Procedimentos de Cuidados Básicos

Como camundongos e ratos representam mais de noventa por cento dos animais usados para pesquisa biomédica, cuidar adequadamente desses organismos é fundamental para o resultado dos experimentos. Esses procedimentos de cuidado começam logo no início, com a desempacotamento dos animais desde o transporte de contêineres, até a troca de gaiolas, para manter as condições adequadas de moradia, fornecer uma dieta adequada e garantir um ambiente adequado. Embora existam procedimentos gerais que se aplicam à maioria dos camundongos e ratos em laboratório, alguns animais, como os imunocomprometidos, requerem atenção adicional para sustentá-los para fins experimentais.

Este vídeo descreverá as normas e procedimentos essenciais de cuidado para animais imunocompetuntes e imunocomprometidos. E por último, vamos ilustrar alguns exemplos de experimentos mostrando como os cientistas usam esse conhecimento para diferentes propósitos de pesquisa.

Receber animais de outras instituições representa um risco para os animais já alojados dentro da unidade, pois durante o trânsito, as caixas de transporte podem entrar em contato com agentes patogênicos. Portanto, deve ser utilizado um procedimento adequado ao desempacotar os contêineres de transporte.

Antes de manusear qualquer animal, é importante usar o equipamento de proteção individual adequado, ou EPI. O EPI mínimo para usar é um jaleco, luvas, óculos de segurança e uma máscara do tipo cirúrgico que reduzirá a exposição a poeira e alérgenos. O próximo passo é selecionar gaiolas apropriadas para animais de entrada. Em seguida, forneça a gaiola com materiais apropriados para cama e aninhamento. E leve as gaiolas preparadas para a sala de recepção controlada pela temperatura, para que estejam prontas para transferência antes da chegada dos animais.

Após a chegada do embarque, coloque as caixas de transporte em um lugar seguro na sala de recebimento. Examine o recipiente para obter qualquer dano e desinfete as superfícies externas para destruir quaisquer patógenos nocivos. Certifique-se de que o desinfetante esteja em contato com a caixa por pelo menos 15-30 minutos, de acordo com as recomendações do fabricante. Em seguida, coloque o contêiner na Estação de Transferência de Animais, ou ATS. Esta estação oferece ar de partículas de alta eficiência, ou HEPA, filtrado fluxo de ar unidirecional dentro do capô. O HEPA protege o usuário contra alérgenos e protege os animais do ar da sala circundante, minimizando a chance de contaminação. Em seguida, abra o contêiner de transporte e avalie a saúde geral dos roedores. Anote qualquer animal que pareça estar ferido ou doente. Depois disso, coloque-os na gaiola já montada nos tamanhos adequados do grupo, cubra a gaiola com a tampa da barra de arame e fixe o divisor para criar duas áreas. Selecione a comida apropriada e coloque-a de um lado e deixe o segundo lado aberto para permitir uma melhor circulação de ar. Por fim, se os animais não estiverem sendo colocados em um rack com rega automática, adicione uma garrafa de água para garantir o abastecimento adequado de água. Lembre-se, o ATS tem que ser desinfetado no final de cada sessão, e o soprador deve estar desligado ao desinfetar.

Para troca de gaiolas, coloque as duas gaiolas – uma gaiola fresca com o material de cama apropriado e a gaiola usada com os animais-no ATS. Pode-se transferir os animais da gaiola velha para a nova gaiola à mão ou com o uso de um fórceps acolchoados. Ambos os métodos foram discutidos em outro vídeo desta coleção. Lembre-se que apenas uma gaiola de animais pode ser aberta de cada vez. Para camundongos machos ou fêmeas com uma ninhada, foi demonstrado que transferir a área de ninho dos camundongos para a gaiola limpa ajuda os animais na transição. Uma vez que a parte superior da gaiola seja colocada na nova gaiola, transfira alimentos do topo da gaiola velha para o novo topo e adicione mais alimentos, se necessário. Em seguida, coloque a parte superior da barreira, e devolva a gaiola para o rack. É uma boa prática trocar luvas entre gaiolas ou entre grupos.

O procedimento de desempacotar animais imunocomprometidos é um pouco diferente, pois as coisas precisam ser estéreis. Recomenda-se que o soprador dentro do capô esteja ligado pelo menos 24 horas antes do uso. Como para animais imunocompenentes, ao chegar o contêiner pulverizar o recipiente com uma solução desinfetante na sala de recepção e deixá-lo aberto por 15-30 minutos. No ATS designado para camundongos imunocomprometidos, pulverize a capa de fluxo laminar com 70% de etanol 30 minutos antes de manipular animais. O ideal é que duas pessoas participem dessa atividade de desempacotar — uma pessoa seria a técnica estéril usando o vestido esterilizado a vapor e um par duplo de luvas estéreis para lidar com os animais usando técnicas assépticas e a outra seria o técnico não estéril usando um vestido de isolamento limpo e um par de luvas para manusear itens contaminados. Ambos devem estar usando uma máscara, gorro de cabelo e óculos de segurança.

Antes de abrir o recipiente de transporte dentro do capô, coloque todos os suprimentos e coloque estes e pulverize seu exterior com álcool. E na chegada do embarque, coloque a caixa de animais recebida no capô e pulverize-a com 70% de etanol também. Existem duas opções para o ensaquecimento estéril, seja o caging padrão que foi embrulhado e unidades a vapor esterilizadas, ou unidades descartáveis que foram esterilizadas usando irradiação pelo fornecedor.

Inicie o procedimento de desempacotamento abrindo o alimento estéril, seguido pela abertura da caixa de transporte. Neste ponto, o manipulador deve descartar o primeiro par de luvas estéreis. Em seguida, a pessoa não estéril desembrulha a gaiola estéril e passa-a aseticamente para o manipulador animal que, em seguida, remove o capô e a tampa da barra de arame, e coloca-os de cabeça para baixo no capô. Posteriormente, o tubo de sípere na gaiola é preenchido com água na estação localizada no capô. Por fim, o tutor animal coloca o animal na gaiola, segura-o com a tampa da barra de arame, adiciona comida e coloca o capô no lugar. Observe que o soprador do capô deve permanecer sempre ligado para manter o ambiente estéril. No final, a pessoa não estéril remove a gaiola povoada do capô e coloca-a em um rack apropriado. Para evitar uma possível contaminação cruzada entre os grupos, o manipulador de animais deve trocar luvas após cada contêiner de transporte.

Para a troca de gaiolas dos animais imunocomprometidos, a preparação do capô e gaiolas e EPI são os mesmos que para a desempacotamento desses animais. E a técnica de transferência é a mesma dos animais imunocompetuntes, mas em condições estéreis.

Agora vamos discutir as condições adequadas de moradia para os animais, que é outro aspecto importante da prestação de cuidados essenciais. Ratos e ratos são alojados principalmente no tipo caixa de sapatos com um fundo sólido contendo material de cama. A gaiola típica do rato fornece 75 polegadas quadradas de espaço no chão, o que é adequado para um máximo de 5 ratos adultos. Por outro lado, uma gaiola de ratos tem a área de 142 polegadas quadradas e é adequada para 2 ratos adultos. As gaiolas estáticas geralmente são cobertas com uma tampa de barra de arame e o material do filtro é adicionado sobre o topo da gaiola como um capô. Gaiolas ventiladas individualmente, ou IVCs, também têm tampa de barra de arame e capô, mas são colocadas em um rack que fornece fluxo de ar para dentro da gaiola. Isso elimina a necessidade de mudar a gaiola com tanta frequência quanto gaiolas estáticas, o que pode ser benéfico para animais imunocomprometidos.

Todos os sistemas de ensaíamento têm uma provisão para alimentação e abastecimento de água. Há alimentadores colocados dentro da gaiola animal ou uma seção da tampa da barra de arame é usada para armazenamento de alimentos. Os alimentos devem ser colocados de tal forma que não sejam sujos pelos animais. A água é geralmente fornecida através de uma garrafa de água colocada no topo da gaiola, ou através de uma válvula de água automática que é um componente embutido na gaiola animal. Para a opção de válvula de beber, quando a gaiola é colocada em um rack, a água é transportada para o tubo para um sistema de rega automática que é projetado para atender às necessidades do animal em toda a instalação animal.

O Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório afirma que todos os implementos de caging devem ser higienizados pelo menos a cada 2 semanas. Algumas gaiolas e acessórios podem precisar ser trocados com mais frequência, como ditado pelo nível de odor e amônia no recinto.

Agora vamos falar sobre alimentação adequada e abastecimento de água para animais imunocompetuntes e imunocomprometidos. Existem muitas rações disponíveis comercialmente com composições variáveis de proteína, carboidratos e gorduras. Idealmente, os alimentos devem ser compostos por 15-19% de proteína, 44% de carboidratos e 4-9% de gordura. Para animais imunocomprometidos, certifique-se de que a alimentação foi esterilizada.

A água da torneira, ou osmose reversa que é água de RO, pode ser usada para animais imunocompetentes, mas para animais imunodeficientes, a água pode ser uma fonte de contaminação e, portanto, precisa ser esterilizada. A esterilidade na água é mantida adicionando 2 gotas de 12 ácidos clorídricos molares a 8 litros de água ro, que acidificará a água a um pH de 2,5-3 e limitará o crescimento bacteriano. Em seguida, despeje a água em garrafas individuais e cubra-as com papel alumínio. Coloque as tampas da garrafa com tubos de sipper separadamente em um saco de autoclave, e coloque tudo em uma autoclave para esterilização a vapor.

Agora vamos discutir as condições ambientais padrão essenciais para o cuidado animal.

No nível da gaiola, a habitação social é obrigatória, a menos que cientificamente justificada ou se um animal é incompatível com todos os outros. Enriquecer o ambiente com cabanas de papel e materiais de ninho permite que os animais expuserem comportamentos específicos de espécies como construção de ninhos e escavações, o que, por sua vez, diminui o nível de estresse e aumenta o bem-estar geral dos animais. Os materiais de aninhamento também fornecem uma área de sono saturada em feromônios calmantes que auxiliam na carcaça de vários ratos machos na mesma gaiola. Como mencionado anteriormente, mover a área de aninhamento para a gaiola limpa após a mudança de gaiola ajuda a prevenir a agressão, especialmente no macho, à medida que os animais são introduzidos em um novo ambiente. Para animais nus atímicos, deve-se considerar fornecer materiais adicionais de cama e desfiado tipo de papel em suas gaiolas para ajudar na termregulação.

No nível ambiente, a temperatura para ratos e ratos deve ficar entre 68 e 79° F. O nível de umidade do quarto deve ser de 30 a 70%, pois níveis mais baixos podem resultar em uma condição conhecida como rabo-de-cavalo. O parâmetro do terceiro quarto é a iluminação. Isso inclui intensidade de luz e ciclos. Normalmente, a sala animal é definida para ciclo escuro de 12 horas/12 horas. A intensidade da iluminação deve variar de acordo com a atividade na sala. Quando os técnicos estão trabalhando, podem ser usados níveis mais altos de iluminação. No entanto, deve ser reduzido para aproximadamente 325 lux uma vez que toda a atividade é concluída. Por fim, o fluxo de ar dentro da sala também deve ser cuidadosamente controlado. Um mínimo de 10-15 mudanças de ar de 100% de ar fresco deve ocorrer a cada hora. Isso diminui micróbios e odores na sala dos animais.

Por fim, vamos ver como os pesquisadores estão usando esse conhecimento sobre a moradia de animais de laboratório, dieta e preferências ambientais em seus experimentos.

Como discutido anteriormente, os animais de laboratório geralmente exibem comportamento de construção de ninhos, o que reduz o estresse, e os pesquisadores têm usado isso como um indicador de bem-estar animal. Neste experimento em particular, os cientistas desenvolveram um sistema imparcial para pontuar o ninho construído e, em seguida, usaram-no para estudar o efeito da temperatura ambiente no comportamento de construção de ninhos. Como você pode ver, um aumento na temperatura causou uma queda significativa na pontuação, destacando o papel da temperatura circundante no bem-estar animal.

Dado que ratos e ratos adoram carboidratos, pesquisadores têm usado a alimentação de diferentes formas para testar a função motora do animal. Isso inclui analisar a destreza durante diferentes tipos de tarefas de manipulação de alimentos e examinar o comportamento de alcance após intervenções cirúrgicas ou farmacológicas.

Por fim, sabe-se que ratos e ratos são noturnos e não preferem áreas iluminadas. Os cientistas usam esse conhecimento para construir ambiente para estudar a ansiedade nessas espécies. Por exemplo, aqui as pesquisas introduziram animais em campo aberto simples e estudaram o tempo gasto pelo tipo selvagem e camundongos eliminados nas zonas internas e externas, para analisar o efeito do impacto do gene knockdown no comportamento semelhante à ansiedade.

Você acabou de assistir a introdução de JoVE a procedimentos essenciais de cuidados para ratos e ratos. Agora você deve ter uma melhor compreensão das medidas que se deve tomar para garantir que o meio ambiente e o manuseio desses animais não causem nenhum dano à saúde animal e você também deve saber como os pesquisadores podem modificar esses parâmetros para alcançar diferentes objetivos científicos. Como sempre, obrigado por assistir!