Name: LAD Ligadura: Um Modelo murino de Infarto do Miocárdio (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-14T23:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 23 s
Description: Aprenda a realizar a ligadura da artéria coronária descendente anterior em camundongos para criar um modelo confiável de infarto do miocárdio. Esta técnica cirúrgica permite estudar a isquemia cardíaca e testar terapias regenerativas.

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Os autores agradecem Christiane Pahrmann por sua assistência técnica e histologia do espectáculo.

<html> Balb / C camundongos com peso mínimo de 20g em uma idade de 8 a 12 semanas são comprados de Charles River (Sandhofer Weg 7, D-97633 Sulzfeld). Os ratos são alojados em condições convencionais, pellets rato alimentado padrão e água ad libitum. Anestesiar mouse com isoflurano (2%) utilizando uma câmara de indução. <ol><li> Raspar a área do pescoço e do lado esquerdo da caixa torácica e desinfectar com álcool 80%. </li><li> Posicione o mouse sobre as suas costas e colocar uma máscara sobre seu nariz e boca para manter a anestesia. </li><li> Verificar os reflexos beliscar a cauda e patas traseiras para ter a certeza que o rato é suficiente anestesiado. </li><li> Sob visão microscópica realizar uma incisão mediana cervical separando o músculo, pele e tecido que cobre a traquéia. </li><li> Quando a traquéia é exposta cortar um pequeno furo no tecido entre dois anéis de cartucho abaixo da glote para inserir o tubo endotraqueal (Figura 1). Inserir o tubo endotraqueal segurando a parte cranial da traquéia usando micro forecepts cirúrgico. Verifique o movimento do tórax, para ter certeza de que ambos os pulmões são bem ventiladas. </li><li> A taxa de respiração (RR) deve ser aproximadamente 110 por minuto, com pressão inspiratória de 17 a 18 centímetros H 2 O. Vire o mouse com cuidado, deitado sobre seu lado direito, de frente para o lado esquerdo. Realizar uma toracotomia leftsided entre as 3 ª e 4 ª costela, e dissecar o tecido muscular e com cuidado, usando um Cauter para prevenir hemorragias. </li><li> Abra o tórax com cuidado, uma vez que o tórax é aberto, encontrar o coração, sem tocar o pulmão com qualquer objeto cortante. Agora, remova a parte do saco pericárdico, que está cobrindo o coração. </li><li> A LAD está localizado entre a artéria pulmonar ea aurícula esquerda. Use uma sutura Prolene 8-0 (Ethicon, Norderstedt, Alemanha) para ligadura do LAD proximal com uma sutura simples (Figura 2). </li><li> Colocar um tubo no peito (cateter, 28G venal), entre a 4 ª ea 5 ª costela. </li><li> Feche a incisão torácica em camadas, usando 6-0 Prolene sutura (Ethicon, Norderstedt, Alemanha) para se adaptar as costelas e prolene 4-0 (Ethicon, Norderstedt, Alemanha) para fechar a pele. </li><li> Drenagem do tórax com a ajuda de uma seringa de 2ml com cuidado (Figura 3). Posicione o mouse sobre as suas costas. Agora pegue o tubo endotraqueal e adaptar os anéis da traquéia cartucho com um ponto único usando suturas 7-0 Prolene (Ethicon, Norderstedt, Alemanha). </li><li> Coloque a máscara sobre o mouse e fechar a pele usando suturas Prolene 4-0 (Ethicon, Norderstedt, Alemanha). </li></ol> Validação Existem diferentes possibilidades para confirmar o sucesso da LAD ligadura. O teste de troponina pode ser realizada 6 a 18 horas após a cirurgia, usando apenas 150 l de sangue sem a necessidade de eutanásia do animal. O sangue é aplicado a um kit personalizado troponina teste (TROP T Sensitive, Roche, Mannheim) (Figura 4). Troponina é uma proteína reguladora nos filamentos de actina da célula muscular, existem diferentes isotipos nos três tipos de músculos. A cTnI e cTnT isotipos são encontrados no coração e são liberados em lesão tecidual. O teste padronizado para a troponina T (cTnT) é baseada em duas coração anticorpos monoclonais específicos, um armadilhas da troponina na amostra de sangue, o segundo é um marcador. A área de infarto podem ser identificados macroscopicamente após 3 dias (Figura 5). TTC (2,3,5-trifeniltetrazólio cloreto) coloração viabilidade tecidual medidas utilizadas para avaliar o tamanho do infarto. Corante azul de Evans (1,5%, 1,0 mL) em tampão fosfato (PBS) é injetado na cavidade do ventrículo esquerdo para medir a área do miocárdio isquêmico. O rato é sacrificados eo coração é colhida e seccionados em fatias. As fatias de tecido são incubados em 1% de solução PBS TTC, pH 7,4 a 37 ° C por 20min. Tecidos são fixados em 10% PBS-formol tamponado durante a noite a 2-8 ° C. TTC é administrado ex vivo para corante azul de Evans-negativos áreas (Figura 6). Para histologia o mouse tem que ser sacrificados eo coração tem de ser incorporado para processamento posterior. Depois de realizar cortes em parafina, as lâminas são coradas com H &amp; E (hematoxilina e eosina) ou tricrômico de visualizar tecido fibrótico (Figura 7). <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1: tubo traqueal. 1A: Exposed traquéia, após incisão cervical ventral. 1B: Traquéia é aberto dois anéis de cartilagem caudal à laringe. 1C: tubo traqueal é inserido na traquéia. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2: O coração é exposto através de uma toracotomia esquerda lados, o LAD é ligada. t &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3: Depois que o tórax é fechado, um dreno pleura é executada. O mouse ainda está sob anestesia. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig4.jpg" alt="Figura 4" /> Figura 4: Duas linhas aparecem após alguns minutos, quando o teste de troponina é positivo. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig5.jpg" alt="Figura 5" /> Figura 5: Mostra o coração explantado. 5A: Aspecto macroscópico do coração com a área isquêmica com uma cor desbotada esbranquiçada. 5B: seção transversal do coração infartado, a área isquêmica mostra no canto superior direito.

<ol><li>Atkins, B. Z., Hueman, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+cardiomyoplasty+improves+diastolic+properties+of+injured+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Cellular cardiomyoplasty improves diastolic properties of injured Heart.</a> J Surg Res. 85 (2), 234-242 (1999).</li>
<li>Jaquet, K., KT, K. rause <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+myocardial+scar+size+after+implantation+of+mesenchymal+stem+cells+in+rats%3A+what+is+the+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Reduction of myocardial scar size after implantation of mesenchymal stem cells in rats: what is the mechanism.</a> Stem Cells Dev. 14 (3), 299-309 (2005).</li>
<li>Joung, B., Kim, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+mononuclear+stem+cells+transplanted+in+rat+infarct+myocardium+improved+the+electrical+conduction+without+evidence+of+proarrhythmic+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Yonsei+Med+J%22%5BJournal%5D)">Bone marrow mononuclear stem cells transplanted in rat infarct myocardium improved the electrical conduction without evidence of proarrhythmic effects.</a> Yonsei Med J. 48 (5), 754-764 (2007).</li>
</ol>

Financiamento O presente estudo teve o apoio do Hospital Universitário Hamburg (MK, Mulher Habilitação Grant), DFG (SS, SCHR992/3-1), ISHLT (TD, Research Award 2009). Afirmação Todos os animais receberam cuidados humanos, em conformidade com os Princípios de Laboratório Animal Care, experimentos em animais foram realizados de acordo com as diretrizes e regulamentos estabelecidos pela Sociedade Nacional de Pesquisa Médica e do Manual sobre Cuidados e Uso de Animais de Laboratório, publicado pela National Institutes of Health (Institutos Nacionais de Saúde publicação 85-23, revisado em 1985). Todos os animais foram obtidos a partir de Charles River Laboratories (Sulzfeld, Alemanha) e foram mantidos no biotério atendimento do Hospital Universitário Hamburg Eppendorf. Os animais receberam ração padrão e água ad libitum.

Em resumo, este vídeo visualiza o modelo LAD ligadura passo-a-passo e identifica LAD-ligadura em ratos com a mesma facilidade viável procedimentos cirúrgicos.

lad ligadura: um modelo murino de infarto do miocárdio

LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction

Modelos de pesquisa de infarto e isquemia miocárdica são essenciais para investigar os processos agudos e crônicos Pathobiological e fisiopatológicas da isquemia miocárdica e para desenvolver e otimizar o tratamento futuro. Dois métodos diferentes de criar isquemia do miocárdio são realizadas em roedores de laboratório. O primeiro método é criar crio infarto, uma técnica rápida, mas impreciso, onde um crio-caneta é aplicado sobre a superfície do coração (1-3). Usando este método, o cientista não pode garantir que o crio cicatriz leva a isquemia, também uma lesão do miocárdio é vasta criado que mostra efeitos colaterais fisiopatológicos que não estão relacionados ao infarto do miocárdio. O segundo método é a ligadura permanente da artéria descendente anterior esquerda (DAE). Aqui, o LAD é ligada com um ponto único, formando uma isquemia, que pode ser visto quase que imediatamente. Fechando a LAD, há ainda fluxo de sangue é permitida naquela área, enquanto o tecido circundante do miocárdio não é quase afetados. Este procedimento cirúrgico imita os aspectos Pathobiological e fisiopatológicas que ocorrem na isquemia-infarto do miocárdio relacionados. O método introduzido neste vídeo demonstra o procedimento cirúrgico de um modelo de infarto do rato por ligadura do LAD. Este modelo é conveniente para estudos Pathobiological e fisiopatológicos, bem como imunobiológicos em infarto cardíaco. A técnica mostrada proporciona alta precisão e se correlaciona bem com cortes histológicos.

Este vídeo demonstra como usar um modelo rápido e confiável para o estudo de processos Pathobiological e fisiopatológicas da isquemia miocárdica.

LAD Ligadura: Um Modelo murino de Infarto do Miocárdio

Modelos de pesquisa de infarto e isquemia miocárdica são essenciais para investigar os processos patobiológicos e fisiopatológicos agudos e crônicos ...

Uma incisão cervical mediana é realizada para expor a traqueia, e um pequeno orifício é feito na traqueia para inserção de um tubo endotraqueal. O camundongo é posicionado sobre o seu lado direito e uma toracotomia esquerda é realizada entre a terceira e a quarta costela. O coração é exposto e a artéria descendente anterior esquerda (LAD) é ligada com um único ponto de sutura.Após a colocação de um dreno torácico e o fechamento da incisão, o tórax é drenado aspirando cuidadosamente a seringa. Por fim, o camundongo é virado sobre o dorso.O tubo traqueal é removido e a traqueia e a incisão cervical são fechadas. Olá, sou Sonya Refa. Sou professora de Imunologia e Cirurgia Cardíaca no Departamento de Cirurgia Cardiovascular do Centro Cardíaco Universitário de Hamburgo.O meu laboratório concentra-se na imunobiologia de células-tronco e na imunologia de transplantes. Hoje vamos apresentar a você o modelo de ligadura LID. Utilizamos este modelo em nosso laboratório para estudar o efeito da terapia com células-tronco na regeneração do coração após infarto do miocárdio.E eu sou KA Wan, estudante da Universidade de Stanford e bolsista de verão no Laboratório TSI de Drer. E eu sou Mandy Cooc

lad-ligation-a-murine-model-of-myocardial-infarction

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Numerosas manipulações genéticas e / ou injeções intramiocárdica de genes, proteínas, células e / ou biomateriais são sobrepostos sobre a dimensão do tempo em estudos de lesão de isquemia / reperfusão aguda e crônica em camundongos remodelação. Este vídeo ilustra os procedimentos de microcirurgia para isquemia / reperfusão, ligadura da artéria coronária permanente, e estudos de injeção intramiocárdica.

Ligadura da artéria coronária e injeção intramiocárdica em um modelo murino de infarto

O procedimento cirúrgico utilizado para induzir o enfarte do miocárdio experimental em ratos começa com toracotomia esquerda entre a terceira e quarta das nervuras, a fim de visualizar a superfície anterior do coração e do pulmão esquerdo. A artéria coronária esquerda é ligada, a caixa é fechada e o rato é deixado a recuperar-se espontaneamente.

Técnica modificada para ligação da artéria coronária em ratos

Neste vídeo, descrevemos um procedimento cirúrgico para gerar um modelo de infarto do miocárdio em camundongos ligando permanentemente a artéria coronária descendente anterior.

Gerando Modelo Murino de Infarto do Miocárdio: Um Procedimento Cirúrgico para Ligadura Permanente da Artéria Coronária Descendente Anterior em Modelo de Camundongo

Nós introduzimos um método cirúrgico para induzir experimental de isquemia / reperfusão (I / R) prejuízo para simular o infarto do miocárdio (MI) em modelos de mouse que permite uma maior clareza no posicionamento da ligadura na artéria descendente anterior esquerda (LAD) para aumentar a reprodutibilidade de experimentos MI em camundongos.

Um modelo murino de isquemia-reperfusão, através da ligadura da artéria Descendente Anterior Esquerda

A insuficiência cardíaca é a principal causa de hospitalização e uma das principais causas de mortalidade. Um modelo de ligadura permanente da artéria coronária descendente anterior em camundongos é aplicado para investigar o remodelamento ventricular e a disfunção cardíaca pós-infarto do miocárdio. A técnica de medidas hemodinâmicas invasivas em camundongos é apresentada.

A ligação permanente da artéria coronária descendente anterior esquerda em Ratos: Um Modelo de Remodelação pós-infarto do miocárdio e insuficiência cardíaca

Fornecemos um método confiável para ligadura da artéria descendente anterior (DA) em um modelo de camundongo. Este método é comparativamente menos invasivo do que outros métodos, envolvendo intubação endotraqueal, abordagem de toracotomia do lado esquerdo e toracocentese. Este método pode ser usado como modelo para infarto agudo do miocárdio (IM) agudo e crônico.

Murino Descendente Anterior Esquerda (LAD) ligação da artéria coronária: um modelo melhorado e simplificado para Infarto do Miocárdio

Nisto nós descrevemos um procedimento cirúrgico que mostra como conseguir a ligadura permanente da artéria coronária descendente esquerdo-anterior nos ratos. Este modelo é de grande relevância para investigar a fisiopatologia do infarto do miocárdio e os processos biológicos concomitantes.

Modelo de infarto do miocárdio murino usando ligadura permanente da artéria coronária descendente anterior esquerda

Descrevemos um método simples e reprodutível que pode induzir infarto do miocárdio ou lesão de isquemia-reperfusão miocárdica em camundongos por ligadura precisa da artéria coronária descendente anterior esquerda através de micromanipulação.

Indução de Infarto do Miocárdio e Lesão de Isquemia-Reperfusão Miocárdica em Camundongos

Apresenta-se aqui um procedimento cirúrgico para ligadura permanente da artéria coronária esquerda em camundongos. Este modelo pode ser utilizado para investigar a fisiopatologia e a resposta inflamatória associada após o infarto do miocárdio.

Laqueadura da Artéria Coronária Esquerda: Um Modelo Murino Cirúrgico de Infarto do Miocárdio

Isolamento Islet murino de pâncreas

Aprenda a realizar a ligadura da artéria coronária descendente anterior em camundongos para criar um modelo confiável de infarto do miocárdio. Esta técnica cirúrgica permite estudar a isquemia cardíaca e testar terapias regenerativas.

LAD Ligadura: Um Modelo murino de Infarto do Miocárdio

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