Isolamento de Células-Tronco Hematopoéticas início de murino saco vitelino e AGM

Resumo

Este vídeo mostra como micro-dissecar o saco vitelino e aorta-gônadas-mesonefro região a partir de embriões e uso de citometria de fluxo para classificar as células-tronco hematopoiéticas.

Resumo

No embrião de rato, hematopoiese precoce ocorre simultaneamente em múltiplos órgãos, que inclui o saco vitelino e aorta-gônadas-mesonefro região. Estas regiões são fundamentais na definição do sistema sanguíneo nos embriões e leva ao movimento eventual de células-tronco no fígado fetal e, em seguida, o desenvolvimento de células-tronco adultas na medula óssea. Início de células-tronco hematopoéticas podem ser isolados a partir desses órgãos através da microdissecção do embrião seguido de triagem de citometria de fluxo para obter uma população mais puro. Ainda não está claro como estas populações de células-tronco contribuem para a piscina fetal e células-tronco adultas. Além disso, nosso laboratório investiga como as células-tronco no início funcionalmente diferem fetal e adulto de células-tronco hematopoiéticas. Além disso, classifica o nosso laboratório de diferentes populações de células-tronco hematopoéticas e testar seu papel funcional no contexto de uma variedade de modelos genéticos. Neste vídeo, demonstramos o processo de micro-dissecção que utilizamos com freqüência e também mostrar os resultados de um plotfter FACS típico isolar estas populações raro, é possível executar uma variedade de testes funcionais, incluindo: testes de colônia e transplantes de medula óssea.

Protocolo

Dissecção e isolamento das primeiras células-tronco hematopoéticas de camundongos saco vitelino e aorta-gônadas-mesonefro região

1. Antes de começar, é importante ter todos os reagentes e as ferramentas necessárias para o procedimento:
   
   • Tesoura
   • Fórceps, tamanho 4, e grau cirúrgico com ponta dobrada fórceps, tamanho 5 / 45 (opcional)
   • 30 agulhas com seringa
   • 35mm e 100 milímetros placas de Petri
   • PBS com 10% e 20% de soro fetal bovino
   • e, finalmente, colagenase
2. Para começar a dissecção, precisamos colher os cornos uterinos de uma fêmea grávida em 10,5 concepção pós dias.
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