Name: Dissecção da Saccharomyces cerevisiae Asci (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 57 s
Description: Aprenda a dissecar ascos de Saccharomyces cerevisiae para análise genética meiótica. Este método demonstra micromanipulação de células de levedura e seleção de zigotos diploides com precisão.

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Trabalho no laboratório do autor é financiado pelos Institutos Canadenses de Pesquisa em Saúde, a Fundação Canadense para Inovação, das Ciências Naturais e Engenharia do Conselho e da Universidade de Concordia.

Construção de linhagens diplóides Protocolo para a produção de diplóides de reprodução sexuada <ol><li> As cepas inicial deve ser riscado em meio YPD, ou seletivos, se necessário, para produzir colônias único. As duas cepas haplóides deve ser do tipo de acasalamento oposto (isto é, MATA e MATα). </li><li> Usando um loop de inoculação estéril escolher uma pequena porção de uma colônia de uma das duas estirpes haplóides. Em uma raia novo prato YPD o loop uma vez em uma linha reta ao longo da placa. Marca a direção da raia com uma seta na parte inferior da placa. </li><li> Repita este procedimento para a segunda estirpe na mesma placa YPD. Desta vez, a raia colônia perpendicular à primeira, cruzando a raia em primeiro lugar com o segundo. Marca a direção da raia segundo e observe a área onde a raia segundo atravessa o primeiro. Esta área será diplóides, onde será produzido. </li><li> Incubar a placa de YPD a 30 ° C durante a noite. </li><li> Réplica da placa da placa de YPD em mídia seletiva que irá permitir seletivamente o crescimento do diplóides recém-formado. </li><li> Escolha uma única colônia, se possível, ou uma pequena parte do raia diplóides e raia para o mesmo meio seletivo para gerar colônias único. </li></ol> Esporulação e digestão dos ascos Protocolo <ol><li> Escolha colônias único da placa acima e fazer pequenos (1cm x 1cm) manchas na esporulação (SPO) placas e incubar a 30 ° C por 3-7 dias para esporular. </li><li> Esporulação pode ser verificado, olhando para as células de cada patch em microscópio de luz. Células lugar numa lâmina de microscópio, em mL 50-10 de água, coloque uma lamela em cima da gota, e olhar para a presença de ascos. Se ascos não são facilmente encontrados em seguida, colocar de volta na incubadora. </li><li> Se houver esporulação eficaz em um dos patches, preparar um tubo cônico estéril 15mL com 100μL de suco de tétrade. </li><li> Escolha as células a partir deste patch esporulação com um laço de inoculação estéril 3mm (células deve cobrir ¼ do ciclo) e coloque o suco de tétrade. Agite suavemente o loop para permitir que as células a cair do laço e misture com a solução. </li><li> Deixe no suco de tétrade (contendo zymolyase) para 4-10mins (dependendo da concentração e atividade de zymolyase ea tensão em si). Isto permite a digestão da parede celular em torno do ascósporos. </li><li> Marcar a parte superior e inferior da região de inóculo em uma placa de YPD. </li><li> Opcional. Reação pode ser interrompida pela adição de 1mL de gelada estéril dH 2 O. Permitir que as células de se contentar com 5mins. Remover 1mL do sobrenadante em seguida, misture levemente com a mão e manter em gelo. </li><li> Tome 5μL de células digerida a partir do passo 5 e coloque delicadamente gotas em uma linha na região de inóculo da placa pré-marcada YPD. </li><li> Use um loop de inoculação estéril 3mm a muito delicadamente espalhar os tempos 1-3 gotas em uma linha, enquanto apenas fazer contato com o ágar. </li><li> Deixe o líquido absorver no agar (Se a etapa 7 é omitido, isto é, quando a digestão da parede celular externa será reduzida ou stop). Proceder ao microscópio de dissecação. </li></ol> Dissecção da Asci Protocolo Note que o protocolo a seguir é descrito para um Sistema de Cantor MSM microscópio de micromanipulação 200. Este protocolo pode ser seguido com ligeiras modificações, se usando um micromanipulador manuais, tais como um micromanipulador Zeiss MR. <ol><li> Concentre-se em uma região da placa onde a metade do campo contém células e meio está vazio. Traga lentamente a agulha em foco de tal forma que ele toca a região vazia do campo. Isso irá garantir que a agulha não contém células de um uso anterior. Contato entre a agulha eo agar é visto como um círculo preto escuro que lentamente entra em foco. </li><li> Ir para a matriz na posição A1 e faça uma marca, perfurando o ágar novamente. Isto é para ajudar a determinar a orientação da placa, se for retirado o microscópio antes da conclusão. </li><li> Mude para o modo de busca. Localizar um ascos. Preferencialmente escolher ascos que estão em áreas onde as células estão bem espalhados. Evitar áreas com aglomerados de células. Os quatro ascósporos de um ascos ainda deve ser anexado a outro. Dois ascósporos podem ser ligeiramente maior que os outros dois. Evitar a captação ascos onde se ascósporos está solto e não está ligado ao resto dos ascósporos. </li><li> Pegar um ascus com a agulha. Traga lentamente a agulha até a placa. Quando a sombra da microagulhas é visto line, isto com o ascus para ser escolhido. Novamente abordagem a agulha até o contorno de um círculo preto (a ponta da agulha) é visto. Toque na tétrade com este círculo e, em seguida, retire rapidamente a agulha para longe. Certifique-se de todos os quatro ascósporos de um ascus aderiram à agulha e que não há células adicionais foram recolhidas no microagulhas que não fazem parte deste ascus. </li><li> Puxe a microneedle longe do prato e ir para a matriz (para o ascus primeiro, vá paraposição A1). Tome nota de cada posição onde uma ascus é realocado. Coloque o ascus para baixo, tocando a placa com o microagulhas e afastando-se até que os quatro ascósporos sair do microagulhas. Tocando suave do braço agulha ou plataforma segurando a placa de YPD é frequentemente útil nesta etapa. </li><li> Repita os passos 3-5 e ascos lugar para baixo em posições consecutivas na matriz até o número desejado de ascos foram escolhidos. </li><li> Voltar a cada ascus e quebrar a quatro células separadas por provocação com a agulha, tocando suavemente a plataforma ou uma combinação de ambos. Pegar as células deixando um para trás em uma nova posição na matriz até que cada ascósporos em cada ascus é separado em linhas de quatro. </li><li> Coloque a placa de YPD em uma incubadora a 30 ° C durante vários dias para observar o padrão de crescimento. </li><li> Réplica da placa as células dissecados para meio seletivo, se necessário. </li></ol> Relocalização de zigotos Protocolo <ol><li> Expelido duas cepas haplóides com os tipos de acasalamento opostos sobre o meio adequado para obter colónias isoladas. </li><li> Companheiro destas duas estirpes, como descrito acima e deixe crescer de 4 a 6 horas (ou durante a noite se necessário). </li><li> Verifique se há zigotos em microscópio de luz. Zigotos aparecerá como dumbbell em forma de células, com ou sem um broto. </li><li> Escolha as células com um loop de inoculação 3mm (células deve cobrir ¼ do ciclo) e coloque delicadamente em 100μL de estéril dH 2 O. </li><li> Marcar a parte superior e inferior da região de inóculo em uma placa de YPD. </li><li> Tome 5μL e coloque delicadamente gotas em uma linha na região de inóculo da placa pré-marcada YPD. </li><li> Use um loop inoculação 3mm a espalhar as gotas em uma linha muito suavemente, enquanto apenas fazer contato com o ágar. </li><li> Deixe o líquido absorver no agar. Proceder ao microscópio de dissecação. </li><li> Concentre-se em uma região da placa onde a metade do campo contém células e meio está vazio. Traga lentamente a agulha em foco de tal forma que ele toca a região vazia do campo. Isso irá garantir que a agulha não contém células de um uso anterior. Contato entre a agulha eo agar é visto como um círculo preto escuro que lentamente entra em foco. </li><li> Ir para a matriz na posição A1 e faça uma marca, perfurando o ágar novamente. Isto é para ajudar a determinar a orientação da placa, se for retirado o microscópio antes da conclusão. </li><li> Mude para o modo de busca. Localizar um zigoto. </li><li> Pegar um zigoto com a agulha. </li><li> Lugar zigotos individualmente na matriz. </li><li> Permitir zigotos a crescer por vários dias. </li><li> Placa réplica do zigotos para o meio apropriado seletivo. </li></ol> Resultados representante <img src="/files/ftp_upload/1146/1146fig1.jpg" alt="" /> Figura 1: O cruzamento de duas linhagens haplóides de tipos de acasalamento oposto gera uma linhagem diplóide. <img src="/files/ftp_upload/1146/1146fig2.jpg" alt="" /> Figura 2: (A) A placa de YPD com resultados thre de um cruzamento entre uma cepa sensível à temperatura (com um auxotrophy leu2) e uma cepa selvagem (LEU2). Células digeridos são distribuídos na região de inóculo do lado esquerdo, onde o crescimento de espessura entre as duas linhas pretas é visto. Ascos que foram dissecados crescer uniformemente espaçados na matriz à direita. (B) A placa de (A) foi replicado em um SD-Leucina placa de abandono. Observe o crescimento 2:02 para o marcador LEU2 indicando uma ascósporos validado foi dissecado. (C) A placa de (A) foi replicada em uma placa YPD e incubadas a 37 ° C. Observe o crescimento 2:02 que valida ainda mais que um ascósporos foi dissecado.

<ol><li>Sherman, F., Hicks, J. Micromanipulation and Dissection of Asci. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSherman%2C+F+%22Guide+to+Yeast+Genetics+and+Molecular+Biology%22">Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology</a>. Guthrie, C., Fink, G. R. , Academic Press. San Diego. 21-37 (1991).</li>
</ol>

Dissecção levedura é uma ferramenta útil para selecionar novas cepas com marcadores desejada. Ao determinar o padrão de crescimento teórico de quatro ascósporos, é importante olhar para o genótipo da célula vegetativa. Se um plasmídeo está presente, é preciso saber se é exemplar único, baixa ou alta, pois isso afetará quais ascósporos (s) receberá o plasmídeo e vai afetar as previsões e conclusões sobre as cepas sendo manipulado. Certas cepas podem esporular melhor do que outros produzem asc...

<table><tbody><tr><td>Singer MSM System 200</td><td>Microscópio</td><td>Singer Instruments</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>D-sorbitol</td><td>Reagente</td><td>BioShop Canada</td><td>SOR508</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Reagente</td><td>BioShop Canada</td><td>TRS001</td><td></td></tr><tr><td>Zimolase 100T</td><td>Reagente</td><td>Seikagaku Corporation</td><td>120493</td><td></td></tr><tr><td>Extrato de levedura</td><td>Reagente</td><td>BioShop Canada</td><td>YEX401</td><td></td></tr><tr><td>Peptona</td><td>Reagente</td><td>BioShop Canada</td><td>PEP 403</td><td></td></tr><tr><td>D-glicose</td><td>Reagente</td><td>BioShop Canada</td><td>GLU501</td><td></td></tr><tr><td>Base de nitrogênio para levedura</td><td>Reagente</td><td>BioShop Canada</td><td>YNB406</td><td></td></tr><tr><td>Bio-tryptona</td><td>Reagente</td><td>BioShop Canada</td><td>TRP402</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de sódio</td><td>Reagente</td><td>BioShop Canada</td><td>SOD002</td><td></td></tr><tr><td>Acetato de potássio</td><td>Reagente</td><td>BioShop Canada</td><td>POA 301</td><td></td></tr><tr><td>Ágar</td><td>Reagente</td><td>BioShop Canada</td><td>AGR003</td><td></td></tr><tr><td>Sulfato de adenina</td><td>Reagente</td><td>BioShop Canada</td><td>ADS201</td><td></td></tr><tr><td>L-uracila</td><td>Reagente</td><td>BioShop Canada</td><td>URA 241</td><td></td></tr><tr><td>L-triptofano</td><td>Reagente</td><td>BioShop Canada</td><td>TRP 100</td><td></td></tr><tr><td>L-histidina</td><td>Reagente</td><td>BioShop Canada</td><td>HIS 200</td><td></td></tr><tr><td>L-arginina</td><td>Reagente</td><td>Amresco</td><td>0877-100G</td><td></td></tr><tr><td>L-metionina</td><td>Reagente</td><td>BioShop Canada</td><td>MET 222</td><td></td></tr><tr><td>L-tirosina</td><td>Reagente</td><td>BioShop Canada</td><td>TYR 333</td><td></td></tr><tr><td>L-isoleucina</td><td>Reagente</td><td>BioShop Canada</td><td>ISO 910</td><td></td></tr><tr><td>L-valina</td><td>Reagente</td><td>BioShop Canada</td><td>VAL 201</td><td></td></tr><tr><td>L-lisina</td><td>Reagente</td><td>BioShop Canada</td><td>LYS 101</td><td></td></tr><tr><td>L-fenilalanina</td><td>Reagente</td><td>BioShop Canada</td><td>PHA 302</td><td></td></tr><tr><td>Ácido L-glutâmico</td><td>Reagente</td><td>BioShop Canada</td><td>GLU 202</td><td></td></tr><tr><td>L-treonina</td><td>Reagente</td><td>BioShop Canada</td><td>THR002</td><td></td></tr><tr><td>L-leucina</td><td>Reagente</td><td>BioShop Canada</td><td>LEU 222</td><td></td></tr></tbody></table>

dissecção da saccharomyces cerevisiae asci

Dissection of Saccharomyces Cerevisiae Asci

A levedura é um sistema modelo altamente tratável que é usado para estudar diversos processos celulares. A cepa comum de laboratório<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt; Existe em qualquer um haplóide ou estado diplóide. A capacidade de combinar a partir de dois alelos haplóides ea capacidade de introduzir modificações no genoma requer a produção e dissecção de ascos. Asci produção de células haplóides começa com o acasalamento de duas cepas de levedura haplóide com tipos de acasalamento compatíveis para produzir uma cepa diplóide. Isso pode ser feito em um número de maneiras, tanto em meio sólido ou no estado líquido. É vantajoso para selecionar para o diplóides no meio que, seletivamente, promova o seu crescimento em relação a qualquer uma das cepas haplóides. Os diplóides são, então, permissão para esporular em meio de pobres em nutrientes para formar ascos, um conjunto de quatro células-filhas haplóides resultantes de reprodução meiótica do diplóides. Uma mistura de células vegetativas e ascos é então tratado com a zymolyase enzima para digerir o saco do membrana que envolve os ascósporos do ascos. Usando micromanipulação com microagulhas em um microscópio de dissecação um pode pegar ascos individuais e separadas e realocar os quatro ascopores. Ascos dissecados são cultivadas por vários dias e testados para os marcadores ou alelos de interesse por plaqueamento em réplica adequada meios seletivos.

Micromanipulação de células de levedura é necessária para a análise genética meiótica ou para selecionar zigotos diplóides. Estes micromanipulations são realizadas com a microneedle de um microscópio de dissecação. O microagulhas é usado para deslocar as células e é controlado por um micromanipulador, que estão disponíveis com vários graus de automação.

Dissecção da Saccharomyces cerevisiae Asci

A levedura é um sistema modelo altamente tratável, utilizado para estudar diversos processos celulares. A cepa laboratorial comum Saccharomyces cerevisiae ...

Este procedimento inicia-se com o acasalamento de duas células de levedura haid geneticamente diferentes. Os diploides são selecionados por plaqueamento em réplica em meio que permite o crescimento apenas dos diploides. Em seguida, os diploides são repicados em placas de sation ou formam ascos.Os ascos são dissecados com os haploides colocados em um local definido na placa. Uma vez que os haploides resultantes tenham crescido até formarem uma colônia visível, a placa é replicada em meio seletivo para identificar o genótipo das células individuais. Olá, sou Adrian Morris.E eu sou Audrey Mahe. E somos do laboratório do Dr. Michael Satcher na Universidade de Concordia, em Montreal. Hoje vamos mostrar um procedimento para a dissecação de ascos de levedura que geralmente são referidos como ra.Utilize este procedimento em nosso laboratório para instruir linhagens haploides D com genótipos novos e para estudar os efeitos da combinação de duas mutações. Então, vamos começar: para construir uma linhagem diploide, duas linhagens haploides de tipos de acasalamento opostos são cruzadas. As linhagens haploides são primeiramente estriadas em meios apropriados — YPD, em nosso caso — para produzir colônias isoladas usando um alça de inóculo estéril; escolha uma pequena porção de uma colônia de uma das duas linhagens haploides em uma nova placa de YPD e estrie o alça.Uma vez em linha reta através da placa, marque a direção do esfregaço com uma seta na parte inferior da placa. Em seguida, retire uma pequena porção de uma colônia da outra linhagem haploide na mesma placa YPD. Esfregue a colônia perpendicularmente à primeira linhagem, cruzando o primeiro esfregaço com a segunda marca, na direção do segundo esfregaço.E observe a área onde a segunda estria cruza a primeira. Essa área será onde os diploides são produzidos.Incube a placa de YPD a 30 graus Celsius durante a noite. Após a incubação noturna, replique a placa de YPD em um meio seletivo que permita seletivamente o crescimento dos diplóides recém-formados. Incube a placa durante a noite a 30 graus Celsius.Uma vez que os diploides tenham crescido na placa, escolha uma única colônia, se possível, ou uma pequena porção do filete de diploides para repicar no mesmo meio seletivo, a fim de gerar colônias isoladas. Após a obtenção da linhagem diploide, selecione colônias isoladas e faça pequenos filetes em placas de esporulação. Incube a 30 graus Celsius por três a sete dias para promover a esporulação.Para verificar a esporulação, examine células de cada colônia ao microscópio óptico. Coloque as células em uma lâmina de microscópio e adicione de cinco a dez microlitros de água.Coloque uma lamínula sobre a gota e verifique a presença de ascos. Se os ascos não forem encontrados ou forem difíceis de localizar, coloque a placa no incubador. Se houver esporulação efetiva em um dos segmentos, prepare um tubo cônico estéril de 15 mililitros com 100 microlitros de suco de tetra.Retire células deste fragmento de esporulação com uma alça de inóculo estéril de três milímetros e coloque-as no suco de tétrade. Gire suavemente a alça para permitir que as células se soltem e se misturem à solução. Deixe as células no suco de tétrade por quatro a dez minutos.Isso permite a digestão da parede celular que envolve os esporos de ASCO. Para preparar uma placa para a dissecação de ascos, marque a parte superior e inferior da região de inóculo em uma placa de YPD. Quando as células forem suficientemente digeridas, retire cinco microlitros das células digeridas e coloque suavemente gotas em linha na região de inóculo da placa de YPD previamente marcada, utilizando um alça de inóculo estéril de três milímetros.Espalhe muito suavemente as gotas de uma a três vezes em alinhamento, fazendo apenas leve contato com o saca-rolhas. Deixe o líquido ser absorvido pelo saca-rolhas. Agora você está pronto para iniciar a dissecação dos ascos.Para iniciar a dissecação dos ascos, coloque a placa de dissecação sob o microscópio de manipulação micromanipuladora singer MSM system 200. Foque em uma região da placa onde metade do campo contenha células e a outra metade esteja vazia. Lentamente, traga a agulha ao foco, de modo que ela toque a região vazia do campo.O contato entre a agulha e o ágar é visto como um círculo preto escuro que entra lentamente em foco. Após a agulha tocar o ágar, recue-a um pouco e verifique se nenhuma célula foi depositada na área onde a agulha tocou o ágar. Isso garante que a agulha não contenha células de um uso anterior.Vá até a matriz na posição A1 e faça uma marca perfurando com a broca. Novamente, isso ajuda a determinar a orientação da placa. Se for removida antes de a dissecação estar completa.Alterne para o modo de busca. Localize um asco. Os quatro esporos do ASCUS devem ainda estar ligados uns aos outros.Dois esporos ASCUS podem ser ligeiramente maiores que os outros dois. Evite escolher ascos nos quais um esporo ASCA esteja solto e não conectado aos demais esporos ASCA. Para coletar um asco, mova lentamente a agulha em direção à placa.Quando a sombra da microneedle for vista, alinhe-a com o asco a ser coletado. Mova a agulha até que o contorno preto de um círculo seja visível. Toque o tetrade com este círculo e, em seguida, retire rapidamente a agulha.Certifique-se de que todas as quatro esporos de um asco aderiram à agulha e de que nenhuma célula adicional que não faça parte desse asco foi coletada pela micropipeta. Uma vez que o asco tenha sido coletado pela micropipeta, afaste a micropipeta da placa e dirija-se à matriz. Para o primeiro asco, vá para a posição a um.Coloque o asco para baixo tocando a placa com a micropipeta e puxando para longe até que todos os quatro esporos se soltem da micropipeta; bater levemente no braço da agulha ou na plataforma que sustenta a placa de YPD frequentemente é útil. Nesta etapa.Continue a localizar, coletar e posicionar os ascos em posições consecutivas na matriz até obter o número desejado de ASCI. Anote cada posição onde um ASCUS é realocado. Quando o número desejado de ascos tiver sido coletado, retorne a cada ask us e separe as quatro células, desembaraçando-as com a agulha, batendo suavemente na plataforma ou usando uma combinação de ambos os métodos.Colete as células deixando uma para trás. Transfira a célula remanescente. Peça a E para uma nova posição na matriz e repita até cada solicitação.A APO em cada asco é separada em fileiras de quatro. Uma dissecação de ascos é concluída. Coloque a placa de YPD em uma incubadora a 30 graus Celsius por vários dias para observar o padrão de crescimento.Uma vez que os ascos dissecados tenham crescido, replique-os em meio seletivo. Se necessário, esta é uma placa que foi replicada e tanto a placa original de dissecção quanto a placa seletiva foram incubadas durante a noite. Os resultados observados na placa seletiva devem ser analisados, e a célula haploide apropriada deve ser identificada e selecionada.Em casos em que os diplóides não podem ser identificados em placas seletivas, é necessário selecionar manualmente os haplóides acasalados, chamados zigotos, que são facilmente identificados em um estágio inicial após o acasalamento. O procedimento para preparar as células haplóides e para o acasalamento é idêntico ao já descrito, exceto pelo fato de que a região onde o diplóide deverá estar é examinada após tempos mais curtos de incubação a 30 graus Celsius. Verificamos que quatro a seis horas são um bom ponto de partida, mas a duração ideal deve, em última instância, ser determinada empiricamente.Verifique a presença de zigotos em um microscópio óptico; os zigotos aparecerão como células em formato de haltere, com ou sem brotamento. Colete as células com um alça de inoculação de três milímetros e coloque-as suavemente em 100 microlitros de água estéril. Após a transferência das células para uma placa YPD previamente marcada, use uma alça de inoculação de três milímetros para espalhar as gotas em uma linha muito suavemente, fazendo contato mínimo com o ágar. Deixe o líquido ser absorvido pelo ágar.Prossiga para o microscópio de dissecação. Foque em uma região da placa onde metade do campo contenha células e a outra metade esteja vazia. Lentamente, traga a agulha ao foco de modo que ela toque a região vazia do campo.Conforme mostrado anteriormente. Verifique se a agulha não contém células de um uso anterior. Vá até a matriz na posição A um e faça uma marca perfurando a broca.Novamente, para ajudar a determinar a orientação da placa. Alterne para o modo de busca e localize um zigoto. Pegue o zigoto com a agulha.Coloque os zigotos individualmente sobre a matriz. Deixe os zigotos crescerem por vários dias. Transfira as células diplóides para placas de esporulação e prossiga como na parte três.O acasalamento de duas linhagens haploides de tipos de acasalamento opostos gera uma linhagem diploide. Esta placa YPD mostra os resultados de um acasalamento entre uma linhagem sensível à temperatura com atrofia lu dois ox e uma linhagem selvagem. As linhagens digeridas são espalhadas na região de inóculo à esquerda, onde se observa crescimento denso entre as duas linhas pretas.Os ascos que foram dissecados crescem distribuídos uniformemente na matriz à direita. Quando esta placa de YPD foi replicada em uma placa de SD sem leucina, observamos o crescimento dois para dois para o marcador LU dois, indicando que um esporo de asco válido foi dissecado. A placa original de YPD também foi replicada em outra placa de YPD e incubada em uma temperatura mais alta, de 37 graus Celsius, onde o crescimento dois para dois valida ainda mais que um esporo de asco foi dissecado.Acabamos de mostrar como produzir duas linhagens de células haid e selecionar diploides. Com base em dois métodos diferentes, um utiliza marcadores tróficos e o outro baseia-se na morfologia celular. Ao utilizar este procedimento, é extremamente importante lembrar-se de selecionar as linhagens de células haid recém-construídas a partir de uma tetra-dissecação, na qual os marcadores atróficos são representados conforme previsto.Também é importante lembrar de não realizar digestão excessiva nem insuficiente. Os tetras como ascos não conseguiram permanecer unidos em tétrades, o que ocorre quando houve digestão excessiva, ou são difíceis de separar em tétrades que foram submetidas a digestão insuficiente. Assim sendo, é isso.Boa sorte com seus experimentos.

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

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