Name: Fator-Revestido crescimento Placement Bead em explantes Encéfalo anterior Dorsal (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-01-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 7 s
Description: Aprenda a preparar e posicionar esferas revestidas com fator de crescimento em explantes de córtex cerebral. Este método permite induzir expressão gênica espacialmente restrita em tecidos neurais em desenvolvimento.

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Os autores não têm nada a declarar.

fator-revestido crescimento placement bead em explantes encéfalo anterior dorsal

Growth Factor-Coated Bead Placement on Dorsal Forebrain Explants

Este vídeo demonstra dois métodos para a preparação e colocação de contas, que foram revestidas com fator de crescimento, em explantes do córtex cerebral em desenvolvimento. Essas esferas podem ser usados ​​para induzir a expressão do gene espacialmente restrita no desenvolvimento do tecido neural, tais como explantes prosencéfalo. Métodos são dadas para a utilização de ambos os Affi-Gel miçangas e contas de heparina acryllic.

Fator-Revestido crescimento Placement Bead em explantes Encéfalo anterior Dorsal

Esses são o primeiro tipo de contas que usarei. São as contas de gel azul-gel. São macias.Então, preciso usar uma pipeta de vidro agrupada na extremidade de uma pipeta bucal para colocar essas esferas sobre os Xs. O segundo tipo de esfera que demonstrarei são esferas de acrílico heparinizado. São um tipo rígido de esfera, e colocarei essas esferas sobre explantes X usando uma agulha de tungstênio. Essas são as tubos capilares de vidro que primeiro derretereis usando o bico de Bunsen.Então eu puxo para criar uma ponta mais fina. Seguro o tubo capilar no centro da chama e o giro enquanto o tubo derrete. Consigo sentir quando ele amolece.Vou retirá-lo da chama e depois puxá-lo. Vou fazer um entalhe ao longo do tubo capilar com esta caneta de ponta de diamante para obter um corte reto e limpo. Em seguida, vou polir as extremidades com chama para limpá-las.Vou passar a capilar através da chama para polir a extremidade e reduzir a abertura, de modo que ela consiga capturar uma esfera em vez de a esfera atravessar a capilar. É importante observar que você não deve segurar o tubo capilar na chama por muito tempo. Na verdade, é uma passagem muito rápida, caso contrário, ele selará.Normalmen

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Biologia

Uma variedade de fatores de crescimento e proteínas interagem para induzir as células a assumir os destinos diferentes de células durante o desenvolvimento. Aqui mostramos o uso de um ovo na preparação para enfrentar as possíveis interações entre diferentes proteínas no desenvolvimento, colocando contas em e2.5 embriões de galinha.

Fator de Crescimento colocando-Revestido Beads em embriões de galinha Early Stage

Demonstramos como dissecar e cultura pinto gânglio statoacoustic E4 e E6 explantes medula espinhal. Explantes são cultivados sob condições sem soro em gel de colágeno 3D por 24 horas. Neuritos resposta é testado com o meio do fator de crescimento suplementado com proteína e revestido contas.

Dissecção e Cultura do Gânglio pintainho Statoacoustic e Explantes da Medula Espinhal em géis de colágeno para Ensaios crescimento de neuritos

Neurais culturas de explante de<em&gt; Xenopus laevis</em

Este vídeo demonstra o modelo de cocultura de um explante de gânglio da raiz dorsal e células de Schwann. Em condições de cocultura, o ácido ascórbico promove a diferenciação das células de Schwann em formas mielinizantes. As células mielinizantes de Schwann envolvem os axônios várias vezes para criar uma bainha de mielina, que é essencial para a função nervosa.

Co-cultura de um explante de gânglio da raiz dorsal com células de Schwann para mielinização de neurônios

Este protocolo descreve um processo melhorado que implica...

Ex utero Eletroporação e Explantes hemisfério inteiro: um método simples Experimental de Estudos do Desenvolvimento Cortical Precoce

Embrionárias neurônios nascem na zona ventricular do tubo neural, mas migrar para atingir metas adequadas. Branchiomotor Facial (FBM) neurônios são um modelo útil para estudar a migração neuronal. Este protocolo descreve o ex vivo cultura wholemount de hindbrains embrião de rato para investigar os mecanismos que regulam a migração FBM.

Rato rombencéfalo<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Cultura para estudar Facial Migração Branchiomotor Neuron

Ao enxertar grânulos embebidos em fatores de crescimento ou inibidores específicos de vias de sinalização em embriões em desenvolvimento, é possível testar diretamente seus efeitos in vivo. Neste protocolo, grânulos são enxertados no broto do membro para determinar os efeitos dessas moléculas na expressão gênica e na transdução de sinal.

Alongamento das Beads em Desenvolvimento de frango Limbs embrião para Identificar caminhos da transdução de sinal que afeta Gene Expression

Nos embriões de Xenopus, as células do teto do blastocele são pluripotentes e podem ser programadas para gerar vários tecidos. Aqui, descrevemos protocolos para usar explantes de telhado de blastocele de anfíbios como um sistema de ensaio para investigar as principais características in vivo e in vitro do desenvolvimento neural inicial.

Stem Cell-like<em&gt; Xenopus</em&gt; Embrionárias explantes Estudar características Neural desenvolvimento precoce<em&gt; In Vitro</em&gt; E<em&gt; In Vivo</em

A transição epitelial para mesenquimal (EMT) permite que os cânceres se tornem invasivos. Para investigar a EMT, é descrito um modelo in vitro baseado em células-tronco neurais (NSC) desprovido de soro e enzimas. Este sistema padronizado permite a avaliação quantitativa e qualitativa da migração celular, expressão gênica e proteica. O modelo é adequado para a descoberta de medicamentos.

Um Modelo de enzimas e Cultura de Células-Tronco Neural Serum-livre para EMT Investigation Adequado para Drug Discovery

Aqui apresentamos um sistema de cultura monocamada mista ex-vivo para o estudo da migração de células glioma humanas (hGC) em tempo real. Este modelo fornece a capacidade de observar interações entre hGCs e axônios mielinated e não-myelinated dentro de uma câmara compartimentada.

Monitoramento em tempo real da migração humana de células glioma em co-culturas de raiz dorsal Ganglion Axon-Oligodendrocyte

Aprenda a preparar e posicionar esferas revestidas com fator de crescimento em explantes de córtex cerebral. Este método permite induzir expressão gênica espacialmente restrita em tecidos neurais em desenvolvimento.

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