.
  4. Avalie o índice de fragilidade com base em 31 indicadores fenotípicos de déficit em cinco domínios: função motora, estado nutricional, função sensorial, atividade e comportamento espontâneos, e defeitosfisiológicos 15,16.
    NOTA: Os 31 itens específicos da avaliação abrangem cinco domínios, incluindo: função motora (7 itens como diminuição da força de empunhadura, marcha anormal e redução da capacidade de escalada), estado nutricional (6 itens como perda de peso, diminuição da pontuação de condição corporal e redução da ingestão alimentar), função sensorial (5 itens como deficiência visual, audição e embotamento tátil), atividade espontânea e comportamento (7 itens como redução da atividade espontânea, diminuição do comportamento de tosa e redução do comportamento exploratório), e defeitos fisiológicos (6 itens como defeitos oculares, defeitos de ouvido e defeitos de pele). Todos os itens adotam um método binário de pontuação (0 = sem defeito, 1 = com defeito), e o índice final de fragilidade = número total de itens defeituosos / 31.
  5. Designe dois pesquisadores cegos para os grupos experimentais para realizar todas as avaliações de forma independente.
  6. Avalie cada indicador como 0 (sem déficit) ou 1 (déficit) de acordo com critérios pré-definidos que abrangem força de pegada, velocidade de marcha, mudança de peso corporal, condição do pelagem, resposta sensorial, capacidade de atividade espontânea e anormalidades físicas.

5. Detecção de glicose no sangue em jejum

NOTA: Mouse rápido por 12 horas com livre acesso à água para minimizar os efeitos agudos relacionados à alimentação na glicose no sangue. Realize medições entre 9:00 e 12:00 para reduzir as flutuações circadianas. Calibre o glicosômetro com uma solução padrão de glicose antes do experimento para consistência entre lotes.

  1. Imobilize delicadamente os camundongos e desinfete as pontas da cauda com 75% de etanol. Faça uma incisão de 1–2 mm nas veias caudais usando uma lanceta descartável estéril. Descarte a primeira gota de sangue para evitar contaminação do fluido tecidual.
  2. Colete um pequeno volume de sangue capilar e analise-o imediatamente usando um glicosômetro portátil (veja a Tabela de Materiais) com tiras de teste compatíveis. Teste cada amostra em duplicado para garantir a precisão dos dados.

6. A detecção de lipídios no sangue incluiu colesterol total (CT)

NOTA: Exclua amostras com hemólise ou turbidez severa da análise. Medições repetidas com coeficiente de variação > 10% entre triplicados.

  1. Coloque o sangue coletado em tubos não anticoagulantes. Deixe coagular naturalmente em temperatura ambiente por 2 horas. Centrifuge amostra a 1000 × g por 15 minutos a 4 °C para separar o soro.
    NOTA: Certifique-se de que a centrífuga esteja devidamente balanceada antes da operação e feche a tampa interna de segurança com segurança.
  2. Aspire cuidadosamente a camada superior do soro, faça uma aliquota e armazene imediatamente a -80 °C para evitar a oxidação dos lipídios.
    NOTA: Após a aliquotação do soro e o armazenamento a -80 °C, o experimento pode ser pausado por vários dias a semanas; A subsequente detecção de colesterol total (Passo 6.3) pode ser realizada quando o kit de teste e o equipamento estiverem prontos, garantindo que o soro não seja congelado e descongelado repetidamente.
  3. Meça os níveis de colesterol total sérico usando um kit comercial de teste TC da Greiss (veja a Tabela de Materiais) conforme as instruções do fabricante. Testar cada amostra em triplicado e executar amostras de referência padrão simultaneamente para calibração.

7. Coloração por hematoxilina-eosina (coloração HE)

  1. Anestesiar camundongos com pentobarbital de sódio (20 mg/kg) em testes pós-comportamentais.
  2. Colete sangue via plexo venoso retroorbital. Dissecar tecidos e fixar com paraformaldeído a 4% por 48 horas.
    NOTA: Após fixação de tecido em paraformaldeído a 4% por 48 horas, o experimento pode ser pausado; tecidos fixos podem ser armazenados em paraformaldeído a 4% a 4 °C por até 1 semana antes de avançar para a etapa de desidratação (passo 7.3).
  3. Tecidos fixos desidratados com um processador automatizado usando uma série graduada de etanol (60%, 70%, 90% etanol por 1 hora cada; 95%, 100% etanol por 2 horas cada).
    ATENÇÃO: O etanol é um líquido inflamável com baixo ponto de inflexão. Mantenha-se longe de chamas abertas, fontes de calor e faíscas durante o armazenamento e a operação. Use em um local bem ventilado, use luvas não estáticas e jaleco. Evite armazenamento em grande volume na área experimental; Guarde em um armário dedicado para líquidos inflamáveis.
  4. Limpe os tecidos desidratados em xileno por 2 horas, depois infiltre com parafina a 60 °C por 3 horas (veja Tabela de Materiais). Embutido tecidos orientados para planos anatômicos padrão.
    NOTA: O tempo de limpeza não deve ser excessivamente longo para evitar a fragilidade dos tecidos; Mantenha uma temperatura constante de parafina durante a infiltração para evitar a cristalização. Após a incorporação com parafina, os blocos de tecido embutidos podem ser armazenados em temperatura ambiente por vários meses, e a etapa de seccionamento (passo 7.5) pode ser realizada quando necessário.
  5. Uma vez que os blocos de parafina solidificam completamente, corte seções contínuas de 4 μm com um fatiador de parafina (veja Tabela de Materiais), transfira para lâminas revestidas com poli-L-lisina, sece ao ar em temperatura ambiente e depois sele para armazenamento.
    NOTA: Após a montagem em seção e a secagem ao ar, os lâminas podem ser armazenados em temperatura ambiente em ambiente livre de poeira por até 1 mês antes de avançar para a etapa de tingimento (passo 7.6).
  6. Seções de tingimento com sistema automático de coloração (veja Tabela de Materiais).
    1. Desparafinize no xileno I e xileno II (10 min cada).
    2. Reidrate com uma série descendente de etanol (100%, 95%, 80%, 2 minutos cada), depois enxágue com água destilada.
    3. Tinga com hematoxilina por 3 a 8 minutos até que os núcleos fiquem claramente visíveis, enxágue sob água corrente para promover o azulamento e contra-colore com eosina por 1 a 3 minutos para obter uma coloração citoplasmática rosada adequada.
  7. Desidrate as seções manchadas em álcool absoluto, transparente em xileno e monte com bálsamo neutro para análise por scanner de lâminas (veja Tabela de Materiais).

8. Mancha O em vermelho óleo

  1. Incorpore tecidos frescos do fígado em composto de temperatura de corte (OTC) (veja a Tabela de Materiais) em até 30 minutos após a coleta.
    NOTA: Após a incorporação de tecidos hepáticos frescos em composto OTC, os tecidos embutidos podem ser armazenados a -80 °C por até 1 mês antes da secção (passo 8.3), evitando congelamentos e descongelamentos repetidos.
  2. Coloque tecidos embutidos em um criostato e deixe congelar completamente antes de seccionar.
  3. Ajuste a temperatura do criostato para -22 °C e corte blocos de tecido totalmente congelados em seções consecutivas de 8 μm de espessura.
  4. Transfira as seções diretamente para lâminas de vidro não revestidas e achate suavemente para garantir uma adesão firme entre as seções e as lâminas.
  5. Fixe as lâminas com formalina neutra em temperatura ambiente por 10 minutos. Imediatamente após a fixação, enxágue as seções com isopropanol a 60% por 5 segundos.
  6. Coloque seções pré-tratadas em uma câmara de umidade, adicione uma solução de coloração de óleo vermelho O (veja a Tabela de Materiais) e incube por 20 minutos.
  7. Após a coloração, diferencie as seções com 60% de isopropanol até que as gotículas lipídicas e os limites do tecido intersticial fiquem claramente distinguíveis.
    NOTA: Monitore de perto as seções durante a diferenciação para evitar superdiferenciação, que causa manchação desbotada.
  8. Examinar seções diferenciadas coloridas sob um microscópio óptico para observar alterações histopatológicas relacionadas à deposição lipídica hepática.
    NOTA: Após a coloração e diferenciação, as seções podem ser armazenadas a 4 °C por até 3 dias antes do exame microscópico, garantindo que o efeito de coloração não seja afetado.

9. Análise estatística

  1. Expresse todos os dados experimentais como média ±± erro padrão da média (SEM)
  2. Aplique o teste de Shapiro-Wilk para verificar se os dados seguem uma distribuição normal. Realize o teste de Levene para avaliar a homogeneidade da variância entre os grupos, caso a normalidade seja confirmada.
    NOTA: Aplique testes não paramétricos diretamente se os dados não atenderem à suposição de normalidade.
  3. Utilize a análise unidirecional da variância (ANOVA) para testar a significância estatística das diferenças gerais entre múltiplos grupos e realize comparações par a par usando o teste de diferença mínima significativa (LSD) de Fisher.
    NOTA: Use a ANOVA de Welch quando as variâncias forem heterogêneas.
  4. Use um teste t de Student bidirecionado para comparações entre dois grupos amostrais independentes.
  5. Defina significância estatística como um valor-p bilateral < 0,05. Realize todas as análises estatísticas usando software de análise estatística.

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Resultados

Exacerbação sinérgica da patologia metabólica em coortes de dupla exposição
O monitoramento longitudinal do peso corporal revelou trajetórias de crescimento distintas entre as coortes. O grupo modelo e o grupo HFHS apresentaram ganho de peso acelerado em comparação com os grupos Controle e CR. Notavelmente, o grupo CR demonstrou aceleração modesta em relação ao Controle (Figura 3A). Evidências adicionais de disfunção metabólica foram forn...

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Discussão

Pesquisas contemporâneas confirmaram inequivocamente que a perturbação circadiana e uma dieta rica em gordura e açúcar são dois fatores independentes do declínio funcional sistêmico do organismo. Nossos dados demonstram que o dano patológico induzido pela ação combinada desses dois fatores é muito mais severo do que o simples efeito aditivo de qualquer um deles isoladamente. Comparado aos grupos de intervenção de fator único, o grupo modelo composto não mostrou diferença significativa na...

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Divulgações

Os autores não têm nada a revelar.

Agradecimentos

Esse trabalho foi apoiado pelo Projeto do Programa de Ciência e Tecnologia de Hebei (246W2501D, 252W7716D), Programa S&T de Hebei (24462501D) e Plataforma Dourada de Yanzhao (A20240022).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
ANY-mazeScienceSA225
Accu-Chek Active Blood Glucose MonitorSwitzerland, Roche Diagnosticsaccu check active
C75BL/6J miceBEIJING HFK BIOSCIENCE CO.,LTDNo.110324241101250228
Grip strength meterUSA, Columbus Instruments1027CSM-E54
High-fat and high-sucrose dietChina, Xietong Biotechnology Co., Ltd.XT303
HistoCore MULTICUT - Semi-Automated Rotary MicrotomeGermany, LeicaRM2245
Oil Red O solutionChina, Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd.G1260
Optimal cutting temperature compoundJapan, Sakura4583
Programmable Timer SocketChina, GONEOGND-1
Tissue Tech Prisma PlusJapan, Sakura20B2X00014000034
Tissue-Tek TEC 6 Embedding ModuleJapan, SakuraM01-021E-02
Total Cholesterol (TC) Assay KitChina, Suzhou Grace Biotechnology Co., Ltd.G0909W

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