Name: Dissecção do giro denteado do hipocampo de rato adulto (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-11-17T20:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: Aprenda a dissecar o giro denteado do hipocampo de camundongos adultos usando estereomicroscópio. Esta técnica permite obter amostras intactas para análises transcriptômicas e proteômicas em neurociência.

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Agradecemos ao Dr. Yoko Nabeshima da Universidade de Kyoto para a sua instrução sobre a técnica de dissecação e Aki Ms. Miyakawa em Fujita Saúde da Universidade, pelo seu apoio ao filme. Este trabalho foi financiado pelo Programa de Promoção de Estudos Fundamentais em Ciências da Saúde do Instituto Nacional de Inovação Biomédica, um Grant-in-Aid para a Investigação Científica em Áreas Prioritárias-Integrativa Brain Research (Shien) - de MEXT no Japão, e por um Grant-in-Aid da CREST da Ciência do Japão e Agência de Tecnologia.

Dissecção do giro denteado do hipocampo <ol><li> Em um rato anestesiado profundamente, cuidadosamente dissecar o cérebro fora do crânio e colocá-lo em gelada tampão fosfato (PBS). </li><li> Numa placa de Petri contendo PBS gelado, cortar o cérebro ao longo da fissura longitudinal do cérebro usando um bisturi, e cortou as regiões posterior à lambda (mesencéfalo, rombencéfalo e cerebelo). </li><li> Coloque o lado hemisfério cerebral medial para cima e, usando uma pinça, retire cuidadosamente o diencéfalo (tálamo e hipotálamo) sob um microscópio de dissecação. Isto irá expor o lado medial do hipocampo, permitindo a visualização do giro denteado. O giro denteado é distinguível de chifre de Amon pelas lacunas entre elas. Lesão do hipocampo ou área circundante tornará mais difícil isolar o giro denteado. </li><li> Inserir uma afiada ponta da agulha (por exemplo, calibre 27 com agulha) em cada lado do giro denteado (limites do giro denteado e chifre de Amon; Figura 1) e deslize as agulhas superficialmente ao longo do eixo septo-temporal do hipocampo para isolar o giro denteado. </li><li> Pegue o giro denteado isolados usando uma agulha ou pinça e colocá-lo em um tubo de amostra. A assim obtida amostra de tecido giro denteado pode ser usado imediatamente para qualquer ensaio ou armazenado em um congelador para uso posterior. </li><li> Isolar o giro denteado do outro hemisfério cerebral usando o mesmo método. </li></ol> Quantitativas PCR em tempo real O giro dentado foi isolado usando o método acima mencionado eo hipocampo restante foi dissecados como amostra o Amon chifre de camundongos selvagens. PCR em tempo real da beta-actina, TDO2, Dsp, Mrg1b e Tyro3 foram realizadas com o giro denteado e amostras do Amon chifre como descrito anteriormente 1. Primers 5&#39;-CTGGCGAGATCACGATGACG e 5&#39;-AAGCTACGCTGTTGTCTAACC foram usados ​​para Mrg1b e GCCTCCAAATTGCCCGTCA e 5&#39;-CCAGCACTGGTACATGAGATCA para Tyro3. Análise de microarray Experimentos de microarray foram realizados com homens do tipo selvagem ratos e camundongos heterozigotos para o alfa-isoforma de cálcio / calmodulina-dependente da proteína quinase II (alfa-CaMKII + / - ratos), como descrito anteriormente 1. Resumidamente, RNA isolado do hipocampo todo ou giro dentado de camundongos do tipo selvagem e mutante foi hibridizado com um rato Genoma Matriz 430 2.0 (Affymetrix, Santa Clara, CA), e cada GeneChip foi digitalizado por um GeneChip Affymetrix Scanner 3000 (GCS3000) . A análise foi realizada com GeneChip Microarray Analysis Suite versão 5.0.

<ol><li>Yamasaki, N., Maekawa, M., Kobayashi, K., Kajii, Y., Maeda, J., Soma, M., Takao, K., Tanda, K., Ohira, K., Toyama, K., Kanzaki, K., Fukunaga, K., Sudo, Y., Ichinose, H., Ikeda, M., Iwata, N., Ozaki, N., Suzuki, H., Higuchi, M., Suhara, T., Yuasa, S., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-CaMKII+deficiency+causes+immature+dentate+gyrus%2C+a+novel+candidate+endophenotype+of+psychiatric+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Brain%22%5BJournal%5D)">Alpha-CaMKII deficiency causes immature dentate gyrus, a novel candidate endophenotype of psychiatric disorders.</a> Mol. Brain. 1, 6-6 (2008).</li>
<li>Insausti, A. M., Megias, M., Crespo, D., Cruz-Orive, L. M., Dierssen, M., Vallina, I. F., Insausti, R., Florez, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+volume+and+neuronal+number+in+Ts65Dn+mice%3A+a+murine+model+of+Down+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Hippocampal volume and neuronal number in Ts65Dn mice: a murine model of Down syndrome.</a> Neurosci. Lett. 253, 175-175 (1998).</li>
<li>Redwine, J. M., Kosofsky, B., Jacobs, R. E., Games, D., Reilly, J. F., Morrison, J. H., Young, W. G., Bloom, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dentate+gyrus+volume+is+reduced+before+onset+of+plaque+formation+in+PDAPP+mice%3A+a+magnetic+resonance+microscopy+and+stereologic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Dentate gyrus volume is reduced before onset of plaque formation in PDAPP mice: a magnetic resonance microscopy and stereologic analysis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 1381-1381 (2003).</li>
<li>Lein, E. S., Zhao, X., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+a+molecular+atlas+of+the+hippocampus+using+DNA+microarrays+and+high-throughput+in+situ+hybridization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Defining a molecular atlas of the hippocampus using DNA microarrays and high-throughput in situ hybridization.</a> J. Neurosci. 24, 3879-3879 (2004).</li>
<li>Matsuo, N., Yamasaki, N., Ohira, K., Takao, K., Toyama, K., Eguchi, M., Yamaguchi, S., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+activity+changes+underlying+the+working+memory+deficit+in+alpha-CaMKII+heterozygous+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neural activity changes underlying the working memory deficit in alpha-CaMKII heterozygous knockout mice.</a> Front. Behav. Neurosci. 3, 20-20 (2009).</li>
<li>Franklin, K. B. J., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFranklin%2C+KBJ+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , Academic Press Inc.. San Diego. (1997).</li>
</ol>

Experimentos com animais foram realizados de acordo com o Instituto Nacional do Guia de Saúde para Cuidado e Uso de Animais de Laboratório, e aprovado pelo comitê de cuidados com animais e uso em Fujita Saúde University.

O giro denteado ocupa aproximadamente 25% a 30% do volume da formação do hipocampo 2,3. Ela tem uma composição única de células e desempenha um papel crucial em várias funções cerebrais. Portanto, as técnicas para isolar o giro denteado são úteis para analisar os eventos que ocorrem especificamente na região. Aqui, nós demonstramos um procedimento de forma eficiente dissecar o giro denteado do hipocampo de camundongos adultos e confirmou a precisão da técnica. Primeiro, estudo histológico revelou que o giro denteado foi separado sem contaminação por outras regiões (Figura 1), indicando que uma amostra giro denteado puro pode ser preparado. Segundo, que confirmou que o tecido é dissecado giro denteado através da realização de PCR em tempo real de giro denteado genes específicos, TDO2 e DSP, e genes de Amon chifre enriquecido, Mrg1b Tyro3 e 4 (Figura 2). As expressões mRNA de TDO2 (p = 0,000023; n é = 4 e 4, respectivamente) e DSP (p = 0,0000030; n é = 4 e 4, respectivamente) nas amostras de giro dentado foram detectados em níveis obviamente maior, enquanto Mrg1b (p = 0.000080, de n = 4 e 4, respectivamente) e Tyro3 (p = 0,00017; = 4 e 4, respectivamente) n foram níveis mais baixos do que aqueles em amostras do Amon chifre. Níveis de beta-actina expressão não diferiram nessas amostras (p = 0,11; n é = 4 e 4, respectivamente). Assim, poderíamos verificar se ou não o giro denteado foi exatamente dissecados através da realização de tais experimentos simples PCR em tempo real. Terceiro, para avaliar a utilidade deste método de dissecação, que compararam o nível de expressão de mRNA do hipocampo todo com a de giro dentado. Hipocampo todo e giro denteado obtido a partir do tipo selvagem (= 9 e 4, n é, respectivamente) e alfa-CaMKII + / - ratos (= n 18 e 4, respectivamente) foram processadas para análise de microarray, e para todos os genes marcados, a vezes mudança foi calculado dividindo-se o valor mutante pelo valor do tipo selvagem. Os resultados indicaram que as mudanças na expressão de mRNA, especialmente de giro denteado-moléculas específicas, tais como Dsp e TDO2, foram detectados com um aumento de até cinco vezes na sensibilidade em amostras de giro denteado em comparação com todo amostras do hipocampo (Tabela 1). Nós já demonstraram que o alfa-CaMKII + / - exibem comportamentos relacionados com ratos humanos transtornos psiquiátricos, como déficit de memória de trabalho e um ritmo exagerado infradianos 1,5. Além disso, as características morfológicas e eletrofisiológicas dos neurônios do giro denteado em ratos mutantes são muito semelhantes aos dos neurônios imaturos giro dentado em roedores normais, indicando que os neurônios nesses ratos mutantes não conseguem desenvolver a maturidade 1. Os imaturos expressão giro e para baixo-regulado denteado de DSP e TDO2 mRNA em alfa-CaMKII + / - ratos são consistentes com a constatação de que Dsp e TDO2 podem ser usados ​​como marcadores de células granulares madura no giro denteado (Ohira et al, inédito. dados). Tomados em conjunto, esta técnica de dissecção prático e preciso pode ser confiavelmente utilizado para estudos focado no giro dentado. Tecido giro denteado obtidos utilizando este método é aplicável a outros tipos de análises, bem como, incluindo análises de biologia celular e proteômica. <img src="/files/ftp_upload/1543/1543fig1.jpg" alt="figura 1" /> Figura 1. Verificação do giro denteado isolado pelo estudo histológico. Uma seção coronal do cérebro após isolar giro dentado foi processado para a coloração de Nissl (painel esquerdo), e um esquema adaptado do cérebro do rato atlas6 representa o aproximadamente o mesmo nível da seção mostrado no painel da esquerda (painel direito). Setas indicam as direções da inserção ponta da agulha. Barra de escala, 1 mm. <img src="/files/ftp_upload/1543/1543fig2.jpg" alt="figura 2" /> Figura 2. Verificação do giro denteado isolado por PCR em tempo real. O giro denteado e chifre de Ammon s obtidos a partir de quatro camundongos selvagens foram processadas para PCR em tempo real da beta-actina, TDO2, Dsp, Mrg1b e Tyro3. Resultados são apresentados como média ± SEM. Para a análise estatística, teste t Student foi empregado s, e os valores p são seguidos: beta-actina, p = 0,11; TDO2, p = 0,000023 (** 1); Dsp, p = 0,0000030 (** 2); Mrg1b, p = 0.000080 (** 3) e Tyro3, ​​p = 0,00017 (** 4). Tabela 1. . Microarray análise do hipocampo e giro denteado todo Genes diferencialmente expressos no giro denteado do hipocampo e toda a alfa-CaMKII + / - ratos foram determinados por cálculo a mudança vezes, de que a detectada em camundongos selvagens. Os dados foram analisados ​​para significância estatística pelo teste t de Student entre os s do tipo selvagem e alfa-CaMKII + / - ratos. Entre os genes cuja expressão apresentaram p &lt;0,05 emo giro denteado de + / alfa-CaMKII - ratos comparada com a de camundongos selvagens, o top 50 genes estão listados. Note que os números de amostras para giro denteado são muito menos do que os de hipocampo todo. AffyID, Affymetrix sonda identificador; CKII, alfa-CaMKII + / - ratos; WT, camundongos selvagens. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td colspan="2"> Giro denteado (p &lt;0,05) WT: n = 4, CKII + / -: n = 4 </td><td></td><td colspan="2"> Hipocampo todo WT: n = 9, CKII + / -: n = 18 </td></tr><tr><td> Título Gene </td><td> Bancos de Germoplasma </td><td> AffyID </td><td></td><td> Mudança vezes </td><td> valor de p </td><td></td><td> Mudança vezes </td><td> valor de p </td></tr><tr><td> desmoplakin </td><td> AV297961 </td><td> 1435494_s_at </td><td></td><td> 0,011018913 </td><td> 7.02694E-06 </td><td></td><td> 0,037021003 </td><td> 1.86126E-13 </td></tr><tr><td> desmoplakin </td><td> AV297961 </td><td> 1435493_at </td><td></td><td> 0,014369734 </td><td> 7.86747E-06 </td><td></td><td> 0.04232106 </td><td> 1.00579E-12 </td></tr><tr><td> triptofano 2,3-dioxigenase </td><td> AI098840 </td><td> 1419093_at </td><td></td><td> 0,020986484 </td><td> 5.23546E-09 </td><td></td><td> 0,101037776 </td><td> 4.14823E-13 </td></tr><tr><td> nephronectin </td><td> AA223007 </td><td> 1452106_at </td><td></td><td> 0,075479901 </td><td> 1.05191E-08 </td><td></td><td> 0,234001154 </td><td> 1.66301E-15 </td></tr><tr><td> nephronectin </td><td> AA223007 </td><td> 1452107_s_at </td><td></td><td> 0,079457767 </td><td> 1.40433E-07 </td><td></td><td> 0,177974715 </td><td> 3.9758E-12 </td></tr><tr><td> tirotropina liberação de receptores hormonais </td><td> M59811 </td><td> 1449571_at </td><td></td><td> 0,103105815 </td><td> 0,003093796 </td><td></td><td> 0,801412732 </td><td> 0,283994361 </td></tr><tr><td> rianodina receptor 1, músculo esquelético </td><td> X83932 </td><td> 1427306_at </td><td></td><td> 0,104825517 </td><td> 3.38513E-07 </td><td></td><td> 0,650685017 </td><td> 0,000308462 </td></tr><tr><td> helix helix um loop de ignorante </td><td> NM_010916 </td><td> 1419533_at </td><td></td><td> 9.431896 </td><td> 6.7979E-06 </td><td></td><td> 4,078815314 </td><td> 5.27E-11 </td></tr><tr><td> família copine membro IX </td><td> BB274531 </td><td> 1454653_at </td><td></td><td> 9.159157 </td><td> 7.99492E-06 </td><td></td><td> 1,797304153 </td><td> 0,000296375 </td></tr><tr><td> doublecortin-like kinase 3 </td><td> BB326709 </td><td> 1436532_at </td><td></td><td> 0,109336662 </td><td> 1.95278E-07 </td><td></td><td> 0.56697229 </td><td> 2.62633E-08 </td></tr><tr><td> calpaína 3 </td><td> AF127766 </td><td> 1426043_a_at </td><td></td><td> 0,111269769 </td><td> 8.07053E-06 </td><td></td><td> 0,370956608 </td><td> 2.04421E-14 </td></tr><tr><td> Adulto masculino corpus striatum cDNA, RIKEN full-length enriquecido biblioteca, clone: ​​C030023B07 produto: inclassificável, seqüência de inserção plena </td><td> BB357628 </td><td> 1460043_at </td><td></td><td> 0,118712341 </td><td> 6.16926E-07 </td><td></td><td> 0,682339204 </td><td> 2.33001E-06 </td></tr><tr><td> colágeno e cálcio EGF vinculativo domínios 1 </td><td> AV264768 </td><td> 1437385_at </td><td></td><td> 0,124043978 </td><td> 3.65669E-05 </td><td></td><td> 0,488394112 </td><td> 4.05538E-06 </td></tr><tr><td> beta-amilóide (A4) precursor protein-vinculativo família, A, membro 2 de ligação às proteínas </td><td> AK013520 </td><td> 1431946_a_at </td><td></td><td> 7.7986307 </td><td> 1.2098E-06 </td><td></td><td> 2,099164713 </td><td> 1.67047E-06 </td></tr><tr><td> calbindina-28K </td><td> BB177770 </td><td> 1456934_at </td><td></td><td> 0,130255444 </td><td> 3.32186E-06 </td><td></td><td> 0,572605751 </td><td> 1.99157E-10 </td></tr><tr><td> Lócus transcrita </td><td> AV328597 </td><td> 1443322_at </td><td></td><td> 0,133290835 </td><td> 5.43583E-06 </td><td></td><td> 0,562767164 </td><td> 7.56544E-06 </td></tr><tr><td> neuropeptídeo Y receptor Y2 </td><td> NM_008731 </td><td> 1417489_at </td><td></td><td> 0,135319609 </td><td> 0,000113407 </td><td></td><td> 0,781498474 </td><td> 0.00394504 </td></tr><tr><td> ras proteína elemento responsivo binding 1 </td><td> BE197381 </td><td> 1428657_at </td><td></td><td> 0,138235114 </td><td> 7.93691E-07 </td><td></td><td> 0,651220705 </td><td> 2.94209E-05 </td></tr><tr><td> linhagem de células gliais derivadas receptor família neurotrófico fator alfa 2 </td><td> BB284482 </td><td> 1433716_x_at </td><td></td><td> 0,139062563 </td><td> 2.35371E-06 </td><td></td><td> 0,669544709 </td><td> 0,000214146 </td></tr><tr><td> preproenkephalin 1 </td><td> M13227 </td><td> 1427038_at </td><td></td><td> 6.9850435 </td><td> 2.39074E-08 </td><td></td><td> 1,766018828 </td><td> 0,000250501 </td></tr><tr><td> RIKEN gene cDNA 1810010H24 </td><td> BI729991 </td><td> 1428809_at </td><td></td><td> 6.8658915 </td><td> 1.88516E-05 </td><td></td><td> 2.77573142 </td><td> 6.81865E-09 </td></tr><tr><td> rianodina receptor 1, músculo esquelético </td><td> BG793713 </td><td> 1457347_at </td><td></td><td> 0,151364292 </td><td> 3.35612E-05 </td><td></td><td> 0,503144617 </td><td> 4.32907E-05 </td></tr><tr><td> protocadherin 21 </td><td> NM_130878 </td><td> 1418304_at </td><td></td><td> 0,152671849 </td><td> 8.57783E-06 </td><td></td><td> 0,670714726 </td><td> 1.56309E-05 </td></tr><tr><td> cornichon homólogo 3 (Drosophila) </td><td> NM_028408 </td><td> 1419517_at </td><td></td><td> 0,153724144 </td><td> 8.90755E-06 </td><td></td><td> 0.95780695 </td><td> 0,661055608 </td></tr><tr><td> harakiri, BCL2 proteínas que interagem (contém apenas BH3 domínio) </td><td> BQ175572 </td><td> 1439854_at </td><td></td><td> 0,154284407 </td><td> 2.0118E-05 </td><td></td><td> 0.56516812 </td><td> 4.86925E-09 </td></tr><tr><td> carboidratos (N-acetilgalactosamina 4-0) sulfotransferase 9 </td><td> AK017407 </td><td> 1431897_at </td><td></td><td> 0,155238951 </td><td> 5.37423E-06 </td><td></td><td> 1.14910007 </td><td> 0,215637733 </td></tr><tr><td> calpaína 3 </td><td> AI323605 </td><td> 1433681_x_at </td><td></td><td> 0,160871988 </td><td> 1.07655E-05 </td><td></td><td> 0,477164757 </td><td> 1.33753E-11 </td></tr><tr><td> dedo de zinco, de domínio CCHC contendo 5 </td><td> BQ126004 </td><td> 1437355_at </td><td></td><td> 0,161812078 </td><td> 3.08262E-06 </td><td></td><td> 0,421252632 </td><td> 0.01152969 </td></tr><tr><td> loricrina </td><td> NM_008508 </td><td> 1448745_s_at </td><td></td><td> 0,165129967 </td><td> 1.86362E-05 </td><td></td><td> 0,639733409 </td><td> 0,000729772 </td></tr><tr><td> spondin 1, (f-spondin) proteínas da matriz extracelular </td><td> BC020531 </td><td> 1451342_at </td><td></td><td> 0,168035879 </td><td> 6.67867E-07 </td><td></td><td> 0,821042412 </td><td> 0,023650765 </td></tr><tr><td> RIKEN gene A930035E12 cDNA </td><td> AV348640 </td><td> 1429906_at </td><td></td><td> 5.9086795 </td><td> 1.747E-07 </td><td></td><td> 1,470383201 </td><td> 0,104085454 </td></tr></tbody><tbody><tr><td> BB247294 RIKEN full-length enriquecido, 7 dias neonato cerebelo Mus musculus clone cDNA A730018G18 3 &#39;, seqüência de mRNA. </td><td> BB247294 </td><td> 1447907_x_at </td><td></td><td> 5.9047494 </td><td> 1.04931E-05 </td><td></td><td> 1,968147585 </td><td> 0.00010636 </td></tr><tr><td> Domínio FERM contendo 3 </td><td> BB099015 </td><td> 1437075_at </td><td></td><td> 5.860216 </td><td> 0,000345581 </td><td></td><td> 2,780297178 </td><td> 1.83072E-06 </td></tr><tr><td&gt; Pentraxina neuronal 2 / / / proteína hipotética LOC100044234 </td><td> NM_016789 </td><td> 1420720_at </td><td></td><td> 5.7568517 </td><td> 1.34227E-06 </td><td></td><td> 2,652516957 </td><td> 0,000206279 </td></tr><tr><td> Seqüências transcritas </td><td> BG076361 </td><td> 1460101_at </td><td></td><td> 5.657735 </td><td> 2.5015E-06 </td><td></td><td> 1,296248831 </td><td> 0.22870031 </td></tr><tr><td> spondin 1, (f-spondin) proteínas da matriz extracelular </td><td> BC020531 </td><td> 1424415_s_at </td><td></td><td> 0.17783576 </td><td> 1.01658E-06 </td><td></td><td> 0,836181248 </td><td> 0,001380141 </td></tr><tr><td> calbindina-28K </td><td> BB246032 </td><td> 1448738_at </td><td></td><td> 0,180317904 </td><td> 1.35961E-05 </td><td></td><td> 0,647334052 </td><td> 4.12268E-09 </td></tr><tr><td> Marcks-like 1 </td><td> AV110584 </td><td> 1437226_x_at </td><td></td><td> 0,186235935 </td><td> 1.47067E-06 </td><td></td><td> 0,499291387 </td><td> 2.34984E-08 </td></tr><tr><td> matrilin 2 </td><td> BB338441 </td><td> 1455978_a_at </td><td></td><td> 0,187783528 </td><td> 6.19122E-05 </td><td></td><td> 0.8967688 </td><td> 0,282337853 </td></tr><tr><td> matrilin 2 </td><td> BC005429 </td><td> 1419442_at </td><td></td><td> 0,188195795 </td><td> 0,000105295 </td><td></td><td> 0,915528892 </td><td> 0.35282097 </td></tr><tr><td> spondin 1, (f-spondin) proteínas da matriz extracelular </td><td> BQ175871 </td><td> 1442613_at </td><td></td><td> 0,189956563 </td><td> 9.41195E-06 </td><td></td><td> 0,861033222 </td><td> 0.1394266 </td></tr><tr><td> arrestina 3, da retina </td><td> NM_133205 </td><td> 1450329_a_at </td><td></td><td> 5.2130346 </td><td> 2.90599E-05 </td><td></td><td> 3,944218329 </td><td> 1.07437E-07 </td></tr><tr><td> RIKEN gene A330050F15 cDNA </td><td> AV325555 </td><td> 1457558_at </td><td></td><td> 0.19186781 </td><td> 0,000119342 </td><td></td><td> 0,660282035 </td><td> 2.47342E-05 </td></tr><tr><td> contactin 3 </td><td> BB559510 </td><td> 1438628_x_at </td><td></td><td> 0,194404608 </td><td> 4.08641E-07 </td><td></td><td> 0,918742591 </td><td> 0,022545297 </td></tr><tr><td> calbindina-28K </td><td> BB246032 </td><td> 1417504_at </td><td></td><td> 0,196381321 </td><td> 2.24182E-05 </td><td></td><td> 0,619305124 </td><td> 3.6222E-06 </td></tr><tr><td> peptídeo liberador de gastrina </td><td> BC024515 </td><td> 1424525_at </td><td></td><td> 4.9436426 </td><td> 3.00588E-05 </td><td></td><td> 2,752845903 </td><td> 5.72954E-07 </td></tr><tr><td> sortilin relacionadas com o domínio VPS10 contendo receptor 3 </td><td> AK018111 </td><td> 1425111_at </td><td></td><td> 4.885766 </td><td> 1.03645E-05 </td><td></td><td> 1.29051599 </td><td> 0,029733649 </td></tr><tr><td> receptor de dopamina D1A </td><td> BE957273 </td><td> 1455629_at </td><td></td><td> 4.869493 </td><td> 3.77525E-05 </td><td></td><td> 1,815881979 </td><td> 0,000516498 </td></tr><tr><td> proprotein convertase tipo subtilisina / Kexin 5 </td><td> BB241731 </td><td> 1437339_s_at </td><td></td><td> 0,210528027 </td><td> 7.83039E-05 </td><td></td><td> 0,574126078 </td><td> 9.15496E-05 </td></tr></tbody><tbody><tr><td> interleucina 1 receptor, do tipo I </td><td> NM_008362 </td><td> 1448950_at </td><td></td><td> 0,210572243 </td><td> 9.64524E-06 </td><td></td><td> 0,241135352 </td><td> 2.79816E-08 </td></tr></tbody></table>

dissecção do giro denteado do hipocampo de rato adulto

Dissection of Hippocampal Dentate Gyrus from Adult Mouse

O hipocampo é uma das áreas mais estudadas no cérebro por causa de seu importante papel funcional no processamento da memória e aprendizagem, sua plasticidade neuronal de células notável, e seu envolvimento na epilepsia, doenças neurodegenerativas, e transtornos psiquiátricos. O hipocampo é composto de regiões distintas, o giro denteado, que compreende principalmente neurônios granulares, e buzina de Amon, que compreende principalmente os neurônios piramidais, e as duas regiões estão conectadas por ambos os circuitos anatômicos e funcionais. Muitos mRNAs e proteínas diferentes são seletivamente expresso no giro denteado, e giro denteado é um site de neurogênese adulta, isto é, novos neurônios são gerados continuamente no giro denteado adulto. Para investigar mRNA e proteína expressão específica para o giro denteado, laser microdissecção de captura é frequentemente utilizado. Este método tem algumas limitações, no entanto, como a necessidade de aparelhos especiais e procedimentos de manuseio complicado. Neste protocolo de vídeo-gravadas, que demonstram uma técnica de dissecção para a remoção do giro dentado de camundongos adultos sob um estereomicroscópio. Amostras giro denteado preparados com essa técnica são adequados para qualquer ensaio, incluindo transcriptomic, proteômica, e análises de biologia celular. Nós confirmamos que o tecido é dissecado giro denteado através da realização de PCR em tempo real de giro denteado genes específicos, triptofano 2,3-dioxigenase (TDO2) e desmoplakin (DSP), e genes de Amon chifre enriquecido, Meis relacionados 1b gene (Mrg1b ) e TYRO3 a proteína tirosina quinase 3 (Tyro3). As expressões de mRNA TDO2 e Dsp nas amostras de giro dentado foram detectados em níveis mais elevados, obviamente, enquanto Mrg1b e Tyro3 foram níveis mais baixos do que aqueles em amostras do Amon chifre. Para demonstrar a vantagem deste método, foi realizada análise de DNA microarray, utilizando amostras de hipocampo todo e giro denteado. A expressão de mRNA de TDO2 e DSP, que são expressos seletivamente no giro dentado, no hipocampo todo + / alfa-CaMKII - ratos, exibiu 0,037 e 0,10 vezes alterações em relação ao do tipo selvagem ratos, respectivamente. No giro denteado isolado, no entanto, estas expressões exibidas 0,011 e 0,021 vezes alterações em relação ao do tipo selvagem camundongos, demonstrando que as mudanças de expressão gênica no giro denteado pode ser detectada com maior sensibilidade. Tomados em conjunto, esta técnica de dissecção prático e preciso pode ser confiavelmente utilizado para estudos focado no giro dentado.

A técnica de dissecção para a remoção do giro dentado de camundongos adultos sob um estereomicroscópio foi demonstrado neste protocolo de vídeo-gravadas.

Dissecção do giro denteado do hipocampo de rato adulto

O hipocampo é uma das áreas do cérebro mais amplamente estudadas devido ao seu importante papel funcional no processamento da memória e na aprendizagem, sua...

O hipocampo é uma das áreas mais amplamente estudadas do cérebro devido ao seu importante papel funcional no processamento da memória. Sua notável neuroplasticidade e seu envolvimento na epilepsia, doenças neurodegenerativas e transtornos psicológicos. O hipocampo é composto por regiões distintas, o giro denteado, CO um e CS três.O giro DTO é um local de outras neurogêneses e muitos pesquisadores podem estar incluindo você, interessado nesta região. Neste protocolo em vídeo gravado, mostramos uma técnica de dissecação para remover os gels DTO da boca de adultos sob microscópio estéril. Esta técnica nos permite dissecar e obter intactos os gels DTO inteiros.A técnica é muito útil porque uma grande quantidade de proteínas, mease e neurônios pode ser obtida a partir das amostras de gel entérico e utilizada em qualquer ensaio, incluindo análises transcriptômicas, proteômicas e de biologia do CE. Aqui está o Dr. Gil. Ele está demonstrando sua excelente técnica de dissecção neste vídeo.Ele, eu assisti a um filme e fiquei impressionado com a habilidade e suavidade com que você dissecou o giro. Você tem a técnica de um especialista. Quantas vezes você precisou praticar essa técnica para atingir esse nível de competência?Eu já realizei mais de 100 dissecações de GY vintage usando esta técnica, mas provavelmente levei apenas cerca de 20 dissecações para atingir este nível de habilidade. Você acha que alguém interessado nesta técnica pode adquirir essa competência? Sim, acho que pode.Mas você deve ter bom controle sobre as mãos e os dedos. Existem quaisquer dicas que possa nos dar ou aspectos aos quais devemos prestar atenção ao realizar esta técnica? Sim. Ao remover o dia-pepper, é muito importante não lesionar o hipocampo ou a área circundante.Essa lesão dificultará a identificação dos limites entre a tenite e a região de origem do braço. Manter os limites nessa região e no paciente é crucial. Obrigado. Aqui.Ok, vamos lá. Coloque o cérebro no HighCo.PVS. Corte o cérebro ao longo do eixo longitudinal al.Corte essas lesões posteriormente ao forame. Coloque o meio de cultura celular do outro lado para cima e remova os vários. Este é o lado medido do hipocampo.Você pode observar o limite entre o dente (Ditis) e a região CA3. Insira uma agulha em cada lado do dente e deslize a agulha ao longo do eixo temporal septal até que o hipocampo seja isolado.

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Este artigo descreve procedimentos para preparar fatias do hipocampo de ratos e camundongos transgênicos para o estudo de alterações sinápticas do cérebro associadas ao envelhecimento e relacionadas com a idade as doenças neurodegenerativas, como doença de Alzheimer.

Preparação de fatias do hipocampo aguda de ratos e camundongos transgênicos para o Estudo das Alterações Synaptic durante o envelhecimento e amilóide Patologia

Este vídeo demonstra a gravação da atividade da rede neuronal rítmica, também conhecida como oscilações, em um hipocampo isolado. Os eletrodos são inseridos em várias camadas e posições espaciais para detectar e analisar as oscilações. Isso mostra as composições neuronais únicas e a conectividade da rede neuronal em diferentes camadas do hipocampo.

Registro in vitro de oscilações no hipocampo de camundongos

Este trabalho apresenta uma metodologia completa para se preparar e...

Melhoria da preparação e preservação de fatias do hipocampo de camundongos para uma gravação muito estável e reprodutível de potenciação de longa duração

Descrevemos dois métodos para visualização e quantificação da arborização dendrítica no hipocampo de modelos de camundongos: imagens em tempo real e de profundidade de campo estendida. Enquanto o primeiro método permite um rastreamento topográfico sofisticado e a quantificação da extensão da ramificação, o último permite a visualização rápida da árvore dendrítica.

Avaliação de dendríticas Arborização no giro dentado do hipocampo em Ratos Região

Um protocolo para gerar um sistema de co-cultura consistindo de neurônios derivados de células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs), neurônios corticais primários e astrócitos é descrito. Este sistema de co-cultura permite a detecção da formação de contatos e circuitos sinápticos entre novos neurônios derivados de iPSC e neurônios corticais pré-existentes que expressam channelrhodopsina-2.

Uma Abordagem Optogenetic para Avaliar Formação das conexões neuronais em um sistema de co-cultura

Este método descreve uma preparação crônica que permite o acesso óptico ao hipocampo de camundongos vivos. Esta preparação pode ser utilizada para realizar imagens ópticas longitudinais de plasticidade estrutural neuronal e plasticidade celular evocada por atividade ao longo de um período de várias semanas.

Imagem latente longitudinal do dois-fotão do hipocampal dorsal CA1 em ratos vivos

Este é um protocolo para preparação aguda de fatias de hipocampi de camundongos adultos e envelhecidos que se aproveita da perfusão transcárrica e corte de fatias com NMDG-aCSF gelado para reduzir danos hipóxicos ao tecido. As fatias resultantes permanecem saudáveis durante muitas horas, e são adequadas para grampos de remendo de longo prazo e gravações de campo.

Minimizando a hipóxia em fatias hipocampais de camundongos adultos e envelhecidos

Este artigo tem como objetivo descrever um protocolo sistemático para obter fatias cerebrais hipocampais horizontais em camundongos. O objetivo desta metodologia é preservar a integridade das vias de fibra hipocampal, como o caminho perfurante e o trato de fibra de musgo para avaliar processos neurológicos relacionados ao giro dento.

Fatias hipocampais horizontais do cérebro do rato

Apresentamos um protocolo para preparar fatias agudas do hipocampo dorsal-intermediário de camundongos. Comparamos esta preparação transversal com o corte coronal em termos de qualidade de gravações e preservação de características morfológicas de neurônios registrados.

Preparação de fatias agudas do hipocampo dorsal para gravação de células inteiras e reconstrução neuronal no giro dentado de camundongos adultos

Aqui, demonstramos como combinar a transfecção de neurônios primários de roedores do hipocampo com imagens confocais de células vivas para analisar os efeitos patológicos induzidos por proteínas no transporte axonal e identificar vias mecanicistas que medeiam esses efeitos.

Usando imagens de células vivas para medir os efeitos de proteínas patológicas no transporte axonal em neurônios primários do hipocampo

Aprenda a dissecar o giro denteado do hipocampo de camundongos adultos usando estereomicroscópio. Esta técnica permite obter amostras intactas para análises transcriptômicas e proteômicas em neurociência.

Dissecção do giro denteado do hipocampo de rato adulto

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