Procedimentos de Cuidados Básicos

1. Manusear camundongos imunocompetuntes (convencionais)

Foi demonstrado que as doenças imunológicas dos camundongos são muito semelhantes às dos humanos. ² Como esses animais possuem capacidades imunológicas limitadas, procedimentos no manuseio e cuidado desses animais foram projetados para minimizar o risco de doenças infecciosas através do uso de controles de engenharia, equipamentos de proteção individual para a equipe de cuidados com animais e procedimentos operacionais padrão; estes mitigam a contaminação do caging e outros equipamentos com os quais os animais estão em contato.

1. Desempacotamento de contêineres de transporte: Receber animais de outras instituições ou vendedores de animais representa um risco para os animais já alojados dentro da instalação animal. Durante o trânsito, as caixas de transporte de animais podem entrar em contato com agentes patogênicos. Portanto, deve ser realizado um procedimento adequado ao desempacotar os contêineres de transporte.
   1. Os requisitos mínimos de Equipamentos de Proteção Individual (EPI) são luvas, jaleco limpo ou esfregões, máscara de partículas e óculos de segurança ao manusear os animais.
   2. Selecione a gaiola apropriada, incluindo a tampa da barra de arame e a parte superior da barreira. A gaiola deve ser mobiliada com materiais apropriados para cama e aninhamento. Todos os caging devem ser preparados e colocados na área receptora antes da chegada dos animais.
   3. Ao chegar, as caixas de transporte são colocadas em uma sala segura e controlada pela temperatura. Em seguida, examine o recipiente em busca de danos.
   4. Desinfete as superfícies externas do recipiente de transporte com um produto de dióxido de colina para destruir quaisquer patógenos nocivos. Certifique-se de que o desinfetante esteja em contato com a caixa de acordo com as recomendações do fabricante, geralmente de 15 a 30 minutos.
   5. Coloque o contêiner em uma Estação de Transferência de Animais (ATS). O ATS fornece fluxo de ar filtrado pelo HEPA dentro do capô que fornece proteção alérgena, criando uma barreira de ar de vácuo entre o usuário e a zona de trabalho. Isso garante uma exposição mínima ao material de cama animal/dander e gaiola. O ar unidirecional também protege os animais do ar da sala circundante, minimizando a chance de contaminação.
   6. Uma vez aberto o contêiner de transporte, avalie a saúde geral dos animais. Anote qualquer animal ferido ou doente.
   7. Coloque os animais nas gaiolas montadas nos tamanhos de grupo adequados. O agrupamento deve estar de acordo com as normas espaciais e o protocolo experimental ao qual serão atribuídos.
   8. Cubra a gaiola com a tampa da barra de arame. Fixar o divisor na tampa da barra de arame para criar duas áreas na tampa.
   9. Selecione a comida apropriada e coloque a comida em um lado da tampa da barra de arame. Deixe o segundo lado aberto para permitir uma melhor circulação de ar.
   10. A água será fornecida através de garrafas de água ou de um sistema de rega automática. Garrafas de água são usadas para camundongos recém-desmamados para garantir que eles sejam capazes de manter seus níveis de hidratação. Para o IVC com rega automática, carregue o tubo de rega antes de colocá-lo no rack.
   11. Coloque a gaiola em um rack. Se usar IVCs, verifique se a gaiola está totalmente presa no rack e se o tubo de sipper está preso ao sistema de rega.
2. Gaiola mudando ratos convencionais
   1. Gaiolas de animais são trocadas em um ATS. O ATS é desinfetado no final de cada sessão.
   2. Apenas uma gaiola pode ser aberta de cada vez.
   3. O caging preparado com os materiais apropriados de cama e ninho é trazido para a sala dos animais. Um pequeno número de gaiolas são colocadas no ATS.
   4. As gaiolas IVC com tubos internos de sipper devem ser carregadas para forçar a água no sípper para remover o espaço morto de ar no tubo de sipper. Se não estiverm devidamente carregados, os ratos podem não ser capazes de fornecer pressão suficiente sobre o tubo de sipper para remover o ar dele.
   5. Os requisitos mínimos de Equipamentos de Proteção Individual (EPI) são luvas, jaleco limpo ou esfregões, máscara de partículas e óculos de segurança ao manusear os animais.
   6. Uma gaiola de animais a serem trocados é colocada em uma nova gaiola, e depois no ATS.
   7. Os animais são transferidos à mão ou com o uso de fórceps acolchos. Luvas são trocadas entre gaiolas ou entre grupos de ratos. Luvas também podem ser desinfetadas com um produto químico nãotóxico entre as gaiolas.
   8. Foi demonstrado que transferir a área de aninhamento dos camundongos para uma gaiola limpa auxilia na transição para a gaiola limpa, especialmente para machos abrigados em grupo. Outros itens de enriquecimento também são transferidos para a nova gaiola.
   9. Uma vez que o topo da gaiola ou alimentador é colocado na nova gaiola, a comida é adicionada.
   10. A parte superior da barreira é colocada na nova gaiola e a gaiola é devolvida ao rack.
   11. As gaiolas IVC devem ser adequadamente encaixadas no rack para garantir que as válvulas de ar e água estejam engajadas.

2. Manipulação de camundongos imunocomprometidos

1. Desempacotamento de contêineres de transporte
   1. Animais imunocomprometidos devem ser descompactados em condições estéreis. Todos os indivíduos que manuseam camundongos deficientes imunológicos devem usar um vestido esterilizado a vapor, máscara, capô de cabelo e luvas estéreis. A técnica asséptica deve ser usada o tempo todo ao entregar esses animais.
   2. Todos os equipamentos e caging deveriam ter sido esterilizados por vapor, radiação UV ou quimicamente esterilizados com um molho de 70% de etanol por pelo menos 30 minutos Há duas opções para o ensilamento estéril: o caging padrão que foi embrulhado e o vapor esterilizado, ou o caging que é esterilizado normalmente através da irradiação pelo fornecedor. Estas gaiolas são de um uso, unidades descartáveis.
   3. Antes de manipular ratos sob o capô de fluxo laminar, o capô é pulverizado com 70% de etanol com o soprador operando. O soprador de capô deve permanecer sempre ligado para manter o ambiente estéril. Após cada uso, o capô é pulverizado com um desinfetante e limpo de todos os detritos e novamente pulverizado com 70% de etanol.
   4. Na melhor das condições, duas pessoas são necessárias para o recebimento adequado dos camundongos imunocomprometidos: uma para manusear os animais usando técnicas assépticas (o técnico estéril) e outra que manuseará itens contaminados (o técnico não estéril). A pessoa não-estérile ainda deve usar um vestido limpo, de mangas compridas; jaleco ou jaleco; máscara; capô; e luvas estéreis para evitar a contaminação do interior estéril caso precisem alcançar o capô.
   5. Prepare um capô de fluxo laminar como descrito anteriormente. É preferível ter um capuz dedicado a animais imunocomprometidos. Recomenda-se que o capô seja equipado com luzes de esterilização ultravioleta (UV) que podem ser usadas para esterilizar o interior do capô entre os usos. Um temporizador é utilizado para garantir que a superfície do capô tenha exposição adequada aos raios UV.
   6. O exterior de todos os suprimentos que são colocados no capô são pulverizados com 70% de álcool, incluindo a embalagem externa de alimentos, água e caging.
   7. Os contêineres de transporte são pulverizados com uma solução de dióxido de cloro antes de serem colocados no capô. Uma vez colocados no capô, eles devem permanecer abertos por 15-30 minutos.
   8. O manipulador de animais designado abre o alimento estéril e a água sob o capô.
   9. O técnico não-estérico abre a caixa de transporte sob o capô. Deve-se tomar cuidado com o técnico não-estérile para evitar o contato com as superfícies internas do capô e o interior da caixa de transporte.
   10. O tutor animal abre a gaiola estéril, e prepara a gaiola colocando comida e água no topo da gaiola. Os ratos são então removidos da caixa de transporte e colocados na gaiola estéril.
   11. A condição animal é notada pelo manipulador de animais estéreis. Todos os animais que pareçam doentes ou tiverem ferimentos óbvios serão segregados. Todas as gaiolas marcadas com animais que necessitam de atenção veterinária serão colocadas para manuseio, mudança de gaiola ou manipulação experimental por último, para reduzir a contaminação potencial de outros animais.
   12. A pessoa não-estérmula removerá a gaiola povoada do capô. As gaiolas podem ser colocadas em um rack padrão como gaiolas estáticas, ou em um rack ventilado como IVCs. Nos IVCs, os camundongos devem ser fornecidos com materiais adicionais de aninhamento para auxiliar na regulação térmica.
   13. O manipulador de animais deve trocar luvas após cada contêiner de transporte para evitar uma possível contaminação cruzada de grupos de animais. O número do contêiner de transporte é registrado no cartão da gaiola para rastrear a origem dos animais em caso de doença.
   14. Suprimentos não utilizados podem ser salvos para uso futuro, desde que o recipiente original possa ser recados. Comida não comida é removida da sala.
   15. Os camundongos devem passar por um período mínimo de uma semana de aclimatação antes do uso experimental.
2. Mudança de gaiola para camundongos imunocomprometidos
   1. As gaiolas do rato são trocadas pelo menos uma vez por semana, ou mais frequentemente, se consideradas necessárias.
   2. Etapas para preparação do capô, preparação de gaiolas e EPI pessoal são as mesmas para a desempacotamento dos animais.
   3. Os animais são transferidos manualmente ou com o uso de fórceps acolchos. O manipulador de animais designado deve reglove após cada 5-10 gaiolas, se as luvas estão rasgadas ou contaminadas, ou se um animal parece doente.
   4. Quaisquer gaiolas com animais aparecendo doentes serão colocadas no final da ordem de mudança da gaiola, para evitar a possível exposição de animais saudáveis a patógenos ou contaminantes.
   5. Se a comida e/ou a água devem ser adicionadas à gaiola antes da próxima mudança programada da gaiola, deve ser feita asepticamente sob o capô preparado.