Agressão a estudar em Drosophila (mosca da fruta)

Meu nome é Sarah Ertel e sou pós-doutoranda no laboratório de Ed Kravitz, no Departamento de Neurobiologia da Escola Médica de Harvard. Meu nome é Sibu. Sou estudante de medicina da Alemanha e estou realizando uma rotação de pesquisa aqui no Laboratório Kravitz.

E queremos mostrar como montamos combates e estudamos a agressividade em moscas-das-frutas. A primeira coisa que fazemos é preparar tubos de isolamento, o que consiste em aquecer no micro-ondas o alimento para moscas e adicionar 1,5 mL a um tubo de cultura quando o alimento estiver solidificado. Em seguida, tampamos com algodão.

O primeiro passo é obter moscas socialmente ingênuas, moscas que não viram qualquer outra mosca. Para isso, coletamos pupas em estágio avançado dos tipos de moscas que nos interessam e removemos as pupas do frasco cuidadosamente com pinça.

Retire o frasco de isolamento preparado, remova o algodão e coloque suavemente a pupa dentro, tampe-o novamente e rotule o frasco. Essas pupas são devolvidas ao incubador com ciclo claro-escuro sob controle climático. No dia seguinte, verificamos se já ocorreu o fechamento e anotamos a data em que as moscas fecharam.

Em seguida, mantemos as moscas envelhecendo por três a cinco dias, e durante esse período aplicamos tinta no dorso do abdômen das moscas para podermos identificá-las. Agora estamos montando câmaras para as lutas propriamente ditas. Para isso, utilizamos duas lâminas de microscópio comuns, medimos o centro e fazemos marcas com uma ponta de diamante, riscando a superfície; depois, localizamos uma borda e a lâmina de microscópio deve quebrar facilmente ao meio. Ok.

Então colamos as bordas das lâminas com cola adesiva. Depois, as duas metades são coladas para formar uma caixa. Podemos limpá-la com etanol a 70% e, em seguida, com um pouco de água para remover resíduos dos dedos.

Encha a parte inferior da câmara com ágar a 1% e coloque a câmara no interior. Isso fornece umidade para as moscas. Em seguida, queremos dar às moscas algo pelo qual lutar.

E assim nós, mesmo que o tamanho real da câmara possa ser considerado um território, fornecemos alimento a eles. E colocamos esse alimento em um frasco de cintilação. Isso fornece um nível adicional de territorialidade possível, que uma mosca poderia querer defender.

Então, agora vou pegar a comida recém-aquecida no micro-ondas e colocá-la nos copos de alimento, que na verdade são tampas de cintilação, que servirão como arena de combate onde as moscas irão lutar posteriormente. É importante deixar a superfície um pouco convexa para que seja possível ver toda a área. Também é necessário evitar bolhas de ar, pois elas obstruirão o caminho das moscas quando estiverem andando sobre o copo de alimento, o que atrai as moscas para o copo de alimento.

Também adicionaremos uma gota de pasta de levedura no centro do copo de alimento. E primeiro precisamos preparar a pasta de levedura. Então, pegamos simplesmente a pasta de levedura viva, colocamos em um copo de alimento e adicionamos uma gota de água, misturando até obter uma pasta.

Uma vez que os copos de alimento tenham esfriado, coloque a pasta de levedura ou apenas uma pequena gota dela no centro do copo de alimento. Estamos agora na sala de comportamento, uma de nossas duas salas de comportamento. Esta sala é completamente escura se ligarmos todas as luzes, e possui controle de umidade e temperatura.

Portanto, mantemos a temperatura em 25 graus e tentamos manter a umidade acima de 40% para que as moscas sejam controladas em tantas condições quanto possível. E o que vou fazer agora é preparar as lutas. Trouxemos as copos de alimento que preparamos anteriormente, que estão aqui, e vou inseri-los nessas câmaras.

Tente colocá-los no meio da câmara. Colocamos a tampa de volta. Ok. E vou usar este aspirador para aspirar as moscas, exatamente um par de moscas.

Então, vou pegar duas moscas, aspirá-las aqui e, em seguida, inseri-las na câmara. É isso que vou fazer. Agora, vou segurar o frasco assim porque as moscas tendem a se mover contra a gravidade e em direção à luz, portanto, têm a tendência de subir.

Então é mais fácil para mim pegá-los quando retiro o algodão. Como você pode ver, tenho ambas as moscas no tubo agora. Também preciso garantir que, como essas são moscas pintadas, eu pegue uma que esteja pintada e outra que não esteja pintada.

Ou, se usarmos duas cores, uma pintada com uma cor e outra com a cor diferente, mas com o mesmo genótipo. Agora eu as insiro na câmara para isso. Retiro a bola de cera.

Há um pequeno orifício pelo qual inserirei as moscas, e tento posicionar a tampa de forma que as moscas não possam escapar quando eu bato levemente. Elas cairão um pouco e então eu simplesmente soprar, suavemente, para não precisar soprar com força demais, o que as incomodaria. Leva entre três e, digamos, 40 minutos para que se acalmem e examinem o ambiente na câmara.

Então eles começarão a ocupar o copo de alimento e a luta terá início. Agora vou pegar toda a câmara e posicioná-la diante da câmera, ajustando a altura para filmar o copo de alimento em um ângulo ligeiramente inclinado, de modo que possamos ver todo o copo de alimento. E todo o copo de alimento estará em foco.

E a sala onde esses ensaios de agressão são montados é importante. É uma sala isolada, mantida livre de tráfego e ruído. É mantida a 25 graus e tentamos manter a umidade entre 45 e 55% para manter as moscas felizes e saudáveis nesta situação.

Além disso, reduzimos a intensidade das luzes do teto para que a luz sobre o copo de alimento também sirva como atrativo para as moscas. Utilizar o DFA como um sistema modelo e este tipo de configuração experimental permite-nos analisar não apenas a intensidade da agressividade, mas também os padrões específicos de agressão que observamos. Os comportamentos específicos que nos interessam revelam como o cérebro é conectado durante o desenvolvimento e, posteriormente, como isso se manifesta em um adulto que não aprendeu esses comportamentos.

Então eles surgem imediatamente quando percebem o início da interação com as outras moscas. Eles sabem como avançar, sabem como ser agressivos. E queremos saber como esses comportamentos estão conectados ao sistema nervoso das moscas e como são, então, controlados.