Name: Dissecação de discos imaginais de 3 larvas Drosophila Instar (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-17T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 36 s
Description: Aprenda a dissecar discos imaginais de larvas de Drosophila no terceiro instar para estudos de biologia do desenvolvimento. Este protocolo demonstra técnicas de isolamento e fixação de tecidos para visualização microscópica.

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Os autores não têm nada a declarar.

dissecação de discos imaginais de 3 larvas drosophila instar

Dissection of Imaginal Discs from 3rd Instar Drosophila Larvae

Este protocolo demonstra a técnica de dissecação usada para isolar discos imaginais de Drosophila larvas na fase instar 3. Métodos para fixar o tecido depois de dizer e remover a asa, perna, olho e os discos são demonstradas diretamente sobre uma lâmina de microscópio para visualização posterior.

Dissecação de discos imaginais de 3 larvas Drosophila Instar

Hoje vou mostrar como dissecar discos imaginais de larvas de drosófila de terceiro estágio. Discos larvais de terceiro estágio podem ser utilizados para diversos processos de desenvolvimento. Em nosso laboratório, analisamos esses discos para observar o processo de apoptose, mas você pode expressar diversas proteínas neles e estudá-los dessa forma, observando todos os tipos de processos de desenvolvimento que ocorrem nos discos.Para fazer isso, vou utilizar várias ferramentas muito importantes. A primeira é a haste de coleta, com a qual retiraremos as larvas de seus recipientes. Em seguida, e muito importante, estão as pinças de dissecação, que precisam ser extremamente afiadas para que a dissecação prossiga.Então usaremos uma lâmina cirúrgica, lâmina cirúrgica número 11, para remover os discos da cabeça. Em seguida, colocaremos os discos em uma lâmina com um pouco de Vector Shield como meio de montagem. Portanto, a primeira coisa que faremos é coletar algumas larvas de terceiro instar e estrela errante, terceiro instar e estrela.Estou apenas usando meu bastão de dissecção para, de certa forma, desprender as larvas da parede do frasco. Às vezes ajuda se o bastão estiver um pouco úmido; depois, coloque-as em uma gota de PBS. Ok, aqui temos nossa larva de terceiro estádio.Como sou destro, vou virar a cabeça dele em direção à minha direita e vamos usar algumas referências anatômicas para nos orientar sobre onde segurá-lo. Primeiro, a parte principal da traqueia aqui e aqui. E depois há uma pequena seção transversal aqui em cima, próxima à cabeça.Primeiro, vou segurar as larvas suavemente em aproximadamente dois terços do caminho ao longo do corpo a partir da cabeça. Em seguida, com a mão direita, vou segurar alguns milímetros atrás da peça transversal aqui, tentando alcançar cerca de metade da largura das larvas. Esse é um bom ponto de apoio.Dá para ver que estou mais ou menos na metade. Então vou puxar suavemente para frente com a mão direita, veja todos os intestinos saindo. Pronto. A parte principal do corpo pode agora ser descartada.E aqui temos a cabeça, que inclui os discos imaginais ligados às peças bucais. Vou segurá-lo pelas peças bucais para não esmagar nenhum dos discos e movê-lo para um novo ponto de PBS. Agora temos nossa cabeça de larva fixada.Vamos remover todo o tecido em excesso e, ou segurar a larva pelas peças bucais como antes, ou pressioná-la contra a placa de dissecação com a pinça. As peças bucais estão agora à esquerda. Muito bem, aqui temos o intestino, que não queremos, e há uma glândula salivar.Há algum corpo gorduroso ou tecido adiposo. Continue removendo, especialmente a gordura, que pode interferir em certos ensaios e colorações de estruturas que você não deseja. Agora temos a cabeça larval limpa.Agora temos nossas cabeças de larvas, que foram dissecadas separando-se do corpo, fixadas e lavadas, com os tecidos excedentes removidos, e que foram tratadas com o que for necessário, o que pode ser uma coloração com anticorpo no C dois túnel ou outra coloração funcional. Agora as colocamos em uma lâmina e estamos prontos para dissecar os discos propriamente ditos separando-os da cabeça. As peças bucais.Certo, desta vez nossas peças bucais estão à esquerda aqui. Vou pegar minha pinça e pressioná-la levemente contra a lâmina. Na minha mão direita, tenho uma lâmina de bisturi número 11, que é um instrumento um pouco mais fino, adequado para dissecar.Primeiro, vou remover o SNC e os lobos ópticos. Veja que aqui está o SNC, aqui estão os dois lobos ópticos e aqui estão os discos de olho e antena ligados a eles. Então, se eu remover o SNC inserindo minha lâmina entre os lobos ópticos e os discos oculares e puxando lentamente, os discos oculares se esticam um pouco.Ok, então aqui temos o SNC e os lóbulos ópticos. Agora temos os dois discos imaginais dos olhos, que foram destacados do SNC. Agora vou removê-los das peças bucais cortando e puxando suavemente na base.Certo, então há um disco do olho e da antena, e o outro disco do olho e da antena. Certo. E agora podemos ver o disco da asa projetando-se aqui. Vou, novamente, encontrar suavemente o corte basal e puxar.Aqui temos um disco alar e um disco de perna anexado a ele, juntamente com um pouco de traqueia. Ok, então aqui está o seu disco alar com um disco de perna anexado, e obviamente há vários discos de perna. Assim, podemos, de certa forma, procurar ao redor aqui e encontrar mais discos apenas sondando suavemente com a lâmina.São todos os discos que vamos encontrar neste espécime. Há mais alguns discos de perna.

dissection-of-imaginal-discs-from-3rd-instar-drosophila-larvae

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Aqui nós descrevemos um protocolo para analisar a migração de células gliais no olho Drosophila desenvolvimento, utilizando análise microscópica ao vivo emparelhado com GFP tag células gliais.

Imagens ao vivo da migração das células da glia no Disco Drosophila Eye Imaginal

Nós descrevemos um romance vermelho proteína fluorescente repórter (RFP) que se expressa especificamente...

A Novel Reporter RFP para ajudar na visualização do Disco Imaginal Eye em Drosophila</em

Drosophila melanogaster larvas fornecer um modelo de sistema ideal para investigar os mecanismos de transporte axonal dentro larval nervos segmentares. Usando este procedimento, 3 de larvas portadores de mutações diferentes podem ser comparadas às larvas do tipo selvagem.

Visualização de Larval Nervos segmentar em 3 Rd Instar Drosophila Preparações larval

Dissecção e imunohistoquímica de larvas, pupa e adulto<em&gt; Drosophila</em&gt; Retinas

Ao corar discos imaginais de Drosophila, muitas vezes é realizada uma dissecção grosseira onde os discos são expostos, mas permanecem presos ao corpo. Uma vez corados, os discos de interesse são isolados e montados. O protocolo de exemplo demonstra um procedimento para dissecção e montagem do disco imaginal da asa.

drosófila Dissecção de disco imaginal de larvas: um método para observar o desenvolvimento de epitélios

Este protocolo detalha um método simplificado utilizado para conduzir imagem de células vivas, no contexto de um cérebro de larvas intacta. Abordagens imagens de células vivas são de valor inestimável para o estudo de células-tronco neurais divisões assimétricas, bem como outros processos neurogênicas e de desenvolvimento, de forma consistente descobrir mecanismos que anteriormente eram negligenciados.

Imagens ao vivo de<em&gt; Drosophila</em&gt; larval Neuroblastos

As estruturas adultas de Drosophila são derivadas de estruturas semelhantes a sacos chamadas discos imaginais. A análise desses discos fornece informações sobre muitos processos de desenvolvimento, incluindo determinação de tecidos, estabelecimento de limites de compartimentos, proliferação celular, especificação do destino celular e polaridade celular planar. Este protocolo é usado para preparar discos imaginais para microscopia de luz / fluorescente.

Dissecção e Imunocoloração do Imaginário discos de Drosophila melanogaster

O objetivo desta técnica é permitir que os pesquisadores realizem dissecação, imunocoloração e montagem de discos oculares de Drosophila melanogaster de qualquer idade.

Dissecção e montagem de<em&gt; Drosophila</em&gt; pupais Discos Eye

Este protocolo demonstra como gerar tumores clonais fluorescente marcada, geneticamente definidas no Drosophila olho / discos imaginais antenares (DAE). Ele descreve como dissecar o EAD e do cérebro a partir do terceiro larvas e como processá-los para visualizar e quantificar as mudanças de expressão gênica e invasão tumoral.

o<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal Modelo Disc Tumor: visualização e quantificação da expressão gênica e invasão tumoral Usando Mosaicos Genéticos

Descrevemos um protocolo para medir contatos entre células em camadas epiteliais adjacentes em discos imaginários de asas de Drosophila vivos usando uma abordagem baseada em reconstituição GFP.

Um sistema de expressão dupla baseado em complementação GFP para avaliar o contato célula-célula mediado por citonemas em discos imaginais de asas de Drosophila vivas

Este artigo descreve um protocolo eficiente de dissecação imaginária de discos e coloração de anticorpos, econômico com reagentes e facilita o manuseio de discos imaginários em pequenas quantidades.

Dissecação em pequena escala e coloração por anticorpos de discos imaginários antenas oculares e das asas de Drosophila melanogaster

Aprenda a dissecar discos imaginais de larvas de Drosophila no terceiro instar para estudos de biologia do desenvolvimento. Este protocolo demonstra técnicas de isolamento e fixação de tecidos para visualização microscópica.

Dissecação de discos imaginais de 3 larvas Drosophila Instar

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