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Intracardíaco, retroorbital e pata são alguns dos métodos de injeção especializados que os pesquisadores biomédicos usam para experimentos que necessitam da entrega de compostos por meio dessas rotas atípicas.
Uma injeção intracardíaca entrega o composto no ventrículo esquerdo, permitindo que a substância entre diretamente na circulação arterial. A rota retroorbital é uma alternativa à injeção da veia da cauda e é usada para entregar o composto na circulação venosa. E uma injeção de almofada nas patas envolve a administração subcutânea do artigo na pata traseira do animal. Este vídeo ilustrará as considerações, procedimentos e aplicações dessas técnicas especiais de injeção.
Vamos começar com algumas informações básicas e coisas que devem ser consideradas antes de iniciar esses procedimentos de administração.
A administração intracardíaca geralmente é feita por meio de um ultrassom para guiar a agulha para o local correto no coração. No entanto, se realizada corretamente utilizando os pontos de referência adequados, a administração pode ser realizada sem o uso de visualização por ultrassom. Observe que o procedimento requer o uso de anestesia geral e apenas uma injeção por animal é permitida para procedimentos de sobrevivência. Geralmente, uma agulha de calibre 27-30 é usada para esta injeção e o volume máximo de administração é de 100 e 300 microlitros para camundongos e ratos, respectivamente.
Para injeção intravenosa por via retroorbital, deve-se ter uma boa compreensão da estrutura venosa orbital. Um camundongo tem um seio onde convergem várias veias - ou seja, a supraorbital, a nasal dorsal, a palpebral inferior e a temporal superficial. Já em ratos, existe uma rede ou plexo de várias veias. A injeção é realizada diretamente no seio ou no plexo. Assim como o intracardíaco, esse procedimento também requer o uso de anestesia geral, e apenas uma injeção por olho por dia é recomendada com um total de duas injeções por olho para procedimentos de sobrevivência. Como em todas as injeções, a agulha de menor tamanho deve ser selecionada - geralmente calibre 27-30 - e o volume máximo recomendado é de 150? L por olho.
Apesar da controvérsia, o uso de injeção de patas ainda é necessário para alguns estudos, tipicamente relacionados à inflamação e ao crescimento tumoral. Observe que as injeções só podem ser realizadas em um pé, nunca bilateralmente. E as medições da almofada do pé devem ser feitas diariamente assim que ocorrer um inchaço óbvio. Uma agulha de calibre 29-30 é recomendada para a injeção e o volume máximo recomendado é de 50 μL. Após qualquer injeção, todos os animais devem ser monitorados de perto quanto a sinais de dor, nível de consumo de alimentos e deambulação normal. Geralmente, o animal deve ser sacrificado quando a lesão ou tumor interfere na capacidade do animal de deambular ou alcançar a comida e a água.
Agora vamos aprender os procedimentos de injeção, começando com a injeção intracardíaca. Demonstraremos o procedimento em um camundongo, mas os pontos de referência e o protocolo para um rato são semelhantes.
O primeiro passo é preparar a seringa. Lembre-se de que uma agulha de calibre 29 e uma seringa de 1 cc são apropriadas para camundongos. E o volume máximo para injeção intracardíaca é de 100 microlitros. Ao aspirar a solução, deixe uma pequena quantidade de ar entre o êmbolo e o material de injeção. Isso é para permitir que o sangue entre na seringa à medida que é colocado no coração.
Para começar, anestesiar o animal com anestésicos inalantes ou injetáveis. Revise as considerações para manter a anestesia geral em outro vídeo desta coleção. Em seguida, posicione o animal em decúbito dorsal em uma plataforma isolada. Em seguida, prenda os membros anteriores na plataforma e coloque um pedaço de fita adesiva horizontalmente no abdômen, acima dos quadris. Isso é para estabilizar ainda mais o animal e evitar qualquer movimento depois que a agulha for inserida. Em seguida, usando um cotonete, molhe o peito do animal com álcool 70%.
Para identificar o local da injeção, localize primeiro o xifóide e o manúbrio esterno. Em seguida, encontre o ponto médio entre os dois pontos de referência. 1-2 mm à esquerda deste ponto, é o ponto de referência de inserção da agulha. Usando um aplicador com ponta de algodão, aplique iodopovidona para marcar o local de inserção da agulha.
Para injetar, direcione a agulha perpendicularmente à mesa e insira-a na profundidade de cerca de 2 mm. Em seguida, aplique uma contrapressão muito leve no êmbolo. Um sangue oxigenado vermelho brilhante deve entrar no hub da seringa, o que confirma o posicionamento adequado. Segure a seringa no mesmo local e injete o material lenta e continuamente ao longo de 30 a 60 segundos. A injeção rápida pode resultar em aglomeração das células e entupimento das artérias, um choque no sistema devido à temperatura da substância ser significativamente mais baixa do que a temperatura corporal, ou uma expansão do ventrículo e interrupção do ritmo cardíaco.
Depois que o material tiver limpado a seringa, remova lenta e cuidadosamente a agulha sem nenhum movimento lateral, pois isso pode danificar os músculos cardíacos. Em seguida, solte imediatamente a fita das patas dianteiras e do abdômen e coloque o animal em decúbito ventral em uma gaiola limpa com cama suficientemente profunda para atuar como uma camada isolante. Observe que metade desta gaiola de recuperação está em uma fonte de aquecimento e o animal anestesiado está situado no lado aquecido da gaiola. Isso evita a hipotermia e, à medida que o animal se recupera da anestesia, ele poderá sair do lado aquecido conforme desejado.
A seguir, vamos aprender o método de injeção intravenosa utilizando o plexo retro-orbital em ratos. Novamente, demonstraremos o procedimento em um camundongo, mas os pontos de referência e o protocolo para ratos são semelhantes.
Encaixe a agulha apropriada na seringa selecionada e preencha o material de injeção. Lembre-se, geralmente se usaria uma agulha de calibre 27-30 com a menor seringa possível e um volume máximo de 150 microlitros.
Para iniciar o procedimento, primeiro anestesie o animal. Em seguida, coloque-o em uma superfície plana na posição de decúbito lateral. Agora coloque o dedo indicador no topo da cabeça e o polegar na mandíbula e puxe suavemente para trás e para baixo. Isso é para apertar a pele e projetar o globo ocular. Tome cuidado para não aplicar pressão na traqueia e restringir o fluxo de ar. Se estiver planejando várias injeções, aplique anestésico oftálmico tópico, como tetracaína ou proparacaína.
Insira a agulha no canto medial do olho em um 45? ângulo com o nariz. A profundidade deve ser suficiente para penetrar nos tecidos conjuntivais e avançar para a órbita ocular e para o seio. Não deve encontrar o osso na parte de trás da órbita. Para evitar a ruptura dos vasos sanguíneos, certifique-se de que a agulha tenha um movimento mínimo depois de inserida. Não aspire, pois isso derrubará os vasos. Injete o artigo de maneira lenta e constante. Em seguida, retire a agulha suavemente e aplique uma leve pressão no olho para controlar o sangramento e fornecer hemostasia.
Por fim, vamos revisar o método de injeção de patas em camundongos e ratos. Para começar, coloque a agulha apropriada e encha a seringa com o volume correto. Este procedimento pode ser feito em animais conscientes.
Coloque o animal em um tubo de contenção com uma pata traseira isolada e estendida segurando a pele acima do joelho. Limpe o pé com água ou álcool para remover os detritos antes da injeção. Para evitar o vaso sanguíneo que percorre o comprimento do pé, o ponto de referência da injeção está no centro, mas fora da linha média, mais perto dos dedos dos pés.
Coloque o bisel da agulha no local da injeção, direcionando-o para o calcanhar. Injete o artigo lenta e firmemente para evitar a distensão rápida dos tecidos do pé. Isso fará com que a almofada do pé inche à medida que o material de injeção preenche esse espaço subcutâneo. No pé de um animal pequeno, o inchaço da injeção pode se estender até o calcanhar, enquanto em um animal maior será mais localizado.
Após a injeção, observar os animais diariamente e se houver inchaço persistente ou se houver lesões ou tumores como resultado do protocolo experimental, então, usando um paquímetro, realizar a medição da almofada das patas. Este instrumento mede a espessura do pé em milímetros e ajuda na quantificação do inchaço.
Agora vamos discutir alguns exemplos de experimentos utilizando injeções intracardíacas, retroorbitais e de almofada de pé.
Uma das muitas aplicações da administração intracardíaca é o desenvolvimento de um modelo animal de metástase de câncer. Aqui, os pesquisadores usaram essa rota para injetar células tumorais que possuem propensão à colonização óssea. Nos dias seguintes, eles estudaram o crescimento do tumor nos ossos usando técnicas de raios-X e imagens de fluorescência. Em outro estudo, a rota retroorbital foi usada para injetar anticorpos específicos que marcam neutrófilos. Então, com a ajuda de imagens intravitais, os cientistas foram capazes de rastrear o padrão de migração das células marcadas.
Por fim, os investigadores costumam usar a injeção de almofada nas patas para analisar a resposta inflamatória. Neste experimento, os pesquisadores isolaram células mononucleares do sangue periférico de amostras de sangue humano, misturaram-nas com diferentes antígenos de teste e injetaram as soluções na pata do animal. Finalmente, eles realizaram medições nos pés para quantificar a resposta de inchaço devido a diferentes antígenos.
Você acabou de assistir à parte final de JoVE sobre as técnicas usuais e especializadas de administração de compostos.
Só para recapitular, na primeira parte revisamos a via parenteral mais comum. No segundo capítulo, discutimos os procedimentos enterais e tópicos. A terceira parte tratou do primeiro conjunto de procedimentos atípicos como intradérmico, intranasal e intracraniano em neonatos. Por fim, discutimos aqui três rotas adicionais que os pesquisadores biomédicos usam em laboratórios para fins específicos.
Depois de assistir a esta série, você deve ter uma compreensão muito melhor das diferentes técnicas de administração e também deve conhecer as considerações gerais e específicas relacionadas a esses protocolos de administração de compostos Como sempre, obrigado por assistir!
