Imageamento de amostras biológicas com microscopia ótica e confocal

1. Imagem confocal

1. Coloque a amostra no palco. Centralizar-o sob as lentes. Não deve exceder a limitação de peso do estágio, que neste caso é de 5 kg. A amostra não deve ter mais de 100 mm de espessura.
2. Abra o software de imagem e selecione "Criar trabalho".
3. Na Coluna Topografias,escolha o botão assistente.
4. Crie uma imagem de visão geral na menor ampliação, 2,5X. Antes de mudar as ampliações, certifique-se de que a amostra está em foco alterando a posição Z até ver uma imagem clara. Isso pode ser feito empurrando para baixo ou puxando para cima no manipulador de microscópio 3D. O movimento Z mais fino é atingido por engajar o botão na lateral, o que causa uma luz azul ao redor das bordas.
5. Aumente lentamente a ampliação da lente, jogando continuamente com a intensidade da luz e o foco até que você esteja na ampliação desejada. Se desejar, escolha uma área diferente de interesse movendo o palco nas instruções x e y usando o manipulador.
6. Uma vez que uma imagem de visão geral seja tirada na baixa ampliação, aperte o botão seguinte para prosseguir para a etapa do Ponto de Referência. Se desejar, especifique um determinado ponto de referência por causa da medição (ou seja, o canto da amostra), embora para isso o ponto de referência padrão esteja bem.
7. Acerte a próxima seta para seguir para a próxima parte do mago.
8. Altere o objetivo conforme desejado para ver uma resolução apropriada para sua amostra. Neste caso, a lente objetiva 50X é usada para visualizar as células da amostra. O 50X é a lente mais próxima da amostra, então suba gradualmente até o objetivo de 50X garantindo que ainda haja espaço para diminuir a distância de trabalho após a lente 20X.
9. Na página "Definição de intervalo de medição", mova ligeiramente a posição Z (clicando no botão lateral no manipulador para ajustes finos) de modo que apenas a parte superior da amostra esteja em foco e clique em "Definir por último". Em seguida, mova o palco na direção Z (para baixo) até que apenas a parte inferior da amostra esteja em foco e pressione "Definir Primeiro". Certifique-se de que o número de fatias calculadas não exceda 1000 ou que o programa falhe.
10. Certifique-se de que a intensidade da luz não se sobressatura (causa pixels vermelhos) na imagem em qualquer um dos níveis e, em seguida, bata feito. Isso vai tirar a imagem da tomografia e abrir o software de tomografia.
11. No software de tomografia, abra guias como a guia Estudos para visualizar os dados em 3D e fazer medições em espaço 2D ou 3D.

2. Imagem de microscópio óptico digital

1. Coloque a amostra no palco. Centralizar a amostra sob a lente. O peso amostral não deve exceder a limitação de peso do estágio, que neste caso é de 4 kg. A amostra não deve ser superior a 12 cm.
2. Abra o software de imagem.
3. Selecione um Trabalho na lista de modelos fornecidos. Também é possível trabalhar fora de um trabalho pressionando o Exame Livre, que permite estudar uma amostra fora de um trabalho.
4. Adquira uma imagem geral que mostra todo o palco. Isso servirá como um mapa mais tarde para exibir a parte da amostra que está sendo vista. Ao adquirir a imagem, use o controlador para alterar o foco e a posição da imagem.
5. Coloque um sistema de coordenadas. O sistema de coordenadas padrão é do canto traseiro esquerdo da etapa e está bem para esta aplicação. Se a amostra estiver torta, você pode ajustar as coordenadas aqui.
6. Nomeie a amostra e o trabalho, isso adiciona-a à lista de trabalhos para que outros usuários possam retornar a ela.
7. Selecione o botão da câmera em Acquire. Pegue uma imagem inicial e pressione o botão ao vivo enquanto navega pela amostra.
8. Mova o foco para baixo até que a amostra esteja claramente em foco. Pode ser necessário também ajustar a iluminação sob a aba Iluminação e Abertura".
9. Otimize a imagem com as ferramentas sob o painel de Otimização de Imagens. Você pode jogar com diferentes parâmetros sob a guia Aprimoramentos de imagem, como a inclinação da lente, os níveis de iluminação na amostra e brilho e contraste, até que a imagem tenha a crocância desejada.
10. Execute medições tocando na ferramenta Lápis no software. A partir daí, você tem acesso a várias ferramentas de medição, incluindo distâncias, ângulos e área. Use as ferramentas de distância e área para medir o tamanho da amostra.
11. Vá para a guia Fluxo de trabalho de resultados e verifique o layout do fluxo de trabalho para configurar o layout do relatório
12. Toque no botão salvar para salvar seu trabalho para que outros possam usar o mesmo fluxo de trabalho.