Name: Agressão a estudar em Drosophila (mosca da fruta) (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 6 s
Description: Aprenda a configurar lutas controladas em Drosophila para estudar agressão em neurobiologia comportamental. Este método utiliza vials de isolamento e câmaras específicas para observar comportamentos agressivos em moscas da fruta.

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1. Montagem das paredes da câmara <ol><li> Tome duas lâminas de vidro liso, marca o meio nas duas extremidades e usando uma régua reta gumes como um guia, a pontuação do vidro com o cortador de diamante. </li><li> Deslize o cortador de diamante e para trás algumas vezes até ouvir um ruído de raspagem. </li><li> Lavar o vidro, e segurando-a com duas toalhas de papel sobre um recipiente de vidro quebrado, aplique uma leve pressão para fechar a linha marcou com o lado marcado de costas para você quebrar o slide em duas metades. </li><li> Generosamente aplicar o adesivo de vidro ao longo de uma borda de um pedaço de vidro e empurrar um segundo pedaço de vidro contra o adesivo em um ângulo reto com a primeira peça. Coloque sobre uma superfície plana (papel alumínio, papel encerado ou papel regular) e deixar solidificar por pelo menos uma hora. </li><li> Depois de uma hora, repita a aplicação do adesivo passo para formar uma câmara quadrada e deixar endurecer durante a noite. <img src="/files/ftp_upload/old/155_2008_9_3_3/155_figure-01.png" alt="Figura 1" width="358" height="266" /> </li></ol> 2. Colocando as paredes em uma placa de Petri <ol><li> Leve o topo de uma placa de Petri e preencher a uma profundidade de pelo menos 5 mm com uma solução aquecida de agarose 2% (microondas a agarose em água deionizada até que ele se dissolve totalmente). </li><li> Aguarde alguns minutos, mas ao mesmo tempo dissolvido, colocar as paredes da câmara no centro do prato. Tomar parte inferior da placa de Petri, coloque-o lado de baixo para cima. Usando uma agulha chama-aquecido em linha reta de dissecação, fazer um conjunto de pequenos orifícios (&gt; 1 mm) no centro do prato para ventilação. Faça um buraco maior (~ 4 mm de diâmetro) ligeiramente para o lado para a introdução de moscas para a câmara. Coloque um pedaço de fita de etiqueta removível sobre o buraco maior. <img src="/files/ftp_upload/old/155_2008_9_3_4/155_figure-02.png" alt="Figura 2" width="447" height="207" /> <img src="/files/ftp_upload/old/155_2008_9_3_5/155_figure-03.png" alt="Figura 3" width="328" height="211" /> </li></ol> 3. Fazer o copo de alimentos <ol><li> Aqueça um frasco de comida voar para o ponto onde a comida é derretido. Use uma pipeta Pasteur para transferência de alimentos para um frasco de cintilação fechamento de preenchê-lo para formar uma superfície plana na parte superior. Ter cuidado para evitar bolhas de ar e deixe esfriar. </li><li> Fazer colar fermento fresco por trituração uma pequena quantidade de fermento seco e algumas gotas de água em um almofariz e um pilão. Adicionar mais fermento ou água até que a consistência é espessa o suficiente para permitir que uma pequena gota visível para ser apanhada por um palito e aplicada para o centro da superfície do alimento. </li><li> Coloque o frasco de comida no centro da câmara e coloque no fundo da placa de Petri, invertida para que os lados estão em alta e não obscurecendo a vista, no topo da câmara. Introduzir dois dias 05/03 moscas velhas por aspiração dentro da câmara através do maior buraco no topo. Cobrir o buraco com fita adesiva e coloque um pedaço de papel de filtro preto com um buraco cortado 2 cm de la em cima do prato. </li><li> Coloque uma lâmpada de mesa acima da câmara, longe o suficiente para que ele não vai aquecer a câmara, e posicionado de modo que ele vai iluminar a superfície de alimentos. Todo o conjunto deve idealmente ser colocada em um ambiente com alta umidade e uma temperatura de 22-25 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/155_2008_9_3_6/155_figure-04.png" alt="Figura 4" width="284" height="212" /> </li></ol> 4. Começar a filmagem através da parede da frente da câmara quando ambos moscas estão no foodsurface.

agressão a estudar em drosophila (mosca da fruta)

Studying Aggression in Drosophila (fruit flies)

Agressão é um comportamento inato que evoluiu no âmbito de defesa ou a obtenção de recursos. Este complexo comportamento social é influenciado por fatores genéticos, hormonais e ambientais. Em muitos organismos, a agressão é crítica para a sobrevivência, mas a agressão controle e repressão em contextos distintos também se tornou cada vez mais importante. Nos últimos anos, os invertebrados têm se tornado cada vez mais útil como sistemas modelo para investigar a base genética e os sistemas biológicos do comportamento social complexo. Isto é em parte devido ao repertório diversificado de comportamentos exibidos por estes organismos. No vídeo que acompanha, esboçamos um método para analisar a agressão em Drosophila cujo projeto engloba importantes eco-etológicas restrições. Detalhes incluem os passos para: fazer uma câmara de luta; isolamento e pintura moscas; acrescentando voa para a câmara de luta, e luta gravação de vídeo. Esta abordagem está sendo utilizada para identificar genes candidatos importante na agressividade e na elaboração do circuito neuronal que subjaz a saída de agressão e outros comportamentos sociais.

Agressão a estudar em Drosophila (mosca da fruta)

A agressão é um comportamento inato que evoluiu no contexto da defesa ou obtenção de recursos. Este comportamento social complexo é influenciado por...

Meu nome é Sarah Ertel e sou pós-doutoranda no laboratório de Ed Kravitz, no Departamento de Neurobiologia da Escola Médica de Harvard. Meu nome é Sibu. Sou estudante de medicina da Alemanha e estou realizando uma rotação de pesquisa aqui no Laboratório Kravitz.E queremos mostrar como montamos combates e estudamos a agressividade em moscas-das-frutas. A primeira coisa que fazemos é preparar tubos de isolamento, o que consiste em aquecer no micro-ondas o alimento para moscas e adicionar 1,5 mL a um tubo de cultura quando o alimento estiver solidificado. Em seguida, tampamos com algodão.O primeiro passo é obter moscas socialmente ingênuas, moscas que não viram qualquer outra mosca. Para isso, coletamos pupas em estágio avançado dos tipos de moscas que nos interessam e removemos as pupas do frasco cuidadosamente com pinça.Retire o frasco de isolamento preparado, remova o algodão e coloque suavemente a pupa dentro, tampe-o novamente e rotule o frasco. Essas pupas são devolvidas ao incubador com ciclo claro-escuro sob controle climático. No dia seguinte, verificamos se já ocorreu o fechamento e anotamos a data em que as moscas fecharam.Em seguida, mantemos as moscas envelhecendo por três a cinco dias, e durante esse período aplicamos tinta no dorso do abdômen das moscas para podermos identificá-las. Agora estamos montando câmaras para as lutas propriamente ditas. Para isso, utilizamos duas lâminas de microscópio comuns, medimos o centro e fazemos marcas com uma ponta de diamante, riscando a superfície; depois, localizamos uma borda e a lâmina de microscópio deve quebrar facilmente ao meio. Ok.Então colamos as bordas das lâminas com cola adesiva. Depois, as duas metades são coladas para formar uma caixa. Podemos limpá-la com etanol a 70% e, em seguida, com um pouco de água para remover resíduos dos dedos.Encha a parte inferior da câmara com ágar a 1% e coloque a câmara no interior. Isso fornece umidade para as moscas. Em seguida, queremos dar às moscas algo pelo qual lutar.E assim nós, mesmo que o tamanho real da câmara possa ser considerado um território, fornecemos alimento a eles. E colocamos esse alimento em um frasco de cintilação. Isso fornece um nível adicional de territorialidade possível, que uma mosca poderia querer defender.Então, agora vou pegar a comida recém-aquecida no micro-ondas e colocá-la nos copos de alimento, que na verdade são tampas de cintilação, que servirão como arena de combate onde as moscas irão lutar posteriormente. É importante deixar a superfície um pouco convexa para que seja possível ver toda a área. Também é necessário evitar bolhas de ar, pois elas obstruirão o caminho das moscas quando estiverem andando sobre o copo de alimento, o que atrai as moscas para o copo de alimento.Também adicionaremos uma gota de pasta de levedura no centro do copo de alimento. E primeiro precisamos preparar a pasta de levedura. Então, pegamos simplesmente a pasta de levedura viva, colocamos em um copo de alimento e adicionamos uma gota de água, misturando até obter uma pasta.Uma vez que os copos de alimento tenham esfriado, coloque a pasta de levedura ou apenas uma pequena gota dela no centro do copo de alimento. Estamos agora na sala de comportamento, uma de nossas duas salas de comportamento. Esta sala é completamente escura se ligarmos todas as luzes, e possui controle de umidade e temperatura.Portanto, mantemos a temperatura em 25 graus e tentamos manter a umidade acima de 40% para que as moscas sejam controladas em tantas condições quanto possível. E o que vou fazer agora é preparar as lutas. Trouxemos as copos de alimento que preparamos anteriormente, que estão aqui, e vou inseri-los nessas câmaras.Tente colocá-los no meio da câmara. Colocamos a tampa de volta. Ok. E vou usar este aspirador para aspirar as moscas, exatamente um par de moscas.Então, vou pegar duas moscas, aspirá-las aqui e, em seguida, inseri-las na câmara. É isso que vou fazer. Agora, vou segurar o frasco assim porque as moscas tendem a se mover contra a gravidade e em direção à luz, portanto, têm a tendência de subir.Então é mais fácil para mim pegá-los quando retiro o algodão. Como você pode ver, tenho ambas as moscas no tubo agora. Também preciso garantir que, como essas são moscas pintadas, eu pegue uma que esteja pintada e outra que não esteja pintada.Ou, se usarmos duas cores, uma pintada com uma cor e outra com a cor diferente, mas com o mesmo genótipo. Agora eu as insiro na câmara para isso. Retiro a bola de cera.Há um pequeno orifício pelo qual inserirei as moscas, e tento posicionar a tampa de forma que as moscas não possam escapar quando eu bato levemente. Elas cairão um pouco e então eu simplesmente soprar, suavemente, para não precisar soprar com força demais, o que as incomodaria. Leva entre três e, digamos, 40 minutos para que se acalmem e examinem o ambiente na câmara.Então eles começarão a ocupar o copo de alimento e a luta terá início. Agora vou pegar toda a câmara e posicioná-la diante da câmera, ajustando a altura para filmar o copo de alimento em um ângulo ligeiramente inclinado, de modo que possamos ver todo o copo de alimento. E todo o copo de alimento estará em foco.E a sala onde esses ensaios de agressão são montados é importante. É uma sala isolada, mantida livre de tráfego e ruído. É mantida a 25 graus e tentamos manter a umidade entre 45 e 55% para manter as moscas felizes e saudáveis nesta situação.Além disso, reduzimos a intensidade das luzes do teto para que a luz sobre o copo de alimento também sirva como atrativo para as moscas. Utilizar o DFA como um sistema modelo e este tipo de configuração experimental permite-nos analisar não apenas a intensidade da agressividade, mas também os padrões específicos de agressão que observamos. Os comportamentos específicos que nos interessam revelam como o cérebro é conectado durante o desenvolvimento e, posteriormente, como isso se manifesta em um adulto que não aprendeu esses comportamentos.Então eles surgem imediatamente quando percebem o início da interação com as outras moscas. Eles sabem como avançar, sabem como ser agressivos. E queremos saber como esses comportamentos estão conectados ao sistema nervoso das moscas e como são, então, controlados.

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

A agressão é um comportamento inato e a experiência anterior de luta afeta a estratégia de luta e o resultado de competições posteriores em moscas. Este vídeo descreve um ensaio usado para estudar o comportamento agressivo da Drosophila. O protocolo de exemplo apresenta o ensaio realizado em uma configuração que elimina o manuseio de moscas e, portanto, reduz o estresse para os animais, o que de outra forma afetaria o desempenho dos sujeitos.

drosófila Ensaio de agressão: um método para testar a plasticidade comportamental em moscas

Neste artigo de vídeo, descrevemos um método automatizado para medir o efeito de fome ou saciedade em olfativo comportamento de busca de alimentos dependente na fruta Drosophila melanogaster mosca adulta.

A Single-fly Ensaio para comportamento de forrageamento em Drosophila

Aqui, apresentamos um protocolo para quantificar a evitação de indivíduos estressados. Este paradigma é poderoso, mas fácil de usar, e pode ser usado para avaliar a influência de genes e ambiente em um tipo de interação social em Drosophila melanogaster.

Ensaio simples para Quantificação de Prevenção Social Drosophila melanogaster

Durante mosca de fruta lutas, os padrões comportamentais observados, luta dinâmica e aprendizagem e memória associada são influenciadas pelas condições experimentais. O protocolo aqui apresentado descreve um novo procedimento que elimina totalmente a manipulação de moscas durante as experiências. Isso melhora a dinâmica de luta e permite a formação de efeitos fortes "loser".

Uma nova abordagem que elimina a manipulação de Estudos de Agressão e Efeito &quot;perdedor&quot; em<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Nós descrevemos um protocolo para induzir gratificante e nonrewarding experiências em moscas da fruta (Drosophila melanogaster), utilizando o consumo de etanol voluntária como uma medida de mudanças nos estados de recompensa.

Uma maneira simples para medir alterações na Recompensa comportamento de busca Usando<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Este artigo descreve um ensaio comportamental que utiliza a unidade de acasalamento dos machos em Drosophila melanogaste r para estudar motivação. Usando este método, os pesquisadores podem utilizar técnicas neurogenéticos mosca avançada para descobrir os mecanismos genéticos, moleculares e celulares que fundamentam essa motivação.

Medir e alterando Acasalamento Drive em Male<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Este protocolo descreve um ensaio de aprendizagem e memória de Drosophila chamado condicionamento de namoro. Este ensaio clássico baseia-se numa redução do comportamento do namoro masculino após a rejeição sexual por uma mulher pré-administrada não receptiva. Essa forma natural de plasticidade comportamental pode ser usada para testar aprendizado, memória de curto prazo e memória de longo prazo.

Drosophila Courtship Acondicionamento Como Medida de Aprendizagem e Memória

O ensaio Flypub mede os comportamentos que a mosca da fruta Drosophila melanogaster exibe sob a influência do etanol. O ensaio pode ser facilmente dominado por experimentadores em todos os níveis e aplicado a vários estímulos vaporizados, facilitando o abuso de substâncias e estudos de dependência.

Flypub estuda desinibição comportamental induzida pelo etanol e sensibilização

Este protocolo descreve como fazer uma simples câmara de observação de comportamento drosophila adulto, e como tirar fotografias/vídeos de alta definição da morfologia ou comportamento de diferentes tipos de moscas de frutas na câmara de observação através de métodos relativamente simples e acessíveis.

Um sistema de imagem de alta definição ajustável para estudos comportamentais de adultos drosophila

Este trabalho descreve um simples paradigma comportamental que permite a análise da aprendizagem associativa aversiva em moscas de frutas adultas. O método baseia-se na supressão do comportamento geotaxis negativo inato devido à associação formada entre um contexto ambiental específico e um choque elétrico.

Drosófila Comportamento de evasão passiva como um novo paradigma para estudar aprendizagem aversiva associativa

O Transtorno do Espectro do Autismo (TEA) está associado ao comportamento social e comunicativo prejudicado e ao surgimento de comportamento repetitivo. Para estudar a inter-relação entre genes de TEA e déficits comportamentais no modelo de Drosophila , cinco paradigmas comportamentais são descritos neste artigo para testar o espaçamento social, agressão, namoro, aliciamento e comportamento de habituação.

Paradigmas para Avaliação Comportamental no Modelo de Drosophila de Transtorno do Espectro do Autismo

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