Name: A amostragem da água do mar e Cobrança (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-06-17T19:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 23 s
Description: Aprenda métodos de amostragem de água marinha costeira para análises de biomassa, ácidos nucleicos e nutrientes. Este protocolo demonstra técnicas essenciais para pesquisa em biologia marinha e ecossistemas oceânicos.

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Gostaríamos de agradecer à Fundação Canadense para Inovação, a British Columbia Fundo de Desenvolvimento do Conhecimento e das Ciências e Pesquisa de Engenharia National Council (NSERC) do Canadá para apoiar estudos em andamento em regiões de baixo oxigênio das águas oceânicas costeiras e aberto. Além disso, DAW foi apoiado por bolsas de NSERC, Killam ea fundação TULA Centro financiado pela Diversidade Microbiana e Evolution.

Parte 1: Coleta de Água <ol><li> Profundidades são atribuídos a cada elenco. </li><li> Profundidades a amostrar eo volume total a ser recolhido para o elenco atual são determinados. </li><li> É assegurado que o Go-Flo e garrafas Niskin estão abertas, e que as suas válvulas e torneiras estão fechadas. </li><li> O CTD é carregado em parte inferior da linha e menor na água. </li><li> Uma garrafa para a maior profundidade amostrados no primeiro elenco é carregado para a linha após o CTD, é assegurado que a linha está devidamente instalado em suporte e os parafusos são apertados. </li><li> Um mensageiro é anexado a cada garrafa (exceto o mais profundo um) antes de baixar. </li><li> A linha é reduzida a distância entre a profundidade primeiro e no próximo; outra garrafa é então carregado. Note-se que para profundidades onde 20L são coletados para filtração, um total de 2 garrafas de 12L são carregados sobre consecutivamente 0,75 m de distância. </li><li> Uma vez que todas as garrafas estão na linha, a linha é reduzida para a profundidade desejada e 2 minutos são autorizados a passar. </li><li> Um mensageiro é enviado para baixo e alguns minutos são autorizados a passar para garantir que fechar todas as garrafas. </li><li> A linha é reeled e as garrafas são descarregados como eles vêm para cima das prateleiras. </li><li> Para profundidades que exigem amostras de 20L de DNA e RNA, duas garrafas Niskin são coletados. Um frasco da amostra é usada para os parâmetros químicos (veja abaixo), enquanto o outro é drenado para o garrafão. RNA é coletado imediatamente da Niskin segundo. O restante do primeiro também é drenado para o garrafão para dar volume de ~ 20L final. Para amostras de baixa resolução apenas 1L de água é posta de lado para filtração em garrafas estéreis Nalgene. </li></ol> Parte 2: coleta de amostra de gás <ol><li> Se as amostras de oxigênio são necessários, eles são recolhidos em primeiro lugar. </li><li> Um pedaço de tubo fino é anexado ao Niskin / Go-Flo torneira ea outra extremidade do tubo é colocado no lugar de garrafas de vidro de soro. </li><li> O frasco de soro é lavado três vezes com água da amostra, e transbordando de tal forma que nenhuma bolha de ar estão presentes. </li><li> 50μl de cloreto de mercúrio (HgCl 2) são adicionados ao frasco de soro de uma forma que não introduzir bolhas de ar na amostra. </li><li> O frasco é fechado com uma rolha de borracha e frisado com uma cápsula de alumínio, e é então armazenado em gelo em um refrigerador. </li></ol> Parte 3: coleta de amostra de nutrientes <ol><li> Uma seringa cc 60 é lavado com água de amostra, um (0,2 mm) é ligado em linha e um pouco de água é empurrado através da Acrodisc. </li><li> Um frasco de polietileno é lavado com ~ 10 ml de água filtrada 3 vezes (quando apertar garrafa limpeza). </li><li> Amostra de água filtrada é adicionado para as garrafas, cerca de ¾ cheio. </li><li> A amostra é armazenada em gelo no refrigerador. </li></ol> Parte 4: coleta de amostras de amônia <ol><li> Tubos de amostra são lavados com água da amostra. </li><li> Tubos de amostra são preenchidos completamente com água da amostra. </li><li> 5 ml de amostra de água são retirados com uma pipeta de 10ml, o resto da água no tubo é descartado eo 5ml na ponta da pipeta são substituídos dentro do tubo de amostra. </li><li> 7.5ml de reagente de amônio de trabalho é adicionado a cada tubo uma vez amostras de todas as profundidades foram coletadas. </li></ol> Parte 5: Coleta de amostras para contagem de células <ol><li> A pré-rotulados 50 ml tubo Falcon contendo 5,4 ml de formol 37% é cheio até o topo para uma concentração final de 4%. Cuidado é tomado para não derramar. </li></ol> Parte 6: Coleta de amostras para medições de sulfureto de hidrogénio <ol><li> A pré-rotulados 50 ml tubo Falcon contendo acetato de zinco a 20% (Zn (O 2 CCH 3) 2) é cheio até o topo. Cuidado é tomado para não derramar. </li></ol> Parte 7: coleta de pequeno volume para a concentração de biomassa <ol><li> Garrafas de 1 litro são preenchidos até o topo. </li></ol> Parte 8: coleta de grande volume para a concentração de biomassa <ol><li> Garrafões de 20 litros são preenchidos. </li></ol> Parte 9: Resultados Representante O resultado final da água do mar de amostragem resulta em cerca de 12 amostras de oxigênio dissolvido, 32-48 amostras de gás, 16 amostras de nutrientes, 32 amostras de amônio, 16 amostras de sulfeto de hidrogênio, 16 amostras para contagem de células, seis garrafões de 20 litros, 16 garrafas de 1 litro e 4 Sterivex 0.22μm filtros contendo biomassa microbiana preservada com RNA mais tarde.

<ol><li>Cline, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectrophotometric+determination+of+hydrogen+sulfide+in+natural+waters%5BTitle%5D)+AND+%22Limnology+%26+Oceanography%22%5BJournal%5D)">Spectrophotometric determination of hydrogen sulfide in natural waters.</a> Limnology & Oceanography. 14, 454-458 (1969).</li>
<li>Holmes, R. M., Aminot, A., Kerouel, R., Hooker, B. A., Peterson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+precise+method+for+measuring+ammonium+in+marine+and+freshwater+ecosystems%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+fisheries+and+Aquatic+Science%22%5BJournal%5D)">A simple and precise method for measuring ammonium in marine and freshwater ecosystems.</a> Canadian Journal of fisheries and Aquatic Science. 56, 1801-1808 (1999).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a declarar.

No geral, há um grande esforço de preparação e de planeamento necessários para este tipo de amostragem, de modo orçamento 2 dias antes da viagem para fazer as coisas em ordem e um dia depois para a limpeza de tudo. Em geral, não deixe a água salgada entrar em contacto com a bomba peristáltica ou na caixa de Zarges alumínio usado para transportar o equipamento de campo. Tratar o equipamento com respeito e que terá um bom desempenho por um longo tempo para vir.

<table><tbody><tr><td>Garrafões de 20 L</td><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>02-960-15</td><td></td></tr><tr><td>Tubos Tygon de 3/8&quot;</td><td></td><td>Cole-Parmer</td><td>06429-36</td><td></td></tr><tr><td>Filtros Sterivex</td><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>SVG010RS</td><td></td></tr><tr><td>Unidade de pré-filtro</td><td></td><td>AMD</td><td>501200</td><td></td></tr><tr><td>Conector Luer</td><td></td><td>Cole-Parmer</td><td>31507-27</td><td></td></tr><tr><td>Tubos Tygon de 1/4&quot;</td><td></td><td>Cole-Parmer</td><td>06429-24</td><td></td></tr><tr><td>Tubos Tygon de 1/4&quot;</td><td></td><td>Cole-Parmer</td><td>06429-24</td><td></td></tr><tr><td>Tubos Tygon de 1/4&quot;</td><td></td><td>Cole-Parmer</td><td>06429-24</td><td></td></tr><tr><td>Tubos plásticos de 50 ml</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Frasco de soro de vidro</td><td></td><td></td><td></td><td>Coleta de amostra em vidro</td></tr><tr><td>Septos e tampas de alumínio para frascos de soro de vidro</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aplicador manual de tampas</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipeta e ponteiras de 20-200 µl</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubos de vidro</td><td></td><td></td><td></td><td>Coleta de amostra de amônio</td></tr><tr><td>Frasco plástico de 30 ml</td><td></td><td></td><td></td><td>Coleta de nutrientes</td></tr><tr><td>Filtros Acrodisc</td><td></td><td>EMD Millipore</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubos de 5 ml</td><td></td><td></td><td></td><td>Coleta de amostra de nitrito</td></tr><tr><td>Formaldeído a 37%</td><td>Reagente</td><td></td><td></td><td>Para amostras de contagem celular</td></tr><tr><td>Acetato de zinco a 20%</td><td>Reagente</td><td></td><td></td><td>Para amostras de sulfeto</td></tr><tr><td>Cloreto de mercúrio</td><td>Reagente</td><td></td><td></td><td>Para amostras de gás</td></tr><tr><td>Água milliQ</td><td>Reagente</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Reagente padrão de amônio</td><td>Reagente</td><td></td><td></td><td>Tampão borato, sulfito de sódio, ortoftalaldeído</td></tr><tr><td>Sulfanilamida</td><td>Reagente</td><td></td><td></td><td>5 g em 450 ml de água e 50 ml de HCl</td></tr><tr><td>Solução de N-(1-naftil)-etilenodiamina diidrocloridrato</td><td>Reagente</td><td></td><td></td><td>0,5 g em 500 ml de água</td></tr></tbody></table>

a amostragem da água do mar e cobrança

Seawater Sampling and Collection

Este vídeo documenta métodos de coleta de amostras de água costeiros marinhos e processá-los para várias aplicações a jusante, incluindo concentração de biomassa, a purificação de ácido nucléico, a abundância de células, nutrientes e gases traço. Para amostras de demonstração de hoje foram coletados a partir do convés do HMS operacional John Strickland em Inlet Saanich. Um quadro A-guindaste, com um guincho multi-propósito e sistema de cabo, é usado em combinação com Niskin ou Go-Flo garrafas de amostragem de água. Condutividade, temperatura e profundidade (CTD) sensores também são utilizados para provar a massa de água subjacente. Para minimizar a saída de gás, amostras de gases-traço são coletados em primeiro lugar. Então, os nutrientes, química da água, e contagem de células são determinados. Finalmente, as águas coletadas para filtração de biomassa. O tempo de set-up e coleta de um elenco único é de aproximadamente 1,5 hora a uma profundidade máxima de 215 metros. Portanto, um total de seis horas é geralmente necessária para completar a série de coleta descrito aqui.

Este vídeo documenta métodos de coleta de amostras de água costeiros marinhos e processá-los para várias aplicações a jusante, incluindo concentração de biomassa, a purificação de ácido nucléico, a abundância de células, nutrientes e gases traço.

A amostragem da água do mar e Cobrança

Este vídeo documenta métodos para a coleta de amostras de água marinha costeira e o seu processamento para diversas aplicações subsequentes, incluindo biomassa...

Olá, sou Elena Kova do Laboratório de Stephen Hallam, do Departamento de Microbiologia e Imunologia da Universidade da Colúmbia Britânica. Hoje vamos mostrar um procedimento para coletar água do mar para análise física, química e biológica. Utilizamos este procedimento em nosso laboratório para estudar parâmetros oceanográficos das águas marinhas.Então vamos começar. Primeiro, define-se o número de amostragens e as profundidades em cada amostragem, em seguida as profundidades a serem coletadas, e determina-se o volume total a ser coletado para a amostragem atual. Certifique-se de que os dispositivos de coleta de fluxo e de amostragem de água cinética estejam na posição aberta e que todas as válvulas e torneiras estejam fechadas.Acople o CTD à base da linha e abaixe-o na água até a profundidade máxima do perfil. Coloque imediatamente após o CTD um dispositivo de amostragem na linha. Certifique-se de que a linha esteja corretamente encaixada no suporte do dispositivo e de que os parafusos estejam bem apertados.Prenda um mensageiro com peso a cada dispositivo, exceto ao do ponto de amostragem mais profundo, antes de baixá-lo na água. Abaixe a linha e a distância entre a primeira profundidade especificada e a seguinte, então prepare outro dispositivo de amostragem. Observe que, em intervalos de profundidade onde são coletadas amostras de água de grande volume, um total de duas garrafas de 12 litros são carregadas consecutivamente, separadas por aproximadamente 0,75 metros.Após todos os dispositivos estarem na linha, abaixe a linha até a profundidade máxima e aguarde dois minutos. Envie um mensageiro para baixo, acionando cada dispositivo para a posição fechada. Aguarde alguns minutos antes de recolher a linha.Para garantir que todos os dispositivos estejam fechados, enrole o cabo e descarregue cada dispositivo no convés à medida que ele emerge da água. Para profundidades que exigem grandes volumes de amostra para purificação de proteínas, DNA ou RNA, utilize dois dispositivos de amostragem em conjunto. Colete imediatamente o RNA de uma garrafa e filtre-o a bordo.Após coletar amostras de produtos químicos e nutrientes no outro frasco, drenar a água restante para o carro para obter um volume final de 20 litros. Para amostras de baixo volume, reservar um litro de água para filtração em frascos estéreis de Nalgene. Normalmente, amostras de baixo volume provenientes de 16 intervalos de profundidade são coletadas como 16 x uma amostra de um litro e seis x amostras de 20 litros são coletadas como amostras de alto volume.Ao coletar amostras de gás, colete sempre amostras de oxigênio e de gases traço. Primeiro, conecte um pequeno pedaço de tubo ao bico do dispositivo de coleta de água. Coloque a outra extremidade do tubo nos frascos de soro glos.Lave o frasco de soro três vezes, mas com água da amostra, e encha-o até transbordar, de modo que não haja bolhas de ar. Adicione 50 microlitros de cloreto de mercúrio ao frasco de soro. Tenha cuidado para não introduzir bolhas de ar na amostra.Feche o frasco de soro com uma rolha de borracha C e prenda com uma tampa de alumínio, depois armazene em gelo para coletar amostras para medições de nutrientes, incluindo nitrato, fosfato e silicato. Primeiro, enxágue uma seringa de 60 cc com água da amostra. Em seguida, acople um filtro acro disc de 0,2 micrômetro em linha.Empurre aproximadamente dois ml de água através da seringa para purgar o filtro. Enxágue um frasco de polietileno com aproximadamente 10 ml de água filtrada três vezes.Agite o frasco durante a lavagem, depois adicione água da amostra filtrada aos frascos até cerca de três quartos da capacidade. Armazene a amostra sobre gelo. Esvazie os tubos de coleta de água distal para coletar amostras destinadas às medições de amônia.Primeiro, enxágue os tubos de coleta, mas descarte completamente a água da amostra. Encha um cilindro graduado de 10 ml com água da amostra, retire cinco ml da água da amostra do cilindro graduado e esvazie o restante do cilindro. Em seguida, adicione novamente os cinco ml ao cilindro vazio.Uma vez que as amostras de todas as profundidades tenham sido coletadas, adicione 7,5 ml do reagente de trabalho de amônio a cada tubo. Para coletar amostras para contagem de células, encha um tubo Falcon de 50 ml pré-rotulado contendo 5,4 ml de formaldeído a 37% até a marca de 50 ml, obtendo uma concentração final de 4%. Tenha cuidado para não transbordar o tubo. Armazene a amostra sobre gelo até a coleta das amostras.Para medições de sulfeto de hidrogênio. Encha até a boca um tubo Falcon de 50 mL pré-rotulado contendo três mL de acetato de zinco a 20%. Tenha cuidado para não derramar o conteúdo do tubo.Armazene a amostra em gelo para coletar pequenos volumes. Para concentração de biomassa. Encha garrafas Nalgene de um litro até a borda para coletar grandes volumes para concentração de biomassa.Encha garrafões de 20 litros até o topo. O resultado final da coleta de água do mar resulta em aproximadamente 32 a 48 amostras de gás e 32 amostras de amônio.16 amostras de sulfeto de hidrogênio. 16 amostras para contagem de células. Seis garrafas de carro de 20 litros, 16 garrafas de um litro e quatro sterex.Os filtros de dois vírgula dois micrômetros contendo biomassa microbiana são preservados para posterior isolamento de RNA. Acabamos de demonstrar como coletar diferentes tipos de amostras de água para análise bioquímica.Isso exige uma grande quantidade de preparação e planejamento. Portanto, reserve dois dias antes da viagem para organizar as coisas e um dia após para a limpeza; não permita que água salgada entre em contato com a bomba peralt ou com a caixa de alumínio zago usada para transportar o equipamento de campo. Trate o equipamento com respeito e ele funcionará bem por muito tempo.É isso aí. Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Este vídeo volume de documentos grandes (≥ L 20) de filtragem da biomassa microbiana, variando entre 0.22μm e 2.7μm de diâmetro, a partir da coluna de água.

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Este vídeo volume de documentos pequenos (~ L 1) de filtragem da biomassa microbiana da coluna de água.

Volume pequenas (1-3L) Filtragem de Amostras de Água do Mar Coastal

Fonte: Villela, H. D. M. , et al. Prospectação de Cepas Microbianas para Biorremediação e Desenvolvimento de Probióticos para Pesquisa e Preservação de Metaorganismos. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra o isolamento seletivo de bactérias marinhas degradadoras do petróleo ao enriquecer amostras de água do mar em meios à base de petróleo, possibilitando a recuperação de cepas puras com potencial de aplicações na biorremediação de petróleo bruto e limpeza ambiental.

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