Estudando Biogenesis de membrana com um ensaio de luciferase Gene-Based Reporter

Resumo

Aqui, descrevemos os procedimentos para estudar mudanças na fagocitose induzida por expressão de genes com uma abordagem gene luciferase baseado repórter usando o Dual-GloTM Sistema de ensaio de luciferase da Promega.

Resumo

Para estudar a coordenação de diferentes vias de síntese de lipídios durante a biogênese membrana é útil para trabalhar com um sistema experimental, onde biogénese da membrana ocorre rapidamente e de forma induzida. Descobrimos que a fagocitose de esferas de látex é prático para esses fins como células rapidamente sintetizar lipídios de membrana para reabastecer piscinas membrana perdido como material de acondicionamento durante a imersão de partículas. Aqui, descrevemos os procedimentos para estudar mudanças na fagocitose induzida por expressão de genes com uma abordagem gene luciferase baseado repórter usando o Dual-Glo Sistema de ensaio de luciferase da Promega.

Protocolo

Cultura de células

1. Culturas estoque de rim embrionário humano 293 (HEK293), as células são cultivadas em 10 cm de placas de cultura em 'A médio ", consistindo de Medium Modified Dulbecco Águia (DMEM) suplementado com um coquetel de antibióticos (100 unidades por ml de penicilina e 100 mg por ml de sulfato de estreptomicina) e 10% de soro fetal bovino (FBS).
2. Para configurar as células de um experimento, o meio é sugada, e as células são lavadas duas vezes com 5 ml de solução tampão fosfato (PBS).
3. O PBS é então removido e substituído por 0,6 ml de uma solução contendo tripsina 0,25%.
4. O prato é incubada a 37 ˚ C por cerca de 2....