O Probe microfluídicos: Operação e Uso de Processamento de Superfície localizada

Este procedimento mostra como montar e usar a sonda microfluídica ou MFP. Os componentes microfluídicos do MFP são seringas estanques a gás, tubos capilares de vidro, conectores micro apertados da Upchurch e o cabeçote do MFP. Este vídeo apresentará as etapas críticas de montagem e alinhamento.

Uma vez montado, o MFP pode ser usado com uma grande variedade de substratos e reagentes para padronização e processamento de superfícies. Olá, sou Cecil Perot. Sou pós-doutorando no laboratório de David Yaker no Departamento de Engenharia Biomédica da Universidade McGill em Montreal, Canadá.

Olá, sou Mohammad Kasime. Sou candidato a doutorado no laboratório de David Y no departamento de engenharia biomédica da Universidade McGill. Olá, sou David Yoker.

Sou professor assistente no Departamento de Engenharia Biomédica e gostaria de recebê-lo hoje em nossa demonstração sobre a sonda microfluídica. Hoje mostraremos um procedimento de operação e uso da sonda microfluídica. Usamos esse procedimento em nosso laboratório para processamento e padronização de superfícies.

Então, vamos começar Para iniciar este protocolo. Seringas e agulhas de plástico são usadas para encher seringas de vidro tipo gás com reagentes, garantindo que não haja bolhas de ar. Normalmente, usamos uma seringa de um a 10 microlitros para injeção e uma seringa com volume cinco a 10 vezes maior para aspiração.

Em seguida, usando conexões nano apertadas com baixo volume morto, as seringas são conectadas a tubos capilares. Os capilares são então preenchidos e verificados quanto a bolhas ao microscópio. O chip MFP é pré-preenchido com solução tampão para evitar o aprisionamento de bolhas ao conectar os capilares.

Finalmente, os capilares são conectados à peça de conexão PDMS na cabeça do suporte microfabricada. Com o MFP agora montado, estamos prontos para começar a configurá-lo. O substrato é inserido em um suporte caseiro.

Está afixado no estágio do microscópio. A lacuna entre o MFP e o substrato é crítica para os processos de padronização de superfície. Usando um suporte de três pontos formado por parafusos micrométricos, o alinhamento horizontal é ajustado com precisão micrométrica.

Isso é necessário porque o substrato é processado sendo escaneado abaixo do MFP. Para começar a configurar o MFP, a cabeça da sonda é fixada no suporte da sonda e montada na estação da sonda em cima de um microscópio invertido. As seringas são então colocadas em bombas de seringa de alta precisão.

Em seguida, usando um par de goniômetros, o alinhamento do meza do MFP com o substrato é ajustado observando os anéis de Newton, também conhecidos como franjas de interferência. Eles aparecem quando o MFP é colocado em contato com o substrato, o ponto de contato e a frequência dos anéis servem como indicação da inclinação. Quando o MFP está alinhado com a superfície, um único anel de interferência se estende por toda a superfície.

Essa medida também serve para calibrar a separação entre o MFP e o substrato. Com o MFP configurado, agora estamos prontos para passar para a operação do MFP. Durante a operação do MFP, a distribuição é controlada pelo software de visualização de laboratório.

A operação do dispositivo é visualizada a olho nu e com uma câmera CCD. Antes de iniciar a aspiração adequada, injete um pouco de líquido para garantir que a seringa de aspiração esteja orientada corretamente e que não haja bolhas. O MFP é então imerso no buffer.

Agora podemos começar a injeção de líquido enquanto monitoramos o confinamento das esferas voadas. A taxa de aspiração de injeção varia de um a três a um a 10, dependendo da difusividade do reagente com um tampão circundante e do padrão de fluxo geométrico desejado. Finalmente, a sonda agora pode ser usada para uma variedade de aplicações.

Os padrões de superfície mostrados aqui foram alcançados pelo MFP com biotina marcada com fluoresceína na divisão estreptocócica, lâminas de vidro de hidrogel revestidas com ENC. A taxa de fluxo de injeção foi de um nanolitro por segundo e a taxa de fluxo de aspiração foi de 10 nanolitros por segundo usando seringas de 10 microlitros e 50 microlitros, respectivamente. A distância entre a superfície e a sonda era de cinco micrômetros.

O MFP também pode ser usado para coloração local e processamento de células e tecidos. O confinamento de fluxo proíbe a difusão do reagente e permite a coloração química precisa das células. Como mostrado aqui, uma monocamada de células de fibroblastos foi corada com 100 microgramas por mililitro de dai.

Então, mostramos como operar a sonda microfluídica. Ao fazer este procedimento, você deve evitar bolhas no sistema e certificar-se de que a superfície do suporte microfluídico esteja paralela ao substrato. Então é isso.

Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.