Name: High Speed Delivery System Droplet-based para Passive Bombeamento em dispositivos microfluídicos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-09-02T11:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 22 s
Description: Aprenda a configurar um sistema de bombeamento passivo em dispositivos microfluídicos usando válvulas de microdispensação. Este método automatizado oferece alta precisão volumétrica e taxas de fluxo controladas para aplicações biológicas.

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O financiamento foi fornecido pelo Instituto de Wisconsin Discovery.

Neste relatório nós demonstramos um método de entrega de fluido que utiliza tensão superficial de gotas pequenas para bombear um volume desejado através de um canal microfluídicos para atingir um número de fenômenos fluido diferente. Por exemplo, o usuário pode desejar um fluxo de fluido único o mais rápido possível, ou entregar fluidos múltiplos em sucessão rápida para criar padrões específicos fluídico. Para fazer isso, o usuário deve primeiramente ter um aplicativo construído em torno de um dispositivo micro. O dispositivo microflluidic não precisa ser ligado, mas deve ser feito de um material hidrofílico. Therfore, o método pode ser utilizado com praticamente qualquer dispositivo de microfluídica, com um desempenho em grande parte ditada pelas restrições geométricas do canal microfluídicos. Para ajudar a navegar as restrições geométricas deste método, uma introdução à análise numérica relevantes é apresentada em primeiro lugar. <ol><li> Métodos analíticos: De acordo com a Lei de Laplace ea Lei Washburn [1], pode-se relacionar a taxa de fluxo dentro de um canal microfluídicos para suas dimensões e as propriedades do líquido que flui como visto na equação (1), <img src="/files/ftp_upload/1329/eqn1.png" alt="equação 1" /> (1) onde Δ P é a diferença de pressão entre a entrada ea saída, γ é a tensão superficial de líquidos, R é o raio cair de entrada, Q é a vazão e K é a resistência fluídica tal como descrito pela equação (2), <img src="/files/ftp_upload/1329/eqn2.png" alt="equação 2" /> (2) onde η é a viscosidade do líquido, L 0 é o comprimento do canal, h é a altura do canal, w é a largura do canal, λ = w / h e g (λ) = 1,5, se λ&gt; 4,45 ou <img src="/files/ftp_upload/1329/g_lambd.png" alt="símbolo 6" /> se λ &lt;4,45. Substituindo a equação (2) na equação (1), sempre assumindo que h &lt;w e resolvendo para Q, obtém-se a equação (3), (3) <img src="/files/ftp_upload/1329/eqn3.png" alt="equação 3" /> A mesma análise pode ser feito para a velocidade do fluido no interior de um canal por saber que Q = VA, onde V é a velocidade do fluido média e A é a área transversal ou hw. Aplicando estes valores na equação (3) que você venha com a equação (4), (4) <img src="/files/ftp_upload/1329/eqn4.png" alt="equação 4" /> Um conceito importante mecânico que é freqüentemente aplicada em biologia microfluídicos é tensão de cisalhamento, que diz respeito à vazão e velocidade pela equação (5), (5) <img src="/files/ftp_upload/1329/eqn5.png" alt="Equação 5" /> Conhecer a relação entre taxa de fluxo, velocidade e suas implicações físicas em função das dimensões do canal e propriedades do fluido é crucial no projeto de um dispositivo micro para um determinado propósito. Depois que o dispositivo é criado, o usuário deve então calibrar o sistema de oferta de líquidos para atingir as características de fluxo desejado dentro do dispositivo. </li><li> Passos na criação e Calibração Sistema de distribuição: <ol><li> Criar dispositivo micro-litografia macia via técnica usando PDMS (polidimetilsiloxano, Sylgard 184, Dow Corning) [2]. Há artigos que ilustram o número JOVE métodos para a tomada de PDMS dispositivos microfluídicos [5]. Para esta demonstração, nós escolhemos um canal simples em linha reta, com dimensões da seguinte forma: 2,2 milímetros de largura, comprimento de 10mm e altura 260um. A entrada e diâmetros de saída são 1,8 milímetros e 5,1 milímetros, respectivamente (figura 1). Reversivelmente anexar dispositivo PDMS a lâmina de vidro, pressionando-a sobre uma lâmina de vidro (ou outro substrato adequado) e espremer as bolhas de ar [5]. Um anexo reversível permite que o dispositivo a ser re-utilizado várias vezes. O método também pode ser utilizado com dispositivos permanentemente ligada, mas não necessário. </li><li> Preencha dispositivo com líquido. A natureza hidrofóbica do PDMS e da natureza hidrofílica ajuda de vidro mover uma queda que é colocado na entrada ou saída, para o canal. Se a gota de líquido não quer ir para o canal por si só ou se as bolhas se mudar para o canal, o usuário pode colocar uma gota de líquido na entrada ou saída, e usar uma pipeta na extremidade oposta para sugar o líquido através do canal. Outro método de ajudar a mover líquido para o canal é, separando o dispositivo PDMS da lâmina de vidro e suavemente limpar o dispositivo PDMS ea lâmina de vidro com etanol. Isso retorna para o PDMS ea lâmina de vidro a sua natureza hidrofílica e hidrofóbica, respectivamente, o que pode ter sido enfraquecido com o tempo e uso. </li><li> Após o preenchimento do dispositivo com o líquido, coloque uma pequena gota na entrada e um Bigger queda na saída. Certifique-se de passivos de bombeamento está acontecendo observando a pequena queda com o colapso de entrada e observando o fluxo de fluido para a saída. Novamente, certifique-se que não há bolhas no interior do canal. </li><li> Usando A Companhia de Lee [3] VHS micro kit dispensa de partida, reuniu uma ou mais válvulas (configuração de válvula na figura 2) que consiste na VHS Lee M / 2 24 Válvula Volt, um 0,062 Bicos MINSTAC com o tamanho do orifício de 0,0100 &quot;, o Lee Minstac 0,062 para Adaptador Soft Tube, o Spike Lee and Hold Driver (para o controle do usuário, não mostrado) e da Assembléia do cabo (que liga a válvula para a Spike e Segure driver, não mostrado). </li><li> Uma maneira fácil de segurar as válvulas é usando o Bioscience titulares de ferramentas em miniatura (figura 2) [4]. Estes fornecem uma maneira de precisão objetivo e manter a válvula em uma determinada posição durante a experimentação por meio de colagem a válvula para uma extremidade do titular e usando uma base magnética (não mostrado) do outro lado. </li><li> Faça um sistema de reservatório para ser colocado a poucos metros acima do dispositivo micro PDMS (no nosso caso usamos ¾ seringas onça aberto ao ambiente, ver figura 2). O reservatório fornece uma carga de pressão para impulsionar os bicos, com a pressão de ser proporcional à altura do reservatório. Alternativamente, as válvulas de bico pode ser pressurizada por qualquer número de diferentes meios (ie, gás comprimido). Coloque uma agulha da seringa na seringa. A agulha da seringa típico facilmente anexar em tubos 1,14 mm de diâmetro interior. A tubulação milímetros 1,14, então, facilmente anexar em 1,58 milímetros (1 / 16 &quot;) tubo de diâmetro interno que então se conecta ao&quot; Tubo Adaptador Soft &quot;da válvula. Para evitar vazamento de líquido no milímetros 1,14-1,58 conexão de tubulação mm, pode-se usar PDMS como um selante. Agora que há uma linha entre a agulha da seringa e da válvula de Lee Co., encher reservatórios seringa com líquido. Uma seringa extra e uma válvula pode ser usada para ajudar no processo de purga (mostradas, mas não tem nenhum nome na figura 2). Coloque um ímã para o lado da válvula, esta é a forma como estas válvulas são limpos (eles são normalmente fechado válvulas solenóides), e começar a assistir líquido que flui do reservatório através da válvula e para fora do bocal&#39;&#39;0,0100. </li><li> Calibrar sistema escolhendo um tempo de abertura da válvula (tempo de abertura é o tempo que a válvula permite a passagem de líquidos em uma base por pulso) e freqüência (número de pulsos por segundo). Ativar uma válvula para um período escolhido (um minuto ou assim, basta lembrar o tempo de execução total). Pesar o fluido que foi entregue a partir da válvula. Conhecendo o tempo de execução total, freqüência e por tempo de pulso aberto, calcular os gramas por milissegundo tiro para fora da válvula. Este &quot;gramas por milissegundo&quot; valor permitirá que você escolha um tempo aberto para qualquer volume desejado o usuário pode querer ser entregues a partir da válvula. </li></ol></li></ol> Exemplo: Sistema ativado por um minuto (60 segundos). A freqüência foi de 15 Hz (15 pulsos em um segundo). O por pulsos de tempo aberto era de 20 milissegundos (ms). (20ms) (15Hz) (60) = 18000ms. Isto significa que dos 60.000 ms em um minuto, a válvula foi realmente aberto para 18.000 ms. Vamos assumir que o volume de líquido entregue pesava 5 gramas. Então, 5 gramas / 18000 ms = 2.78e gramas -4 / ms. No caso da água, com a sua densidade ser um grama por mililitro (ml), 2.78e gramas -4 / ms = 2.78e -4 mL / ms. Após a calibração, o volume de uma gota é dependente do tempo aberto. Por exemplo, com um tempo aberto de 20ms, e todos os restantes parâmetros da mesma, como no exemplo anterior, (2.78e mL -4 / ms) (20 ms) = mL 5.56e -3 = 5,56 mL. Para encontrar o tempo aberto y necessário para fazer uma gota de microlitro x volume (mL), (X mL) / [(-4 2.78e mL / ms) (1000 mL / mL)] = y ms 8 Aim) um ou mais bocais para a entrada do dispositivo PDMS (figura 3). Ter calibrado o sistema, calcular o volume que sai de cada válvula, com base nas dimensões dispositivo micro. Para passiva de alta velocidade de bombeamento (para obter taxa máxima de fluxo), calcular o volume da gota de entrada necessários para criar uma gota de entrada que possui um ângulo de contato com a superfície de entrada 90deg [2]. Para a criação de pacotes, calcular os tempos de válvula de freqüência e abertas e os horários de válvulas necessárias para ativar duas válvulas em seqüência. Como visto na Figura 3, os dois bicos pode ser apontado na entrada. Isto pode estendido para múltiplos bicos, todos apontando para a entrada do canal. Resultados representativos: Quando devidamente calibrado, com tempos de válvula aberta corretamente calculados e os bicos corretamente focado na entrada, o usuário deve ser capaz de ver passivamente o fluxo bombeado (figura 4). Uma explosão de sh líquidoould sair da válvula e chegar à entrada. Como o líquido atinge a entrada, há um colapso imediato da queda de entrada para o canal, para a saída. Líquido dentro do canal só se move durante o colapso de uma gota de entrada. Movimento fluido completa dentro do canal pára no final do colapso da gota, que prevê parada instantânea fluido e bem definidas as fronteiras fluídico (no caso que o usuário está fluindo líquidos múltiplas). A duração do colapso queda depende do raio de porta de entrada eo volume da gota de entrada [1]. Em nossa configuração experimental e design, o colapso de entrada queda ocorre em questão de poucos milissegundos. <img border="0" src="/files/ftp_upload/1329/figure1tmb.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. PDMS dispositivo micro com uma entrada, à esquerda, e uma tomada, certo. Por favor, <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1329/figure1.jpg">clique aqui</a> para ver uma versão ampliada da figura 1. <img border="0" src="/files/ftp_upload/1329/figure2tmb.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. Sistema de reservatório e instalação da válvula. Por favor, <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1329/figure2.jpg">clique aqui</a> para ver uma versão ampliada da figura 2. <img border="0" src="/files/ftp_upload/1329/figure3tmb.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3. Duas válvulas, ambas voltadas para uma única entrada de um dispositivo micro. Por favor, <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1329/figure3.jpg">clique aqui</a> para ver uma versão ampliada da figura 3. <img border="0" src="/files/ftp_upload/1329/figure4tmb.jpg" alt="Figura 4" /> Figura 4. Horário passo seqüência (33 milissegundos) do colapso queda de entrada de ejeção de fluido seguintes a partir de uma válvula. Por favor, <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1329/figure4.jpg">clique aqui</a> para ver uma versão ampliada da figura 4.

<ol><li>Berthier, E., Beebe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+rate+analysis+of+a+tension+driven+passive+micropump%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Flow rate analysis of a tension driven passive micropump.</a> Lab Chip. 7, 1475-1478 (2007).</li>
<li>Duffy, D. C., McDonald, J. C., Schueller, O. J. A., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Prototyping+of+Microfluidic+Systems+in+Poly%28dimethylsiloxane%29%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Rapid Prototyping of Microfluidic Systems in Poly(dimethylsiloxane).</a> Anal. Chem. 70, 4974-4984 (1998).</li>
<li>Harris, J., Lee, H., Vahidi, B., Tu, C., Cribbs, D., Cotman, C., NL, J. eon <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-plasma+Bonding+of+PDMS+for+Inexpensive+Fabrication+of+Microfluidic+Devices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Non-plasma Bonding of PDMS for Inexpensive Fabrication of Microfluidic Devices.</a> J Vis Exp. (9), (2007).</li>
<li>Walker, G. M., Beebe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+passive+pumping+method+for+microfluidic+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">A passive pumping method for microfluidic devices.</a> Lab Chip. 2 (3), 131-134 (2002).</li>
</ol>

<ol><li> Para passiva de alta velocidade de bombeamento, se a combinação certa de freqüência e volume de pulso por (devido ao tempo correto aberto) é escolhido, o usuário deve ver o que parece ser uma gota estática ou shell na entrada e uma taxa de fluxo muito rápido dentro do canal. Se ocorrer estouro, o tempo de abertura e / ou a frequência são demasiado elevados. </li><li> Para detectar interações momentum / tensão superficial, o usuário deve bombear um pulso em um tempo e observar o ambiente intra-canal, enquanto está ocorrendo de pulso (do...

<ol><li> <a href="http://www.theleeco.com">http://www.theleeco.com</a> . </li><li> <a href="http://www.biosciencetools.com/Catalog/mHolders.htm">http://www.biosciencetools.com/Catalog/mHolders.htm</a> . </li></ol>

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High Speed Droplet-based Delivery System for Passive Pumping in Microfluidic Devices

Um novo sistema foi desenvolvido microfluídicos que usa o fenômeno de bombeamento passivo, juntamente com um sistema controlado de gotas usuário de entrega com base fluida. Passivo de bombeamento é o fenômeno pelo qual a tensão superficial induzida pressão diferenças movimento fluido unidade em canais fechados. O sistema de entrega automática de fluido é composto de um conjunto de válvulas de tensão controlada com micro-bocais ligado a um reservatório de fluido e um sistema de controle. Estas válvulas controlado por tensão oferecem uma maneira volumetricamente precisa para entregar gotículas de fluido para a entrada de um dispositivo micro de uma maneira de alta freqüência. Com base nas dimensões demonstrado no exemplo presente estudo, o sistema é capaz de fluir quatro mililitros por minuto (através de um 2,2 milímetros por canal transversal 260um). Com base nessas dimensões mesmo canal, a troca de fluidos de um ponto dentro do canal pode ser alcançado em menos de oito milissegundos. Observa-se que existe interação entre a dinâmica do sistema (transmitida por uma combinação das gotículas criadas pelo válvulas ea velocidade do fluido no canal), e da tensão superficial do líquido. Onde o momento proporciona velocidade ao fluxo de fluidos (ou vice-versa), equilíbrio da tensão superficial na entrada fornece uma parada súbita a qualquer fluxo. Esta paragem súbita permite ao usuário controlar as características de fluxo do canal e abre a porta para uma variedade de aplicações biológicas, que variam de fornecimento de reagentes para drogas células estudos. Observa-se também que, quando bicos visam a entrada em ângulos rasos, o ímpeto de gotículas pode causar outros fenômenos fluido interessantes, como a mistura de gotículas múltiplas na entrada.

Um novo sistema microfluídicos foi desenvolvido usando o fenômeno do bombeamento passivo e um usuário do sistema de entrega controlada de fluido. Este sistema microfluídicos tem potencial para ser usado em uma ampla variedade de aplicações biológicas dado o seu baixo custo, facilidade de uso, precisão volumétrica, alta velocidade, repetibilidade e automação.

High Speed ​​Delivery System Droplet-based para Passive Bombeamento em dispositivos microfluídicos

Foi desenvolvido um novo sistema microfluídico que utiliza o fenômeno de bombeamento passivo juntamente com uma entrega de fluido baseada em gotículas controlada pelo usuário...

A bombagem passiva requer uma grande gota colocada na saída e uma pequena gota colocada na entrada. Isso causará a diferença de pressão necessária para impulsionar o fluxo. Gotas alternadas de fluidos diferentes farão com que pacotes sejam conduzidos pelo canal e eventualmente sejam coletados na saída.Altas taxas de fluxo podem ser alcançadas ao entregar gotículas de baixo volume em uma frequência suficientemente alta para obter uma camada estável de fluido na entrada. Olá, sou Pedro Reto do laboratório de Justin Williams do Departamento de Engenharia Biomédica da Universidade de Wisconsin em Medicina. E eu sou Brian Mogan, também do laboratório Williams.E eu sou Aaron Burier do Laboratório do Professor S, também do departamento de engenharia biomédica da W Medicine. Hoje vamos mostrar um procedimento para realizar bombeamento passivo em dispositivos microfluídicos. Em nosso laboratório, utilizamos este procedimento para estudar o fluxo dentro de microcanais e para investigar a troca fluidica dentro do canal para aplicações biológicas.Então vamos começar. Primeiro, utilizando a técnica de litografia macia, crie um dispositivo microfluídico usando polimetil suboxona. Em seguida, rec

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Gota plataformas baseadas microfluídicos são candidatos promissores para a experimentação de alto rendimento, uma vez que são capazes de gerar picolitros, auto-compartimentada vasos barata a taxas kHz. Através da integração com rápido, sensível e de alta resolução de fluorescência métodos espectroscópicos, a grande quantidade de informações geradas nesses sistemas podem ser eficientemente extraído, aproveitada e utilizada.

Métodos de detecção de fluorescência para as plataformas de gotículas microfluídicos

Combinando monodispersos geração gota com ordenação de inércia de células e partículas, nós descrevemos um método para encapsular um número desejado de células ou partículas em uma única gota a taxas kHz. Nós demonstramos a eficiência duas vezes superiores às de encapsulamento desordenada para gotas simples e dupla-partícula.

Alta taxa de transferência de célula única e múltipla de células Micro-encapsulamento

Desenvolvemos uma técnica para picoinjecting gotas de microfluidos que não necessitam de eléctrodos metálicos. Como tal, os dispositivos que incorporem a nossa técnica é mais simples de fabricar e de utilizar.

Picoinjection de Microfluidic Drops sem metal Eletrodos

O protocolo para fabricação e operação de dispositivos de desumidificação em campo (Field-DW) é descrito, bem como os estudos preliminares dos efeitos dos campos elétricos no conteúdo das gotículas.

Aproveitando-se de Redução Interação gota-superfície para otimizar o transporte de Bioanalytes em microfluídica Digital

Nós apresentamos um sistema de introdução de amostras de gotículas discreto para espectrometria de massas com plasma (ICPMS). Baseia-se um chip de microfluidos barato e descartável, que gera gotículas altamente monodispersas numa gama de tamanhos de 40-60 mm a frequências de 90 a 7.000 Hz.

Um chip microfluídico para ICPMS Amostra Introdução

Aqui, demonstramos um método de produção simples para microgotículas de água em óleo (A/S) monodispersas e controláveis por tamanho usando um dispositivo microfluídico centrífugo baseado em capilares. Este método requer apenas um pequeno volume de amostra e permite uma produção de alto rendimento. Esperamos que este método seja útil para análises bioquímicas e celulares rápidas.

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Um dispositivo de inversão de fase de fluxo co é demonstrado para gerar gotículas de alta viscosidade monodisperso acima 1 Pas, que é difícil perceber em microfluídica da gota.

Fabricação de gotículas de alta viscosidade usando dispositivo capilar microfluídico com estrutura de co-fluxo de inversão de fase

O presente protocolo descreve uma plataforma microfluidica pneumática que pode ser usada para uma concentração eficiente de micropartículas.

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A fabricação de um dispositivo de bicamada à base de polidimetilsiloxano (PDMS) para a produção de bibliotecas combinatórias em emulsões de água em óleo (plugs) é apresentada aqui. O hardware e o software necessários para automatizar a produção de plugues são detalhados no protocolo, e a produção de uma biblioteca quantitativa de plugues fluorescentes também é demonstrada.

Dispositivo microfluídico bicamada para produção de plugue combinatório

O protocolo descreve uma plataforma microfluídica avançada para medir quantitativamente a dinâmica da secreção de citocinas de células mononucleares individuais do sangue periférico humano. A plataforma mede até três citocinas em paralelo (IL-6, TNFα e IL-1β) para cada célula individual estimulada com lipopolissacarídeo como exemplo.

Abordagem microfluídica para resolver a secreção simultânea e sequencial de citocinas de células polifuncionais individuais 

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