Agressão a estudar em Drosophila (mosca da fruta)

Meu nome é Sarah Ertel e sou pós-doutoranda no laboratório de Ed Kravitz aqui no Departamento de Neurobiologia da Harvard Medical School. Meu nome é Sibu. Sou um estudante de medicina da Alemanha e estou fazendo um rodízio de pesquisa aqui no Kravitz Lab.

E queremos mostrar como organizamos lutas e estudamos a agressão e as moscas-das-frutas. A primeira coisa que fazemos é preparar frascos de isolamento, que consistem em colocar comida de mosca no micro-ondas e adicionar 1,5 mils a um tubo de cultura quando o alimento estiver solidificado. Em seguida, prendemos com algodão.

O primeiro passo é pegar moscas socialmente ingênuas, moscas. Eu não vi nenhuma outra mosca. E para fazer isso, pegamos pupi em estágio avançado dos tipos de moscas em que estamos interessados e removemos o pupi do frasco cuidadosamente com a pinça.

Pegue o frasco de isolamento preparado, remova o algodão e coloque delicadamente o puy dentro, tampe novamente e rotule o frasco. Estes puy são colocados de volta na incubadora climatizada de ciclo diurno e noturno. E então, no dia seguinte, verificamos se eles foram fechados e escrevemos a data em que as moscas fecharam.

Em seguida, envelhecemos por três a cinco dias e, durante esse tempo, aplicamos tinta na parte de trás do abdômen das moscas para que possamos identificá-las. E agora estamos fazendo câmaras para as lutas reais. E para fazer isso, usamos lâminas de microscópio simples, duas delas, e medimos o meio e fazemos marcas com um pino de corte de diamante, arranhamos a superfície e, em seguida, se encontrarmos uma borda, a lâmina do microscópio deve quebrar facilmente ao meio. Okey.

Em seguida, colamos as bordas dos slides com cola adesiva. Em seguida, as duas metades são coladas para formar uma caixa. Podemos limpá-lo com etanol 70% e depois um pouco de água para remover os resíduos dos dedos.

Encha o fundo da câmara com 1% agros e cole a câmara dentro. E isso fornece umidade para as moscas. E então queremos dar às moscas algo pelo que lutar.

E assim, nós, embora o tamanho real da câmara possa ser considerado um território, fornecemos comida a eles. E colocamos essa comida em um frasco de cintilação. E isso fornece um nível adicional de possível territorialidade que uma mosca pode querer defender.

Então, agora vou pegar a comida fresca no micro-ondas e colocá-la nos copos de comida, que na verdade são tampas de cintilação, que serão a arena de luta na qual as moscas lutarão mais tarde. É importante torná-lo um pouco convexo para que você possa realmente ver toda a superfície. Você também quer evitar bolhas de ar, porque elas serão uma obstrução para as moscas quando andarem no copo de comida, quais para atrair as moscas para o copo de comida.

Também adicionaremos uma gota de pasta de fermento no meio do copo de comida. E primeiro temos que preparar a pasta de fermento. Então, pegamos a pasta de fermento viva, colocamos em um copo de comida, depois adicionamos uma gota de água e misturamos até obter uma pasta.

Depois que os copos de comida esfriarem, você coloca a pasta de fermento ou apenas uma pequena gota no meio do copo de comida. Então, estamos na sala de comportamento agora, uma de nossas duas salas de comportamento. E esta sala fica completamente escura se acendermos todas as luzes e é controlada por umidade e temperatura.

Portanto, mantemos a temperatura em 25 graus e tentamos ter a umidade acima de 40% para que as moscas que controlamos por tantas condições quanto pudermos. E o que vou fazer agora é preparar as lutas. Então, trouxemos os copos de comida que preparamos anteriormente estão aqui, e vou inseri-los nessas câmaras.

Tente colocá-los no meio da câmara. Colocamos a tampa de volta. Okey. E vou usar este aspirador para aspirar as moscas exatamente um par de moscas.

Então, vou pegar duas moscas, aspirá-las aqui e depois inseri-las na câmara. É isso que vou fazer. Agora, vou segurar o frasco assim porque as moscas são conhecidas por irem contra a gravidade e em direção à luz, então elas tendem a subir.

Portanto, é mais fácil para mim pegá-los quando removo o algodão. Como você pode ver, eu tenho as duas moscas no ator agora. Eu também tenho que me certificar de que, como são moscas pintadas, eu pego uma que é pintada e outra que não é pintada.

Ou se usarmos duas cores, uma que é pintada em uma cor e outra na outra, mas são do mesmo genótipo. Agora eu os insiro na câmara para isso. Eu removo a bola de cera.

Há um pequeno orifício por onde vou inserir as moscas e tento colocar a tampa em uma posição que não possa Eles vão cair um pouco e então eu simplesmente sopro, apenas suavemente, para que eu não tenha que soprar com muita força, porque isso vai perturbá-los. Leva entre três e, digamos, 40 minutos até que se acalmem e dêem uma olhada no ambiente da câmara.

E então eles começarão a ocupar o copo de comida e a luta começará. Agora vou pegar toda a câmara e colocá-los na frente da câmera e tenho que ajustar a altura para filmar o copo de comida de um pequeno ângulo para que possamos ver todo o copo de comida. E todo o copo de comida está em foco.

E a sala em que esses ensaios de agressão são montados é importante. É uma sala isolada, mantida livre de tráfego e ruído. É mantido a 25 graus e tentamos manter a umidade entre 45 e 55% para manter as moscas felizes e saudáveis nessa situação.

E também, diminuímos as luzes do teto para que a luz do copo de comida também seja uma atração para as moscas. Usar o DFA como um sistema modelo e usar esse tipo de configuração nos permite observar não apenas intensidades de agressão semelhantes, mas também os padrões específicos de agressão que vemos. Os comportamentos específicos que estamos muito interessados em saber como o cérebro é conectado durante o desenvolvimento e, em seguida, como isso se manifesta como um adulto que não aprendeu esses comportamentos.

Então, eles saem imediatamente quando veem o início da interação com as outras moscas. Eles sabem como atacar, eles sabem como ser agressivos. E então queremos saber como esses comportamentos estão ligados ao sistema nervoso das moscas e como eles são controlados.