Determinação da Reatividade e Titre de soro usando um ensaio de hemaglutinação

Determinação da reatividade e título do soro usando um ensaio de hemaglutinina. Uma nação do glúten é uma reação que ocorre entre anticorpos solúveis e antígenos particulados. Estes podem incluir células ou moléculas transportadoras.

Os epítopos na superfície do transportador permitem que um anticorpo se ligue e reticule o transportador, levando à formação de uma rede complexa chamada complexo de anticorpo antígeno. A aglutinação em Hem é uma forma específica de aglutinação em que os anticorpos se ligam aos glóbulos vermelhos, que atuam como antígeno particulado. Os glóbulos vermelhos são alvos úteis, pois estão prontamente disponíveis e os resultados podem ser facilmente vistos a olho nu.

As amostras de soro são diluídas em série e depois colocadas em uma placa de 96 poços. Uma suspensão de glóbulos vermelhos Riva células é então adicionada. Quando os anticorpos se apresentam em alta concentração, a ligação aos glóbulos vermelhos ocorre formando uma grande rede.

À medida que essa rede se acomoda por gravidade, ela se adapta à forma da placa ubo. Quando visto de cima, uma ampla folha de glóbulos vermelhos é vista. Esta é uma reação positiva de hemaglutinina.

Quando os níveis de anticorpos estão baixos, nenhuma rede pode se formar e os glóbulos vermelhos se conformam ao formato da placa UBO e se concentram na base formando um pequeno pellet. Esta é uma reação negativa de aglutinação da bainha. Este diagrama mostra uma reação positiva.

As células formam uma rede à medida que se acomodam, elas se conformam à forma da placa inferior em U. À esquerda e à direita, vemos a vista superior, onde uma ampla folha de glóbulos vermelhos é vista. Se uma quantidade intermediária de anticorpos estiver presente, será observada alguma formação de letras.

aglutinação em Hem também permite que a reatividade de diferentes amostras de soro seja testada contra o antígeno conhecido. O título da amostra de soro também pode ser determinado. O título é a última diluição em que foi observada uma reação positiva.

Normalmente, quanto maior a concentração de anticorpos na amostra de soro, maior o título. Este diagrama mostra uma reação negativa de aglutinação da bainha. Anticorpo insuficiente presente para reticular os glóbulos vermelhos.

À medida que as células se acomodam por gravidade, elas deslizam pela lateral do poço, formando uma pelota apertada no fundo. O diagrama à direita mostra os glóbulos vermelhos quando vistos de cima. Para este experimento, você precisará de 1 placa inferior em U de 96 poços.

É essencial que uma placa de fundo em U seja usada, pois as placas de fundo plano não permitirão que as células sedimentem em um pellet, impossibilitando a interpretação. Um animal de estimação capaz de fornecer 50 microlitros de soro de testes, uma suspensão de 1% de células Riva e uma solução única de solução salina verone buffer para cada poço de linha. De um a 12, forneça 50 microlitros de solução salina tampão roal.

Isso é usado como seu diluente. Agora coloque 50 microlitros de soro no poço, A. Esta é a sua primeira diluição em duas.

Usando o perpet, certifique-se de que a amostra de soro esteja bem misturada. Depois de misturado, remova 50 microlitros do poço A um e transfira para o poço A dois. Esta é a sua segunda diluição em duas, dando-lhe uma diluição de quatro vezes.

Continuar esta série de diluições utilizando os alvéolos de três a 11. Não coloque nenhum soro em, bem, 12, pois este é o seu controle negativo de solução salina. Agora pegue sua suspensão de 1% de células Riva, que foi bem misturada e transfira 50 microlitros para, bem, um até o poço A 12.

Uma vez que as células tenham sido adicionadas, cubra a placa e bata suavemente na placa para garantir que as amostras e as células sejam misturadas. Agora incube a 37 graus por 60 minutos. Uma incubadora umidificada é apropriada.

Durante o período de incubação de 60 minutos, as interações de anticorpos antígenos ocorrerão e as células começarão a se estabelecer. O vídeo que você está vendo é uma fotografia de lapso de tempo de todo o período de 60 minutos. Este é um close-up dos poços de cinco a 10.

Já examinamos, bem, 12, que era o seu controle de EBF nisso. Bem, as células formaram uma pelota apertada, indicando que o ensaio funcionou adequadamente. Os poços cinco e seis são exemplos de aglutinação positiva da bainha.

Bem, sete é um exemplo de resultado de aglutinação intermediário, enquanto os poços oito, nove e 10 são negativos para aglutinação em bainha. Com base nesse resultado, o título seria determinado com base na diluição para o poço, sete, pois este foi o último poço, onde foi observada uma reação positiva.