Question 1

Qual é a estrutura de um bacteriófago?

Accepted Answer

Os bacteriófagos são vírus que consistem em um genoma de ácido nucleico, seja DNA ou RNA, rodeado por uma capa proteica chamada capsídeo. Alguns fagos têm uma membrana lipídica adicional e apêndices de superfície em forma de espículas ou caudas. Essas partículas ultramicroscópicas são muito pequenas para serem vistas com um microscópio óptico e só podem ser vistas usando um microscópio eletrônico.

Question 2

Como os bacteriófagos infectam e se reproduzem nas células bacterianas?

Accepted Answer

Os bacteriófagos se ligam à superfície da célula bacteriana e injetam seu material genético no hospedeiro. O genoma viral é replicado e as proteínas da cápsula são produzidas usando a maquinaria bioquímica da célula hospedeira. Uma vez que as partículas de fago se montam, elas são liberadas por lise da célula hospedeira, frequentemente estourando e matando a bactéria no processo.

Question 3

O que é um ensaio de placa e como ele mede a concentração de fagos?

Accepted Answer

Um ensaio de placas mistura fagos com bactérias e ágar macio sobreposto em placas de ágar regular. As bactérias formam um gramado contínuo e, quando os fagos infectam e lisam as bactérias, placas se formam como zonas claras. Contar placas discretas e calcular unidades formadoras de placas (PFU) por mililitro determina a concentração original de fagos na amostra.

Question 4

Por que os colifagos são indicadores úteis de contaminação da água?

Accepted Answer

Os colifagos infectam E. coli, uma bactéria intestinal comum que indica contaminação fecal. Eles são indicadores substitutos confiáveis para enterovírus causadores de doenças que também são transmitidos por via fecal, mas difíceis de analisar. Métodos de enumeração rápidos e baratos tornam os colifagos ferramentas atraentes para avaliar a contaminação fecal em ambientes amostras de água.

Question 5

Que condições são necessárias para preparar bactérias em um ensaio de placa?

Accepted Answer

As bactérias devem estar na fase logarítmica de crescimento para garantir que cada bactéria esteja viva e permita que o fago produza progênie. Três horas antes do ensaio, inocule o cultivo da noite anterior em caldo fresco e incube a 35-37°C com agitação. Este tempo garante que as bactérias atinjam a atividade metabólica ideal para suportar a replicação do fago.

Question 6

Como os ensaios de placas podem ser adaptados para detectar vírus além dos bacteriófagos?

Accepted Answer

Ensaios de placas podem ser realizados com vírus de mamíferos, como a influenza, cultivando células de mamíferos como monocamadas em placas de cultura de tecidos. Mídia contendo vírus é adicionada para permitir a infecção, então as células são sobrepostas com meio imobilizante, como agarose. Após incubação que pode durar até duas semanas, as células infectadas são fixadas e coradas para visualizar e contar as placas.

Question 7

Como são obtidos isolados individuais de fagos a partir de amostras ambientais usando ensaios de placa?

Accepted Answer

Os fagos são coletados de amostras ambientais como o solo por filtração, depois usados para infectar bactérias suscetíveis em um ensaio de placa. Placas individuais são colhidas e estendidas em novas placas de ágar cobertas com ágar superior contendo bactérias. A concentração de fago diminui ao longo da estria, permitindo que placas discretas de tipos únicos de fagos sejam isoladas e analisadas mais a fundo.

Detecção de Bacteriófagos em Amostras Ambientais - Questionário de avaliação