Artigo de método
Este estudo utilizou um diagrama manual de identificação de cultivares (MCID) derivado de padrões de bandagem de DNA Polimórfico Amplificado Aleatório (RAPD) para identificar de forma eficiente e reprodutiva 61 cultivares de Camellia oleifera Abel para utilização de recursos de germoplasma e identificação de cultivares de chá oleoso.
É fundamental identificar materiais e cultivares de germoplasma de Camellia oleifera Abel [Chá de óleo (Ot)] para avaliar os recursos de germoplasma e avaliar os mecanismos de proteção das variedades Ot. Esse estudo utilizou uma técnica otimizada de RAPD aumentando o comprimento do primer RAPD e triando a temperatura de recozimento por PCR, que identificou 61 cultivares Ot de várias regiões. Além disso, foi desenvolvido um MCID para projetar marcadores RAPD eficientes para identificação de cultivares. De 80 primers arbitrários de 11-nt do RAPD, 10 primers produzindo bandas polimórficas claras (PBs) foram selecionados para análise por PCR das 61 cultivares. Além disso, a estratégia MCID foi empregada para distinguir manualmente 61 cultivares com base nos PBs observados nas impressões digitais de DNA dos 10 primers, que geraram o diagrama de identificação de cultivares Ot (Ot-CID). Este Ot-CID indicava cada cultivar individualmente, utilizando PBs para identificação, com os espoletas apropriados posicionados corretamente no Ot-CID. A estratégia MCID oferece uma abordagem simples e prática para identificação de plantas usando marcadores de DNA. Além disso, essa abordagem oferece um método prático e eficiente para identificação de cultivares. O Ot-CID resultante, com 61 cultivares Ot, distinguiu efetivamente as variantes Ot usando marcadores RAPD, facilitando assim a diferenciação de cultivares para proteção do direito do cultivar e identificação precoce de mudas na indústria de viveiros.
Camellia oleifera Abel [Chá de óleo (Ot)] é uma das espécies de árvores oleógicas mais importantes do mundo1. A China é considerada o centro de origem e diversidade da Ot, com abundantes recursos de germoplasma2. A antiga tradição do Ot, a propagação vegetativa e os diversos programas globais de melhoramento resultaram no surgimento de inúmeroscultivares. O cultivo global generalizado da cultura Ot resultou em cultivares com homônimos (cultivares distintos com o mesmo nome) e sinônimos (cultivares com mais de um nome)4. Portanto, é....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
1. Material vegetal
2. Extração de DNA genômico
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Os Resultados Representativos apresentados aqui ilustram o fluxo de trabalho completo da estratégia RAPD-MCID, desde a triagem inicial dos primers passando pela discriminação hierárquica de cultivares até a validação final. O processo de discriminação passo a passo está documentado nas Figuras 2, Figuras 3, Figuras 4,
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Marcadores de DNA são ferramentas poderosas usadas para identificar cultivares de plantas eespécies 24. Esses marcadores foram desenvolvidos e empregados em milhares de estudos sobre análise genética, identificação de cultivares, etc.; no entanto, eles não são fáceis nem amplamente utilizados nagenotipagem 24,31. Isso se deve à falta de métodos eficientes e fáceis que utilizem marcadores de DNA pa.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Os autores não têm interesses financeiros concorrentes ou outros conflitos de interesse a declarar.
Contribuição dos autores:
Mengqi Wang e Xin Sun conceberam e projetaram o experimento. Xin Sun, Hongcai Lin e Mengqi Wang realizaram a pesquisa. Hongcai Ling, Juanjuan Hu e Jie Wang analisaram os dados. Xin Sun e Mengqi Wang escreveram o manuscrito.
Esta pesquisa foi financiada pelo Projeto de Pesquisa e Inovação Florestal da Província de Anhui (Documento nº 4 [2024]), Programa de Treinamento em Inovação e Empreendedorismo para Estudantes Universitários (202510376001), Fundo de Startup de Pesquisa para Talentos de Alto Nível da Universidade de West Anhui (WGKQ2024004; WGKQ2024005), Projeto de Pesquisa em Ciências Naturais do Comitê Educacional de Anhui (2025AHGXZK40775), Programa de Pesquisa Científica de Pós-Doutorado da Província de Anhui (2024A767), Programa de Destacamento de Empreendimento da Faculdade de Ciência-Tecnologia de Anhui (2024jsqygz79).
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Centrifuge | Eppendorf,Germany | 5427R | Usado para extração de DNA genômico de folhas de chá de óleo |
| Hi-DNAsecure Plant Kit | Tiangen, China | DP350 | Usado para extração de DNA genômico de folhas de chá de óleo |
| Instrumento de amplificação gênica PCR | Monad, China | MP60901 | Usado para amplificação PCR |
| SolarRed Agarose LE | Solarbio, China | A8202 | Usado para eletroforese de fragmentos de PCR |
| TAE | Tsingke, China | TSG001 | Usado para eletroforese de fragmentos de PCR |
| TaKaRa Ex Taq | Takara, Japão | RR001A | Usado para amplificação PCR |
| Espectrofotômetro Thermo Scientific NanoDrop 2000C | ABI,EUA | Usado para determinar a concentração de RNA |
Solicitar permissão para reutilizar o texto ou as figuras deste artigo JoVE
Solicitar permissão