Aqui nós mostramos o nosso método para isolar do mouse epidérmicas células da crista neural haste (EPI-NCSC). Técnica envolve a micro-dissecando folículos bigode, isolando o bojo e placeing-lo em cultura de tecidos. EPI-NCSC começam a emigrar a partir de explantes saliência para o substrato dentro de 3-4 dias.
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Artigo de método
Rato Epidérmico Neural Stem Cell Crest (EPI-NCSC) Culturas
Neste artigo
Resumo
Resumo
EPI-NCSC são remanescentes da crista neural embrionária em um local adulto, o bojo dos folículos pilosos. Eles são células-tronco multipotentes que têm a propriedade fisiológica de gerar uma grande variedade de tipos de células diferenciadas, inclusive neurônios, células nervosas de apoio, células musculares lisas, osso / células de cartilagem e melanócitos. EPI-NCSC são facilmente acessíveis na pele aveludada e podem ser isoladas como uma população altamente puro de células-tronco. Este vídeo fornece um protocolo detalhado para a preparação do mouse EPI-NCSC culturas de folículos bigode. A almofada de bigode de um rato adulto é removido, e os folículos whisker dissecados. Os folículos são então cortadas longitudinalmente e, posteriormente, transversalmente acima e abaixo da região bojo. A protuberância é removida a cápsula de colágeno e colocados em uma placa de cultura. EPI-NCSC começam a emigrar de explantes bojo 3-4 dias depois.
Protocolo
Dissecção do Bulge de Folículos Whisker Adulto rato
- Usamos 10 semanas a 6 meses ratos velhos. Ratos mais jovens, muitas vezes produzir mais células. Euthanize rato e animal submerge inteiro em 1:01 mistura de betadine (solução de iodo) e peróxido de hidrogênio (disponível em farmácias) para cerca de 3 minutos.
- Squirt do mouse todo, especialmente a região facial, com etanol 75%, e levar o mouse para microscópio de dissecção em capela de fluxo laminar.
- Dissecar almofadas bigode, evitando cuidadosamente corte em bulbos capilares e piscina em HBSS.
- Dissecar folículos bigode e piscina em HBSS à temperatura ambiente. Fazer iss....
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Discussão
Em virtude da sua capacidade migratória, EPI-NCSC pode ser isolado como uma população altamente puro de células-tronco, que podem ser expandidos in vitro. Como restos embrionários em um local adulto, EPI-NCSC são candidatos potencialmente atraente para futuras terapias com células de substituição, engenharia biomédica e / ou medicina regenerativa. Nós testamos EPI-NCSC em um modelo do rato de lesão da medula espinhal, onde eles mostram características desejáveis. Através do perfil de expressão gênica por LongSAGE (www.ncbi.nlm.nih.gov / geo.......
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Agradecimentos
Apoiado por: USPHS conceder NS38500, Instituto Nacional de Distúrbios Neurológicos e Derrame, NIH, EUA; Alliance Tecnologia Biomédica da Southeastern Wisconsin, Milwauke, WI, EUA; Bryon Paralysis Foundation Riesch, Milwaukee, WI, EUA; Ordem Fraternal de Eagles, Centro-Oeste Capítulo , EUA; National Spinal Cord Injury Association, Capítulo Milwaukee, EUA; North East England Stem Cell Institute, da Universidade de Newcastle, no Reino Unido.
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Referências
- Sieber-Blum, M., Grim, M., YF, H. u, Szeder, V. Pluripotent neural crest stem cells in the adult hair follicle. Dev. Dyn. 231, 258-269 (2004).
- Sieber-Blum, M., Grim, M. The adult hair follicle - cradle for pluripotent neural crest stem cells. Birth Defects....
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Reimpressões e permissões
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