Name: Medição Caenorhabditis elegans Expectativa de Vida em meios sólidos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-12T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 49 s
Description: Aprenda a medir a expectativa de vida de C. elegans em meios sólidos com bactérias mortas por UV. Este protocolo sincronizado por idade permite estudar o envelhecimento em nematoides de forma precisa e controlada.

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<p class="jove_content"> Este trabalho foi financiado por um Avanços Glenn / AFAR em Gerontologia e Grant Award NIH 1R01AG031108-01 a MKGS é suportado pelo NIH treinamento conceder P30AG013280. MK é um Ellison Medical Foundation Scholar novo no Envelhecimento. </p>

<p class="jove_title"> Parte 1: Prepare nematóide crescimento media (NGM) placas </p><p class="jove_content"> Esta seção descreve a preparação das placas NGM sólido para uso no experimento vida. A experiência de extensão básicas da vida requer dois tipos de placas: placas NGM padrão, que não contêm aditivos, e Amp / FUDR placas, que têm ampicilina (Amp) e fluorodeoxyuridine (FUDR) adicionado ao NGM. Ampicilina é usado para prevenir a contaminação bacteriana estrangeiros. FUDR inibe a divisão celular, reduz a produção de ovos, e impede que os ovos de incubação. O uso de FUDR para a análise da longevidade não afeta expectativa de vida de adultos e elimina a necessidade de transferência de worms cada poucos dias, a fim de separá-los de larva a crescer. Ambos os tipos de placas são semeados com <em>E. coli</em> OP50 bactérias, que é posteriormente morto por exposição a UV. </p><ol><li> Prepare NGM (ver secção 5 para receita e notas de armazenamento) e placas de petri rótulo. Você vai precisar de uma placa de petri 60 milímetros por 10 mL de NGM. Se você está começando com previamente preparado NGM sólida, avance para o passo 1.2. Se você está começando com NGM recém autoclavado, pule para o passo 1.4. </li><li> Derreter completamente NGM sólido por microondas em alta em 30 pulsos segundo. Media redemoinho entre os pulsos para evitar bolhas de gás pressurizado de edificação. </li><li> NGM lugar líquido em 55 ° C ou banho de água na bancada para esfriar. </li><li> Uma vez que NGM atinge 55 ° C adicionar 33 mL de 150 FUDR mM e 100 mL de 100 mg / mL por 100 mL Ampicilina NGM (para Amp / FUDR placas) e agite para misturar. Para placas NGM sem drogas adicionais prosseguir diretamente para o passo 1.5. </li><li> Utilizando uma técnica estéril, pipetar 10 mL em cada placa NGM petri 60 mm. Evite a formação de bolhas, se possível. Se as bolhas se formam, elas podem ser estalado usando uma ponta da pipeta. </li><li> Deixar as placas sobre a bancada com tampas para permitir NGM para solidificar e seco. Se possível, deixe as placas no banco por 2 dias antes da adição de bactérias, mas um dia vai funcionar se as placas são necessários mais cedo. </li><li> No dia antes de terminar a secagem das placas, a semente da cultura LB líquido com uma única colônia a partir de uma raia fresca de <em>E. coli</em> OP50 bactérias em agar LB. Você deve preparar, pelo menos, 1 mL de uma cultura OP50 noite por 60 placa mm. </li><li> Cultura local OP50 em 37 ° C shaker e permitir que as bactérias cresçam overnight (a cultura deve atingir a saturação). </li><li> Pellet OP50 bactérias girando a 3.500 g por 10 minutos. </li><li> Remover 90% das bactérias sobrenadante e ressuspender concentrar cultura 10x. </li><li> Pipetar 100 mL da cultura 10x OP50 concentrada no centro de placas NGM solidificado. Placas agite cuidadosamente para espalhar cultura de bactérias se necessário (o ideal bactérias deve cobrir a área central da NGM sem chegar perto das muralhas da placa). Tente evitar tocar a ponta da pipeta na superfície da NGM, como falhas na superfície dos meios de comunicação permitirá que as minhocas burrow na NGM. </li><li> Deixe placas no banco durante a noite para permitir cultura de bactérias para secar na NGM sólido (normalmente demora cerca de 24 horas). </li><li> Depois de seco, expor a superfície das placas a uma dose UV suficiente para deter o crescimento das bactérias. Se você estiver usando uma Stratalinker UV Stratagene 2400: <ul><li> Placas lugar no Stratalinker e remover as tampas </li><li> Feche a porta e ligar o Stratalinker </li><li> "Energia" de imprensa </li><li> Digite '9999 'usando o teclado </li><li> 'Start' imprensa </li><li> As placas serão expostos aos raios UV por aproximadamente 5 minutos </li></ul></li><li> Placas com as bactérias UV-morto pode ser armazenado de cabeça para baixo a 4 ° C por até 1 mês. </li></ol><p class="jove_title"> Parte 2: Executar um ovo cronometrados que estabelece uma idade para a aquisição sincronizada população de animais </p><p class="jove_content"> Nesta seção, vamos gerar uma população de vermes com uma data comum hatch. Isto é conseguido, permitindo que adultos reprodutivamente ativos para colocar ovos em um prato por um período definido de tempo e permitindo que os ovos se desenvolvam. </p><ol><li> (Opcional) Transferência de aproximadamente 20 vermes adultos jovens a uma placa NGM fresca sem FUDR. Deixar as placas a 25 ° C, a fim de permitir que worms se propaguem e comer através de todos os alimentos bacteriana. Depois que o alimento foi consumido bacteriana worms recém-nascidos vai entrar no estágio de crescimento preso Dauer. Você começará a ver larva Dauer em torno de uma semana, dependendo de quantos worms você transferir para a placa inicialmente. Dauer larva pode ser usado para as próximas etapas para até um mês. </li><li> (Opcional) Transferência larva Dauer 20-30 a uma placa NGM fresca sem FUDR. Na presença de larva de alimentos se tornarão adultos Dauer reprodutivamente ativa dentro de 2 dias e manter-se reprodutivamente ativa por alguns dias depois a 25 ° C. </li><li> Transferência de 10-15 adultos reprodutivamente ativa para uma placa NGM fresca sem FUDR. Esta placa é referida como a postura de ovos cronometrado (TEL) da placa. </li><li> Deixe a placa TEL a 25 ° C durante 6 horas, a fim de permitir que tele worms tempo para botar ovos. </li><li> Remover vermes adultos de placa TEL. Placa pode ser inspeccionados visualmente para os ovos antes de remover os adultos. Se os vermes não tenham estabelecido um número suficiente de ovos a placa TEL podem ser deixados a 25 ° C por até um total de 24 horas antes de retirar vermes adultos. </li><li> Colocar a placa TEL a 20 ° C até que os ovos eclodiram e os vermes desenvolveram ao estágio larval L4 (o que normalmente leva 2 dias para tipo selvagem C. elegans, mas pode demorar mais tempo para as cepas com fenótipos de desenvolvimento lento). </li></ol><p class="jove_title"> Parte 3: animais Partituras de vida </p><p class="jove_content"> Nesta seção, siga as idade sincronizado população de vermes na parte 2 até morrerem. Worms são mantidos em Amp / FUDR placas para impedir a produção de ovos ea contaminação bacteriana e são considerados mortos quando não conseguem responder a estímulos externos. </p><ol><li> Transferência de larva L4 para semeado Amp / FUDR placas. Para cada estirpe ou condição a ser testada, é típico para configurar 2-3 placas com 25-30 worms por placa. Imagens da <em>C.</em> fases da vida <em>elegans</em> são fornecidos para a referência (Figura 1) <sup>1.</sup> </li><li> Lugar Amp / FUDR placas a 20 ° C por 24 horas. </li><li> Após 24 horas, visualmente avaliar worms, mídia e bactérias. Transferência de worms para fresco Amp / FUDR placas se qualquer um dos seguintes é observado: <ul><li> Worms ter comido a maior parte dos alimentos bacteriana. No início da vida worms experimento extensão terá de ser transferida 1-2 vezes por semana para evitar que as bactérias fossem esgotados. </li><li> Um número significativo de larvas estão presentes. Isso geralmente é uma indicação de que os vermes foram transferidos para as placas Amp / FUDR como jovens adultos, em vez de L4s e foram capazes de colocar alguns ovos antes da FUDR entrou em vigor. O FUDR geralmente impedir que as larvas se transformem em adultos completa, mas, ocasionalmente, alguns vão se transformar em adultos e se confundem com os animais experimentais. </li><li> Bactérias vivas / crescentes são observadas. Geralmente, a combinação de Amp e UV-matança vai garantir que nenhuma bactéria contaminar viver a experiência, mas ocasionalmente ocorre. </li><li> Crescimento do fungo é observada na mídia. Se detectada a tempo, o crescimento de fungos geralmente podem ser cortadas usando uma ponteira ou espátula. Uma vez que cresce a ser maior do que alguns milímetros de diâmetro é geralmente mais fácil de transferir os vermes para um novo prato. </li><li> Usando o escopo de dissecação, determinar se cada um worm é vivo ou morto. </li><li> Bata suavemente a placa. O worm é vivo se move em resposta ao toque. </li><li> Se o worm não responde a tocar a placa de zoom, em na região da cabeça. </li><li> Bata suavemente a cabeça do verme com pick transferência de platina. Pontuação o worm como morto, se ele não responder movendo a cabeça. </li><li> Worms mortos pode ser removido da placa. </li></ul></li><li> Registrar a data eo número de vermes que estão vivos e mortos. </li><li> Retorno placas a 20 ° C. </li><li> Repita os passos 3,3 a 3,6 a cada 2 a 3 dias até que todos os vermes já morreram. </li></ol><p class="jove_title"> Parte 4: Resultados Representante. </p><p class="jove_content"> Os dados brutos produzidos por um período de experiência de nematóides de vida é uma lista de datas com números correspondentes de vermes que estão vivos e mortos para cada cepa testada. O número de worms que morrem em cada dia é tipicamente invertido para calcular a proporção de vermes vivos em cada dia (Figura 2A), que é plotado graficamente como uma curva de sobrevivência (Figura 2B, o dia da postura de ovos cronometrado é considerado dia 0 ). O tempo de vida para cada verme individuais no estudo pode ser calculado a partir da contagem de vermes que morrem em cada dia e usado para calcular tempo de vida média e mediana para a comparação entre as linhagens. A contagem do número de vermes vivos em cada dia não é utilizado diretamente na análise de ciclo de vida. Worms mantidos em meios sólidos irá ocasionalmente 'fugir', ou rastrear tanto para cima da parede da placa ou para baixo abaixo da media. O número de vermes vivos em cada dia pode ser usado para determinar quantos worms fugiram durante todo o curso do experimento. Worms que fogem são normalmente removidos da análise. Como referência, o tempo de vida típico mediana para N2, a <em>C. elegans</em> cepa do tipo selvagem, mantidos em UV-matou as bactérias a 20 ° C é de aproximadamente 25 dias, como medida de ovo. </p><p class="jove_title"> Parte 5: Soluções </p><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>Nematóide Crescimento Media (NGM), 100 mL:</strong> </td></tr><tr><td colspan="2"> Combine: </td></tr><tr><td> 0,3 g </td><td> NaCl </td></tr><tr><td> 0,25 g </td><td> Peptona </td></tr><tr><td> 2 g </td><td> Agar </td></tr><tr><td colspan="2"> <strong>Autoclave por 40 minutos e deixe esfriar até 55 ° C, em seguida, acrescentar:</strong> </td></tr><tr><td> 100 L </td><td> 1 M MgSO <sub>4</sub> </td></tr><tr><td> 100 L </td><td> Colesterol 5 mg / mL </td></tr><tr><td> 100 L </td><td> 1 M CaCl<sub>2</sub> </td></tr><tr><td> 1,625 mL </td><td> 1,5 M pH 6,0 KPI </td></tr><tr><td colspan="2"> NGM líquido pode ser usado imediatamente para derramar placas ou permissão para solidificar e armazenados a longo prazo na temperatura ambiente </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>Luria Broth (LB), 1L:</strong> </td></tr><tr><td> 10 g </td><td> BactoTryptone </td></tr><tr><td> 5 g </td><td> Extrato de levedura </td></tr><tr><td> 10 g </td><td> NaCl </td></tr><tr><td> 10 mL </td><td> 1 M Tris pH 8,0 </td></tr><tr><td> 1 L </td><td> água deionizada </td></tr><tr><td colspan="2"> Autoclave e armazenar em temperatura ambiente. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>1 M MgSO <sub>4,</sub> 300 mL:</strong> </td></tr><tr><td> 73,95 g </td><td> MgSO <sub>4</sub> </td></tr><tr><td> 300 mL </td><td> água deionizada </td></tr><tr><td colspan="2"> Autoclave e armazenar em temperatura ambiente. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>Colesterol 5 mg / mL, 200 mL:</strong> </td></tr><tr><td> 1 g </td><td> colesterol </td></tr><tr><td> 200 mL </td><td> Etanol 100% </td></tr><tr><td colspan="2"> Filtro de esterilizar e armazenar à temperatura ambiente. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>1 M CaCl <sub>2,</sub> 500 mL:</strong> </td></tr><tr><td> 27,75 g </td><td> CaCl <sub>2</sub> </td></tr><tr><td> 500 mL </td><td> água deionizada </td></tr><tr><td colspan="2"> Filtro de esterilizar e armazenar à temperatura ambiente. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>1,5 M pH 6,0 KPI, 1L:</strong> </td></tr><tr><td colspan="2"> Combine: </td></tr><tr><td> 31,4 g </td><td> KPI dibásico </td></tr><tr><td> 179,6 g </td><td> KPI monobásico </td></tr><tr><td> 850 mL </td><td> água deionizada </td></tr><tr><td colspan="2"> De calor durante a mistura para permitir KPI para dissolver na solução. Ajustar o pH para 6,0 com NaOH 10 N. </td></tr><tr><td colspan="2"> Adicione água deionizada para 1 L. </td></tr><tr><td colspan="2"> Autoclave e armazenar em temperatura ambiente. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>1 M Tris, pH 8.0:</strong> </td></tr><tr><td> 60,57 g </td><td> Tris </td></tr><tr><td> 400 mL </td><td> água deionizada </td></tr><tr><td colspan="2"> Ajustar o pH para 8,0 com HCl. </td></tr><tr><td colspan="2"> Adicionar água deionizada até 500 mL. </td></tr><tr><td colspan="2"> Filtro de esterilizar e armazenar à temperatura ambiente. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>150 mM Fluorodeoxyuridine (FUDR), 10 mL:</strong> </td></tr><tr><td> 0,3693 g </td><td> FUDR </td></tr><tr><td> 10 mL </td><td> água deionizada estéril </td></tr><tr><td colspan="2"> Armazenar a -20 ° C. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>100 mg / mL Ampicilina (AMP), 10 mL:</strong> </td></tr><tr><td> 1 g </td><td> Ampicilina </td></tr><tr><td> 10 mL </td><td> água deionizada estéril </td></tr><tr><td colspan="2"> Armazenar a -20 ° C. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>50 mg / mL carbenicilina (Carb), 10 mL:</strong> </td></tr><tr><td> 500 mg </td><td> Carbenicilina </td></tr><tr><td> 10 mL </td><td> água deionizada estéril </td></tr><tr><td colspan="2"> Armazenar a -20 ° C. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>1 M isopropílico β-d-Thiogalactopyranoside (IPTG), 10 mL:</strong> </td></tr><tr><td> 2,38 g </td><td> IPTG </td></tr><tr><td> 10 mL </td><td> água deionizada estéril </td></tr><tr><td colspan="2"> Armazenar a -20 ° C. </td></tr></tbody></table><p class="jove_content"><img src="/files/ftp_upload/1152/Figure%201.png" alt="figura 1"><br> <strong>Figura 1.</strong> Brilhante imagens campo de <em>C.</em> fases da vida <em>elegans,</em> incluindo ovo, quatro estágios larvais (L1 - L4) e adultos. Todos os painéis mostram hermafroditas, exceto o inferior direito, o que mostra um homem adulto (Imagem de Wood (1988)). </p><p class="jove_content"><img src="/files/ftp_upload/1152/Figure%202.png" alt="figura 2"><br> <strong>Figura 2.</strong> Os resultados representativos de um <em>C. elegans</em> experimento tempo de vida comparando N2 linhagem selvagem tipo para uma cepa que contém uma mutação no gene <em>daf-2.</em> (A) Uma tabela mostrando os dados coletados, incluindo o número de dias desde worms foram ovos, número de vermes mortos observadas em cada dia, ea porcentagem da amostra original permanecer vivo em cada dia (como calculado a partir da contagem diária de vermes mortos) . (B) Survival curvas correspondentes aos dados de tempo de vida previsto no (A). </p><p class="jove_content"><imgsrc files alt='"figura'></imgsrc> <strong>Figura 3.</strong> Comparação Representante da lipofuscina entre jovens e velhos adulto <em>C. elegans.</em> Imagens de campo claro são mostrados à esquerda e as imagens de fluorescência DAPI canal à direita. Painéis superiores mostram um verme 4 dias de idade e painéis de fundo mostram um worm de 11 dias de idade (medida a partir de ovo). </p>

<ol><li>Wood, W. B. <em><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWood%2C+WB+%22The+Nematode+Caenorhabditis+elegans%22">The Nematode Caenorhabditis elegans</a></em>. Wood, W. B. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, NY. 1-16 (1988).</li>
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</ol>

<p class="jove_content"> O controle genético da longevidade tem sido estudado extensivamente em <em>C. elegans,</em> em grande parte devido à facilidade e rapidez com que expectativa de vida pode ser determinada. O protocolo discutido neste artigo descreve uma estrutura básica para a obtenção de dados de vida reprodutíveis extensão em <em>C. elegans</em> e também pode ser aplicado às espécies relatednematode. <sup>2</sup> Ao fazer algumas alterações simples desses procedimentos pode ser adaptado para medir a expectativa de vida sob uma variedad...

<table><tbody><tr><td>Ágar</td><td>Reagente</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0145-17-0 (214530)</td><td></td></tr><tr><td>Ampicilina</td><td>Reagente</td><td>MidSci</td><td>0339</td><td></td></tr><tr><td>BactoTryptone</td><td>Reagente</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0123-17-3 (211705)</td><td></td></tr><tr><td>BactoPeptona</td><td>Reagente</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0118-17-0 (211677)</td><td></td></tr><tr><td>CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Reagente</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9699248 (1332-01)</td><td></td></tr><tr><td>Carbenicilina</td><td>Reagente</td><td>Gold Biotechnology</td><td>C0109</td><td></td></tr><tr><td>Colesterol</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C75209</td><td></td></tr><tr><td>Fluorodesoxiuridina (FUDR)</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F0503</td><td></td></tr><tr><td>Isopropil &amp;#946;-d-Tiogalactopiranosídeo (IPTG)</td><td>Reagente</td><td>Gold Biotechnology</td><td>I2481C5</td><td></td></tr><tr><td>KPi dibásico</td><td>Reagente</td><td>Fisher Scientific</td><td>5087862 (3252-01)</td><td></td></tr><tr><td>KPi monobásico</td><td>Reagente</td><td>Fisher Scientific</td><td>5087861 (3246-01)</td><td></td></tr><tr><td>MgSO₄&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Reagente</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9561800 (2500-01)</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Reagente</td><td>Fisher Scientific</td><td>S251</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1503</td><td></td></tr><tr><td>Extrato de levedura</td><td>Reagente</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0886-17-0 (288620)</td><td></td></tr></tbody></table>

medição<em> caenorhabditis elegans</em> expectativa de vida em meios sólidos

Measuring <em>Caenorhabditis elegans</em> Life Span on Solid Media

<p class="jove_content">O envelhecimento é um processo degenerativo caracterizado por uma deterioração progressiva de componentes celulares e organelas, resultando em mortalidade. O nematóide<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Surgiu como um modelo principal utilizado para estudar a biologia do envelhecimento. Porque praticamente todos os subsistemas biológico sofre declínio funcional com o aumento da idade, expectativa de vida é o objetivo primário de interesse quando se considera taxa total de envelhecimento. Em nematóides, expectativa de vida é normalmente definida como o número de dias de um animal continua a responder a estímulos externos. Nematóides podem ser propagadas tanto em meios líquidos ou em meios sólidos em placas, e as técnicas foram desenvolvidas para medir o tempo de vida em ambas as condições. Aqui apresentamos um protocolo generalizada para medir tempo de vida dos nematóides mantidos em meio de crescimento sólido de nematóides e alimentados com uma dieta de UV-morto bactérias. Estes procedimentos podem ser facilmente adaptado a vida útil do ensaio sob várias condições comuns, incluindo uma dieta composta de bactérias vivas, a restrição alimentar e interferência de RNA.</p>

<p class="jove_content">Neste artigo apresentamos um protocolo geral para medir a expectativa de vida dos nematóides mantidos em meios sólidos com alimentos UV-morto bacteriana.</p>

Medição<em> Caenorhabditis elegans</em> Expectativa de Vida em meios sólidos

O envelhecimento é um processo degenerativo caracterizado por uma deterioração progressiva dos componentes e organelas celulares, resultando em mortalidade. O nematoide ...

<p>Para medir a longevidade em C. elegans, uma população sincronizada por idade é gerada por meio de uma postura de ovos controlada no tempo. Vermes hermafroditas adultos ativos são transferidos para placas de meio de crescimento de nematoides inoculadas com E. coli morta por UV, onde permanecem por seis a oito horas para postura de ovos e, em seguida, são removidos. Nos dois dias seguintes, vermes eclodem desses ovos e crescem até o estágio larval L4. Os vermes L4 são transferidos para novas placas de NGM contendo ampicilina para prevenir contaminação bacteriana viva e FUDR para impedir a reprodução, sendo então deixados desenvolverem-se até a fase adulta.</p><p>A partir deste momento, os vermes adultos são observados a cada dois ou três dias até que todos os vermes tenham morrido. Em cada ponto temporal, os vermes mortos são removidos da placa e o número de vermes vivos e mortos é registrado. Eu sou George Seton do laboratório de Matt Capline do Departamento de Patologia da Universidade de Washington.</p><p>Hoje vamos mostrar como medir a longevidade e observar a nossa elegância em hepatite. Utilizamos este procedimento em nosso laboratório para estudar a genética do envelhecimento. Então, vamos </p>

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Biologia

Neste protocolo, apresentamos um método para...

Medição<em> Caenorhabditis elegans</em> Expectativa de Vida em 96 placas de microtitulação Bem

Este vídeo descreve um método tradicional baseado em placas para medir a vida útil de C. elegans. O protocolo de exemplo mede a vida útil de vermes tratados com RNAi.

Análise de vida útil: medindo <em>a longevidade de C. elegans</em>

Um ensaio ovo-in-worm (EIW) é um método útil para quantificar o comportamento de postura. Alterações na postura de ovos pode ser uma resposta comportamental do organismo...

Medição dos Efeitos de bactérias em<em&gt; C. Elegans</em&gt; Comportamento Usando um Retenção Ensaio Egg

Aqui detalhamos protocolos projetados especificamente para monitorar defeitos morfogênicos que ocorrem durante as fases inicial e tardia do alongamento embrionário do nematóide Caenorhabditis elegans. Em última análise, esses protocolos são projetados para identificar genes que regulam essas fases e caracterizar suas necessidades diferenciais ao longo do eixo ântero-posterior do embrião.

Novas métricas para Caracterizar Embryonic Alongamento do nemátodo<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Aqui, apresentamos um quadro para relacionar a restrição dietética de vasta gama de expectativa de vida e expressão gênica. Descrevemos os protocolos para a vasta gama de restrição dietética e para a imagem latente quantitativa da expressão do gene sob esse paradigma. Nós esboçamos mais análises computacionais para revelar subjacentes recursos de processamento de informações dos circuitos genéticos envolveram na detecção comida.

Quantificação da informação codificada pelos níveis de expressão gênica durante modulação do tempo de vida sob ampla restrição alimentar em C. elegans.

Aqui descrevemos o método conjunto de réplicas, uma abordagem quantitativamente medida de expectativa de vida/sobrevivência de c. elegans e healthspan de forma robusta e de alta produtividade, permitindo assim a seleção de muitas condições sem sacrificar a qualidade dos dados. Este protocolo detalha a estratégia e fornece uma ferramenta de software para análise de dados do conjunto de réplicas.

O método de conjunto de réplica: Uma abordagem de alto rendimento para quantitativamente medida <em>Caenorhabditis elegans</em> expectativa de vida

Caenorhabditis elegans servem como um excelente sistema de modelos com métodos robustos e de baixo custo para levantamento da vida saudável, vida útil e resiliência ao estresse.

Pesquisando métodos de baixo custo para medir a expectativa de vida e a saúde em <em>Caenorhabditis elegans</em>

Apresentamos aqui um protocolo otimizado para o cultivo de nematoides individuais isolados em meios sólidos em dispositivos microfabricados de múltiplos poços. Essa abordagem permite que animais individuais sejam monitorados ao longo de suas vidas para uma variedade de fenótipos relacionados ao envelhecimento e à saúde, incluindo atividade, tamanho e forma corporal, geometria do movimento e sobrevivência.

Cultura de Longa Duração e Monitoramento de <em>Caenorhabditis elegans Isolados</em> em Meio Sólido em Dispositivos Multipoços

Aqui, apresentamos um protocolo para cultura de isolados de nematoides individuais em meio sólido para rastreamento de parâmetros fisiológicos ao longo da vida e quantificação de fluorescência. Este sistema de cultura inclui uma barreira de ácido palmítico ao redor de poços de verme único para evitar a fuga de animais, permitindo o uso de intervenções aversivas, incluindo bactérias patogênicas e estressores químicos.

Cultura de Longo Prazo de <em>Caenorhabditis elegans</em> Individuais em Meio Sólido para Monitoramento Longitudinal de Fluorescência e Intervenções Aversivas

Aqui, apresentamos um método geral para determinar a viabilidade embrionária e o número total de embriões produzidos (ninhada) usando o organismo modelo C. elegans.

Mensuração da Viabilidade Embrionária e do Tamanho da Ninhada em <em>Caenorhabditis elegans</em>

Este protocolo descreve um ensaio para quantificar a taxa de alimentação de Caenorhabditis elegans com base na medição da depuração de bactérias em cultura líquida.

Quantificando a ingestão de alimentos em <em>Caenorhabditis elegans</em> medindo a depuração bacteriana

Aprenda a medir a expectativa de vida de C. elegans em meios sólidos com bactérias mortas por UV. Este protocolo sincronizado por idade permite estudar o envelhecimento em nematoides de forma precisa e controlada.

Medição Caenorhabditis elegans Expectativa de Vida em meios sólidos

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