Name: Cultura de rato precursores das células-tronco neurais (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 27 min 44 s
Description: Aprenda a isolar neuroprecursores do córtex embrionário de camundongos para estudos de neurociência e biologia do desenvolvimento. Este método demonstra dissecação, dissociação tecidual e cultura celular confiável.

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<ol><li> Precursores do mouse neural (NPCs) foram isoladas do córtex E12.5 embrião. </li><li> Camadas da pele e mesenquimais foram retirados dissecados vesículas telencefálico. </li><li> Vesículas foram incubadas em tripsina 0,05% com EDTA 0,02% e BSA 0,2% em HBSS durante 20 minutos a 37 ° C. </li><li> Tripsinização foi parado por um volume igual de 1 mg / ml inibidor de tripsina de soja (Sigma # T6522) em HBSS. </li><li> Digere o tecido foram dissociadas utilizando várias rodadas de trituração com pipetas Pasteur-fogo polido. </li><li> Células foram lavadas uma vez com BSA 0,2% em HBSS e banhado em 50.000 células / ml em laminina revestido lamínulas em meios com 20 ng / EGF ml, 10 ng / ml FGF2 (R &amp; D Systems ou Peprotech), e 2 ug / heparina ml ( Sigma). </li></ol>

<ol><li>Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+and+indirect+roles+of+CNS+dorsal+midline+cells+in+choroid+plexus+epithelial+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation.</a> Development. 132 (15), 3549-3559 (2005).</li>
<li>Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+human+neural+precursor+cells+by+laminin+and+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins.</a> J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).</li>
</ol>

Grandes avanços em nossa compreensão do CNS desenvolvimento e biologia das células estaminais tem sido possível graças a nossa capacidade de colheita, isolar e cultivar células-tronco embrionárias neural. Este vídeo demonstra a dissecação de E12.5 córtex cerebral do rato e da desagregação e posterior cultivo de células-tronco embrionárias neural. Muitos outros outros métodos semelhantes têm sido empregada com sucesso por outros pesquisadores.

<table><tbody><tr><td>Tesoura de íris reta</td><td>Ferramenta</td><td>Fine Science Tools</td><td>14060-11</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura média</td><td>Ferramenta</td><td>Fine Science Tools</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>Microtesoura</td><td>Ferramenta</td><td>Fine Science Tools</td><td>15002-08</td><td></td></tr><tr><td>Pinça curvada</td><td>Ferramenta</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td></td></tr></tbody></table>

cultura de rato precursores das células-tronco neurais

Culture of Mouse Neural Stem Cell Precursors

Culturas primárias de células-tronco neurais são úteis para estudar os mecanismos subjacentes ao desenvolvimento do sistema nervoso central. Pesquisas com células-tronco vai aumentar a nossa compreensão do sistema nervoso e pode permitir-nos desenvolver tratamentos para doenças atualmente incuráveis ​​cérebro e lesões. Além disso, as células-tronco devem ser usados ​​para pesquisa com células-tronco que visam o estudo detalhado dos mecanismos de diferenciação neural e transdiferenciação e os sinais genéticos e ambientais que a especialização da direta das células em tipos de células particular. Este vídeo demonstra uma técnica utilizada para desagregar as células embrionárias a partir do dia cérebro anterior dorsal 12,5 mouse. O procedimento inclui a colheita dissecção E12.5 embriões de camundongos a partir do útero, eliminando a &quot;pele&quot; com finas pinças de dissecação e, finalmente, isolando partes do córtex cerebral. Após a dissecção, o tecido é digerido e mecanicamente dissociados. As células são então ressuspenso dissociada cultivadas em &quot;células tronco&quot; de mídia que favorece o crescimento de células-tronco neurais.

Este vídeo descreve o método utilizado para o isolamento de neuroprecursors desenvolvimento do córtex de ratos embrionárias. O procedimento para a remoção de embriões do útero, dissecando o tecido cortical, e digerindo o córtex cerebral isolado é mostrado.

Cultura de rato precursores das células-tronco neurais

Culturas primárias de células-tronco neurais são úteis para estudar os mecanismos subjacentes ao desenvolvimento do sistema nervoso central. A pesquisa com células-tronco aumentará...

Então, esta é a primeira etapa no isolamento, dissociação e cultivo de células precursoras neurais. Primeiro, vou revestir uma placa de 24 poços. Ela não é tratada para cultura de tecidos.Vou revestir com laminina para que as células aderem. Primeiro, vou revestir com uma mistura de água e poli-L-lisina. Vou adicionar cerca de 450 microlitros por poço.Então, vou apenas, já recobri metade da placa, estas duas linhas aqui, com a solução de poli-D-lisina. E vou incubar por cinco minutos à temperatura ambiente, apenas nesta câmara de fluxo laminar aqui. Portanto, já está incubando há cinco minutos.Vou apenas remover a solução de PDL com uma bomba de vácuo aqui. Ação da bomba de vácuo. Agora vou enxaguar as cavidades com água novamente, cerca de 450 microlitros.Realmente sem tempo de incubação para a lavagem com água. Vou apenas prosseguir e aspirar a água. Agora vou adicionar a solução de laminação.O laminado foi dissolvido no meio EM a dois microgramas por mililitro. Então, vou adicionar 450 microlitros da solução de laminado a cada um; bem, no momento estou revestindo plástico. Você também poderia ter revestido lamínulas nestas placas.Vou incubar as células a 37 graus em uma incubado

culture-of-mouse-neural-stem-cell-precursors

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Aqui nós mostramos o nosso método para isolar do mouse epidérmicas células da crista neural haste (EPI-NCSC). Técnica envolve a micro-dissecando folículos bigode, isolando o bojo e placeing-lo em cultura de tecidos. EPI-NCSC começam a emigrar a partir de explantes saliência para o substrato dentro de 3-4 dias.

Rato Epidérmico Neural Stem Cell Crest (EPI-NCSC) Culturas

Este protocolo de vídeo demonstra a aplicação do ensaio neurosphere para o isolamento e expansão de células-tronco neurais do eminências ganglionares do dia 14 de embriões de rato-cérebro.

Estabelecer embrionárias de rato Cultura de Células-tronco neurais utilizando o ensaio Neurosphere

Isolamento de crista neural embrionário a partir do tubo neural facilita o uso...

Isolamento e cultivo de células da crista neural do tubo neural embrionário murino

Este vídeo demonstra um protocolo detalhado para isolar as paredes laterais do ventrículo do cérebro de camundongo adulto e realizar a dissociação enzimática do tecido para obter células únicas. Essas células são então submetidas a condições específicas de cultura que aumentam seletivamente a proliferação de células-tronco neurais e promovem sua diferenciação em co-culturas de oligodendrócitos e astrócitos.

Obtenção de uma cultura mista de oligodendrócitos e astrócitos a partir de células-tronco neurais de camundongos adultos

Este vídeo demonstra um método para a geração in vitro de células progenitoras neurais (NPCs) a partir de células-tronco embrionárias de camundongos (mESCs). As mESCs são cultivadas em suspensão para formar corpos embrióides (EBs), que são então guiados para se diferenciar em NPCs por meio de tratamento com ácido retinóico em uma cultura aderente.

Uma técnica para gerar células progenitoras neurais a partir de células-tronco embrionárias de camundongos

Aqui, descrevemos um protocolo detalhado para a produção simultânea de culturas de células precursoras neurais, quer como monocamadas aderentes ou neuroesferas, a partir da zona subventricular e giro dentado de ratinhos adultos individuais.

Um rato, duas culturas: isolamento e cultivo de células-tronco neurais Adulto de as duas zonas neurogênica Individual Ratos

Este protocolo descreve em detalhes o método para gerar progenitores neurais a partir de células-tronco embrionárias usando um método de monocamada sem soro. Esses progenitores podem ser usados para derivar tipos de células neurais maduras ou para estudar o processo de especificação neural e são passíveis de escalonamento de formato multipoço para triagem de compostos.

Diferenciação Neural of Mouse Células-Tronco Embrionárias em soro livre de cultura em monocamada

O estabelecimento de sistemas de cultura para a expansão de células-tronco neurais adultas (aNSCs) permite o exame e a aplicação de aNSCs para terapia. A zona subcalosa (SCZ) foi recentemente reconhecida como uma nova região formadora de neuroblastos em camundongos adultos. Aqui, são descritos métodos para o isolamento, expansão e diferenciação de SCZ-aNSCs.

Isolamento e Cultura de células estaminais adultas neurais do Subcallosal Zona Rato

Aqui, apresentamos uma nova técnica microcirúrgica para o isolamento de células-tronco neurais da Eminência ganglionar embrião de rato E13 .

Isolamento e cultura de células-tronco neurais embrionárias de rato

Descrevemos o procedimento para a diferenciação in vitro de células-tronco embrionárias do rato em células neuronais usando o método de queda de suspensão. Além disso, realizamos uma análise fenotípica abrangente através do RT-qPCR, imunofluorescência, RNA-seq e citometria de fluxo.

Diferenciação e caracterização de progenitores neurais e neurônios de células-tronco embrionárias do rato

Aprenda a isolar neuroprecursores do córtex embrionário de camundongos para estudos de neurociência e biologia do desenvolvimento. Este método demonstra dissecação, dissociação tecidual e cultura celular confiável.

Cultura de rato precursores das células-tronco neurais

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