Visualização de Microrganismos do Solo por Meio do Ensaio de Lâmina de Contato e Microscopia

1. Preparação do Microcosmo do Slide do Solo

1. Colete o solo do jardim da superfície (profundidade de 0-6" e pese 150 g de solo em duas xícaras separadas.
   1. Se o solo tem alta densidade de matéria orgânica, pesa 100 g.
2. Rotule uma xícara de "Tratamento" e a outra "Controle".
3. Calcule a quantidade de água necessária para alterar o teor de umidade.
   1. O teor de umidade é muitas vezes próximo da capacidade de campo.
      
4. Meça a quantidade de água destilada com um cilindro graduado.
5. Despeje a quantidade de água destilada em dois frascos.
6. Rotule um frasco de "Tratamento" e o outro "Controle".
7. Altere a água no frasco "Tratamento" com glicose suficiente para uma concentração final de glicose do solo de 1%, de acordo com uma base de peso seco no solo "Tratamento".
8. Adicione 200 mg NH₄NO₃ no frasco "Tratamento" e mexa para dissolver as alterações. O nitrato serve como uma fonte de nitrogênio de nutrientes para os micróbios do solo.
9. Não altere o frasco "Controle".
10. Em pequenas alíquotas de aproximadamente 50 mgs, misture o conteúdo do frasco de "Tratamento" no copo "Tratamento". Mexa com uma espátula após cada adição de alíquota.
11. Em pequenas alíquotas, misture o conteúdo do frasco "Controle" no copo "Controle". Mexa com uma espátula após cada adição de alíquota.
12. Rotule quatro slides de microscópio limpos: dois slides "Treatment" e dois slides "Control".
13. Insira os dois slides "Treatment" no copo de solo "Treatment" e insira os dois slides "Control" no copo de solo "Control". Deixe 2 cm de cada slide projetando acima da superfície do solo, e certifique-se de deixar uma lacuna entre os dois slides.
14. Cubra os copos com plástico e fixe-o com um elástico.
15. Puna o envoltório várias vezes para permitir o ar, mas ainda assim evitar a evaporação excessiva.
16. Registo o peso das duas xícaras.
17. Incubar os copos cheios de solo à temperatura ambiente em uma área/incubadora designada por 7 dias.

2. Mancha de slides e microscopia

1. Registo o peso das duas xícaras.
2. Calcule a umidade do solo no momento da remoção do slide.
3. Remova os dois slides de cada xícara pressionando cada slide para uma posição inclinada e retirando para que a face superior do slide não seja perturbada.
4. Identifique e marque o lado do slide a ser manchado e observado.
5. Toque suavemente os slides na parte superior do banco para remover grandes partículas do solo.
6. Usando uma toalha de papel úmida, limpe a face inferior dos slides. Seque os slides à temperatura ambiente.
7. Usando óculos de proteção e segurando cada lâmina com fórceps, mergulhe os slides em 40% (v/v) ácido acético por 1-3 min sob um capô de fumaça.
8. Lave o excesso de ácido sob um fluxo suave de água.
9. Usando uma garrafa de porta-gotas, cubra a superfície dos slides com a fenólica Rose Bengala. Apoie o slide em um rack de manchas sobre um recipiente para pegar o excesso de mancha. Tenha cuidado, não lave com força que possa remover microrganismos da superfície dos slides.
10. Manche os slides por 5-10 min. Não deixe o slide ficar seco. Adicione mais manchas conforme necessário.
11. Lave delicadamente as lâminas para remover o excesso de manchas.
12. Deixe os slides secarem à temperatura ambiente.
13. Utilizando o objetivo de imersão do óleo, observe o slide usando um microscópio(Figura 1).

Figura 1. Um slide sob um microscópio.