Name: Crônico Salmonella Modelo de camundongos infectados (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-31T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Aprenda a estabelecer um modelo crônico de infecção por Salmonella em camundongos usando gavagem com estreptomicina e detecção em placas BL. Este método permite estudar colonização intestinal persistente e resposta do hospedeiro.

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Este trabalho foi financiado pelo NIDDK KO1 DK075386 subvenção ea Sociedade Americana do Câncer RSG-09-075-01-MBC para junho dom

Este protocolo inclui três partes: detecção de cultura bacteriana, gavage mouse, e Salmonella. 1. Condições de crescimento Salmonella. <ol><li> Prepare a Salmonella Luria-Bertani caldo de placa (LB), incubar a 37 ° C durante a noite. </li><li> Escolha um clone da placa de LB e colocar em 7 LB ml em um tubo de 12 ml, e agitar a 37 ° C por cerca de 5 horas. </li><li> Inocular 50 ml LB com 0,05 ml de uma cultura de fase estacionária e incubar a 37 ° C sem agitação por cerca de 18 horas. </li><li> Rotação de cultura bacteriana durante a noite a temperatura ambiente com 6000 rpm por 10 minutos, suspender as bactérias em HBSS usando 100:3 ratio (LB: HBSS). Por exemplo: Cada cultura LB 50 ml será suspenso em 1,5 ml HBSS. </li><li> Para a sonda animal, diluir a cultura bacteriana na proporção de 1:10. Por exemplo: A cada 1,5 ml de cultura LB será suspenso em 15 ml HBSS. </li></ol> 2. Salmonella modelo de infecção *. <ol><li> Preparar a solução de estreptomicina. Cada rato será dado 7,5 mg de estreptomicina em 100 mL HBSS. Por exemplo, prepare mg 90 total de estreptomicina, em 1,2 ml de HBSS 10 ratos. Sempre tem algum volume extra na preparação da solução de estreptomicina. </li><li> Retirar água e comida 4 horas antes do tratamento gavagem oral. </li><li> Camundongos gavagem com estreptomicina com 7,5 mg de estreptomicina (100 l de HBSS para os ratos de controle). Agarre a pele sobre o ombro do mouse firmemente com o polegar eo dedo médio, esticar a cabeça e pescoço com o dedo indicador para fazer o esôfago em linha reta. Dirigir a bola ponta da agulha de alimentação ao longo do céu da boca e em direção ao lado direito da parte de trás da faringe, em seguida, delicadamente passar para dentro do esôfago e injetar a solução de 100 ml. Nenhuma resistência deve ser sentida. </li><li> Menos 20 horas após o tratamento estreptomicina, água e alimentos retirados novamente antes de os camundongos são infectados com bactérias. </li><li> Gavagem cada rato com 100 mL de suspensão em HBSS ou tratados com HBSS estéril (controle) por gavagem oral. O procedimento de gavagem é o mesmo que 2.3) ratos gavage com estreptomicina. </li></ol> Experimentos em animais * foram realizadas utilizando-específicas isentos de agentes patogénicos C57BL feminino / 6 camundongos (Taconic, Hudson, NY), que foram 6-7 semanas de idade, como descrito anteriormente 1. O protocolo foi aprovado pela Universidade de Rochester University Comité de Recursos Animal (UCAR). 3. Detecção de Salmonella no intestino. <ol><li> Coletar rato fecal (cerca de 100 mg). </li><li> Transferência da amostra fecal a um tubo de centrífuga de 1,5 micro com 1ml de PBS e vortex vigorosamente. </li><li> Centrifugar por 10 min a 800 rpm. Transferir o sobrenadante para um tubo de microcentrífuga limpo. </li><li> Centrifugação a 6000 rpm por 5 min. Sobrenadante é descartado e 200 mL PBS é adicionado à pellets e agitadas. </li><li> Raia o PBS 200 mL com um espalhador de células em um prato descartável CHROMagar BBL para detectar Salmonella. Espécies Salmonella aparecem malva (rosa ao roxo, ver Fig.1). Se 200 mL rende muitas colônias na placa, use 100 ml ou 50 ul para a raia. </li></ol> 4. Resultados representante. Quando o protocolo é feito corretamente, a colonização de Salmonella typhimurium pode ser detectado no intestino do rato mais de 6 meses. Salmonella pode ser detectado por cultura fecal mais de 6 meses (Fig.1). Como fora típico vêm deste modelo, o corpo de emagrecimento e morte ocorrer dentro de 4 semanas após a infecção. Dependente do Cepas de Salmonella usado para infecção, alguns ratos não podem sobreviver mais de 6 meses. <img src="/files/ftp_upload/1947/1947fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Salmonella intestinal na espécie Salmonella aparecem malva (rosa ao roxo) na cor, devido às diferenças metabólicas na presença de cromógenos selecionado. Outras bactérias são inibido ou produzir colônias azul-esverdeada ou incolor. <img src="/files/ftp_upload/1947/1947fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Proporções de sobrevivência de camundongos infectados com Salmonella cepa mutante PhoP c, c PhoP Avra, e PhoP AvrA-/AvrA c +, c PhoP Avra durante 4 semanas (28 dias). Tabela peso corporal 1. De camundongos infectados com Salmonella durante 4 semanas. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> 0 </td><td> 1 semana </td><td> 2 semanas </td><td> 3 semanas </td><td> 4 semanas </td></tr><tr><td> controle </td><td> 16,78 ± 1,05 </td><td> 16,91 ± 1,28 </td><td> 18,26 ± 1,23 </td><td> 19,31 ± 1,26 </td><td> 20,26 ± 1,15 </td></tr><tr><td> PhoP c </td> 16,89 ± 1,03 <td> 17,14 ± 1,19 </td><td> 17,43 ± 1,63 * </td><td> 18,68 ± 1,78 </td><td> 20,05 ± 1,11 </td></tr><tr><td> PhoP c Avra- </td><td> 16,91 ± 1,12 </td><td> 16,96 ± 1,39 </td><td> 17,06 ± 2,14 ** </td><td> 18,71 ± 2,18 </td><td> 20,15 ± 1,56 </td></tr><tr><td> PhoP c + AvrA-/AvrA </td><td> 16,94 ± 0,96 </td><td> 17,17 ± 1,02 </td><td> 17,63 ± 1,42 * </td><td> 18,44 ± 2,03 </td><td> 20,09 ± 1,17 </td></tr></tbody></table> * Comparado ao grupo controle p &lt;0,05 ** Quando comparado ao grupo controle p &lt;0,01 Tabela 2. Cepas de Salmonella utilizados neste estudo. <table border="1"><tbody><tr><td> Nome </td><td> Descrição </td><td> De referência ou fonte </td></tr><tr><td> Salmonella 14028s </td><td> Do tipo selvagem S. typhimurium </td><td> ATCC </td></tr><tr><td> PhoP c </td><td> Não-patogênicos complexo regulador mutante </td><td> Miller et al., 1990 </td></tr><tr><td> PhoP c Avra- </td><td> Avra mutação </td><td> Collier-Hyams et al., 2002 </td></tr><tr><td> PhoP c + AvrA-/AvrA </td><td> PhoP c Avra com Avra codificação complementada plasmídeo </td><td> Collier-Hyams et al., 2002 </td></tr></tbody></table>

<ol><li>Duan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((beta-Catenin+activity+negatively+regulates+bacteria-induced+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">beta-Catenin activity negatively regulates bacteria-induced inflammation.</a> Lab Invest. 87 (6), 613-624 (2007).</li>
<li>Barthel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretreatment+of+mice+with+streptomycin+provides+a+Salmonella+enterica+serovar+Typhimurium+colitis+model+that+allows+analysis+of+both+pathogen+and+host%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+immunity%22%5BJournal%5D)">Pretreatment of mice with streptomycin provides a Salmonella enterica serovar Typhimurium colitis model that allows analysis of both pathogen and host.</a> Infection and immunity. 71 (5), 2839-2858 (2003).</li>
<li>Miller, S. I., Mekalanos, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Constitutive+expression+of+the+phoP+regulon+attenuates+Salmonella+virulence+and+survival+within+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+bacteriology%22%5BJournal%5D)">Constitutive expression of the phoP regulon attenuates Salmonella virulence and survival within macrophages.</a> Journal of bacteriology. 172 (5), 2485-2490 (1990).</li>
<li>Valdez, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nramp1+expression+by+dendritic+cells+modulates+inflammatory+responses+during+Salmonella+Typhimurium+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Nramp1 expression by dendritic cells modulates inflammatory responses during Salmonella Typhimurium infection.</a> Cell Microbiol. 10 (8), 1646-1661 (2008).</li>
<li>Woo, H., Okamoto, S., Guiney, D., Gunn, J. S., Fierer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+Salmonella+colitis+with+features+of+diarrhea+in+SLC11A1+wild-type+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A model of Salmonella colitis with features of diarrhea in SLC11A1 wild-type mice.</a> PLoS ONE. 3 (2), e1603-e1603 (2008).</li>
<li>Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+call-and-response%3A+how+Salmonella+learns+the+gospel+from+its+host%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Molecular call-and-response: how Salmonella learns the gospel from its host.</a> Trends Microbiol. 11 (6), 245-246 (2003).</li>
<li>Zaharik, M. L., Vallance, B. A., Puente, J. L., Gros, P., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-pathogen+interactions%3A+Host+resistance+factor+Nramp1+up-regulates+the+expression+of+Salmonella+pathogenicity+island-2+virulence+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Host-pathogen interactions: Host resistance factor Nramp1 up-regulates the expression of Salmonella pathogenicity island-2 virulence genes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99, 15705-15710 (2002).</li>
<li>Townsend, P., Morton, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+Animal+Care+Policies+and+Regulations%3A+United+Kingdom%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Laboratory Animal Care Policies and Regulations: United Kingdom.</a> ILAR J. 37 (2), 68-74 (1995).</li>
<li>Olfert, E. D., Godson, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humane+endpoints+for+infectious+disease+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Humane endpoints for infectious disease animal models.</a> ILAR J. 41 (2), 99-104 (2000).</li>
<li>Ye, Z., Petrof, E. O., Boone, D., Claud, E. C., Sun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salmonella+effector+AvrA+regulation+of+colonic+epithelial+cell+inflammation+by+deubiquitination%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Salmonella effector AvrA regulation of colonic epithelial cell inflammation by deubiquitination.</a> Am J Pathol. 171 (3), 882-892 (2007).</li>
<li>Grassl, G. A., Valdez, Y., Bergstrom, K. S., Vallance, B. A., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+enteric+salmonella+infection+in+mice+leads+to+severe+and+persiste+nt+intestinal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Chronic enteric salmonella infection in mice leads to severe and persiste nt intestinal fibrosis.</a> Gastroenterology. 134 (3), 768-780 (2008).</li>
<li>Sukupolvi, S., Edelstein, A., Rhen, M., Normark, S. J., Pfeifer, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+murine+model+of+chronic+Salmonella+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+immunity%22%5BJournal%5D)">Development of a murine model of chronic Salmonella infection.</a> Infection and immunity. 65 (2), 838-842 (1997).</li>
<li>Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL). , Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention and National Institutes of Health. (2007).</li>
<li>Wu, S., Lu, R., Zhang, Y., Sun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+effects+of+a+Salmonella+type+III+secretion+effector+protein+AvrA+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Chronic effects of a Salmonella type III secretion effector protein AvrA in vivo.</a> PLoS ONE. , Forthcoming (2010).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Para utilizar este sistema, é necessário que o pesquisador para aprender a gavagem os animais. Detalhamos uma metodologia para preparar a cultura bacteriana e gavagem a camundongos. Também mostramos como monitorar a persistência de Salmonella no trato gastrointestinal (TGI). Os passos críticos neste protocolo, incluindo: <ol><li> Estreptomicina pré-tratamento: Estreptomicina pré-tratamento, poderia se livrar de alguns comensais da flora intestinal e fazer os ratos suscetíveis à infecção por Salmonella</...

<table><tbody><tr><td>HBSS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>ABCD1234</td><td></td></tr><tr><td>Caldo Luria-Bertani</td><td>BD Biosciences</td><td>244610</td><td></td></tr><tr><td>Agulha de alimentação</td><td>Popper &amp;amp; Sons, Inc.</td><td>7920</td><td></td></tr><tr><td>Streptomycin </td><td>MP Biomedicals</td><td>100556</td><td></td></tr><tr><td>BBL CHROMagar &lt;em&gt;Salmonella&lt;/em&gt;</td><td>BD Biosciences</td><td>214983</td><td></td></tr><tr><td>Espalhadores celulares descartáveis</td><td>Biologix Research Company</td><td>65-1010</td><td></td></tr></tbody></table>

crônico salmonella modelo de camundongos infectados

Chronic Salmonella Infected Mouse Model

O modelo do rato infectado de bactérias é um sistema poderoso modelo para o estudo de áreas tais como inflamação, infecção, imunologia, transdução de sinal, e tumorigênese. Muitos pesquisadores têm se aproveitado da colite induzida por<em&gt; Salmonella</em&gt; Typhimurium para os estudos sobre a fase inicial de inflamação e infecção. No entanto, poucos relatos são a infecção crônica<em&gt; In vivo</em&gt;. Camundongos com<em&gt; Salmonella</em&gt; Existência persistente no trato gastrointestinal nos permitem explorar a host-bacteriana interação a longo prazo, transdução de sinal, e tumorigênese. Nós estabelecemos um modelo de camundongo bacteriana crônica infectados com<em&gt; Salmonella</em&gt; Typhimurium colonização no intestino do rato mais de 6 meses. Para utilizar este sistema, é necessário que o pesquisador para aprender a preparar a cultura bacteriana e sonda os animais. Detalhamos uma metodologia para cultura bacteriana preparar e ratos gavagem. Também mostramos como detectar a<em&gt; Salmonella</em&gt; Persistência no trato gastrointestinal. Globalmente, este protocolo vai ajudar os pesquisadores usando o modelo de camundongo infectado de bactérias para tratar fundamentalmente importantes questões biológicas e microbiológicas.

Estabelecer um modelo de camundongo bacteriana crônica infectados com persistente<em&gt; Salmonella</em&gt; Typhimurium colonização no intestino durante 27 semanas.

Crônico Salmonella Modelo de camundongos infectados

O modelo de camundongo infectado por bactérias é um sistema de modelo poderoso para estudar áreas como infecção, inflamação, imunologia, transdução de sinal e...

O objetivo geral deste procedimento é estabelecer um modelo de camundongo cronicamente infectado por salmonela. Isso é realizado primeiramente preparando uma solução de salmonela. O segundo passo do procedimento é administrar, por gavagem, estreptomicina em camundongos, seguida de salmonela, ou apenas estreptomicina.O terceiro passo do procedimento é isolar a salmonela a partir da matéria fecal de camundongos e detectar a infecção por salmonela no intestino de camundongos utilizando placas cromogênicas BL. O passo final do procedimento é observar e registrar a massa corporal dos camundongos e anotar as alterações na vitalidade após a infecção por salmonela. Em última análise, podem ser obtidos resultados que demonstram que uma infecção por salmonela pode ser estabelecida no intestino de camundongos gavados com salmonela.Olá, sou Michelle P do laboratório do Dr. Johnson, do Departamento de Medicina da Universidade de Rochester. Também sou do Laboratório Sun e sou Y do Laboratório Sun. Hoje vamos mostrar um procedimento para estabelecer um modelo de massa infectada por Alytic Lennar.Utilizamos este procedimento em nosso laboratório para estudar a transdução de sinais na interação entre hospedeiro e bactérias e a gênese tumoral. Então, vamos começar. Antes da experimentação, prepare placas de ágar Luria-Bertani (LB) suficientes para cada linhagem de Salmonella e para uso durante todo o experimento.As placas podem ser refrigeradas e armazenadas por vários meses. Em seguida, prepare o cultivo de salmonela. Retire um frasco de estoque de salmonela congelado a menos 80 graus Celsius e deixe descongelar sobre a bancada para semear a chama de salmonela.Coloque um alça de inoculação na chama de um bico de Bunsen e mergulhe-a no estoque bacteriano descongelado. Faça movimentos em zigue-zague com a alça de um lado para o outro no terço superior da placa de LB. Flame a alça novamente e gire a placa.Faça um movimento em zigue-zague com a alça para cruzar as estrias anteriores e espalhar as bactérias sobre o segundo terço da placa. Repita mais uma vez. Flame a alça novamente.Não permita que o alça penetre no ágar. Deixe as colônias crescerem armazenando as placas em uma estufa a 37 graus Celsius durante a noite. Se realizado corretamente, a placa de salmonela deve apresentar colônias individuais em pelo menos uma seção.No dia seguinte, escolha uma colônia da placa de LB utilizando um palito estéril ou alça bacteriológica e transfira para sete mililitros de LB em um tubo de 12 mililitros. Agite o tubo a 37 graus Celsius por cerca de cinco horas.Use 0,05 mililitros dessa cultura para inoculação. Incube 50 mililitros de LB em um tubo Falcon a 37 graus Celsius, sem agitação, por aproximadamente 18 horas.Centrifugue a cultura bacteriana de 50 mililitros cultivada durante a noite, à temperatura ambiente, a 5.000 RPM por 10 minutos e descarte o sobrenadante. Em seguida, adicione 1,5 mililitro de solução salina tamponada com Hank ou HBSS ao tubo para ressuspender as bactérias, na proporção de 100 partes de LB para três partes de HBSS. Depois, complete o volume final para 15 mililitros com HBSS ou numa proporção de um para 10 de LB para HBSS.Cada camundongo requer 100 microlitros de cultura diluída de salmonela, ou entre um vezes 10 à sexta e um vezes 10 à oitava unidades formadoras de colônia, antes do início da retirada de água e alimento dos camundongos quatro horas antes do experimento. Em seguida, prepare imediatamente antes da gavagem uma solução de estreptomicina diluindo 7,5 miligramas de estreptomicina em pó em 100 microlitros de HBSS. Para cada camundongo injetado, certifique-se de preparar um volume extra para compensar perdas antes da gavagem dos camundongos.Primeiro, prepare uma agulha de alimentação com 100 microlitros de solução de estreptomicina. Retire o primeiro camundongo da gaiola para receber a gavagem e segure o camundongo com a face voltada para a superfície da bancada. Segure firmemente a pele sobre o ombro do camundongo com o polegar e o dedo médio, esticando a cabeça e o pescoço com o dedo indicador para alinhar o esôfago.Direcione a ponta esférica da agulha de alimentação ao longo do palato e em direção ao lado direito da parte posterior da faringe. Em seguida, passe-a suavemente para dentro do esôfago e injete os 100 microlitros da solução de estreptomicina. Nenhuma resistência deve ser sentida.Repita este processo para todos os camundongos experimentais e controles submetidos ao experimento. Após aproximadamente 20 horas do strp de m e da gavagem e quatro horas antes da gavagem com salmonela, retire a água e o alimento dos camundongos que receberão a gavagem com salmonela por via oral. Realize a gavagem em cada camundongo da mesma maneira que anteriormente, utilizando 100 microlitros de solução de salmonela em HBSS.Após a gavagem, transfira cada camundongo para uma nova gaiola para iniciar a coleta fecal. A partir de cerca de oito horas após a gavagem, remova as fezes da gaiola imediatamente após a eliminação. Colete 100 miligramas de matéria fecal de camundongo como amostra experimental.Colete amostras diariamente ou semanalmente, dependendo da duração do estudo, para análise de salmonela em matéria fecal. Transfira a amostra fecal para um tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitro com um mililitro de PBS e vortexie vigorosamente, em seguida centrifugue por 10 minutos a 800 RPM. Transfira o sobrenadante para um tubo de 1,5 mililitro limpo e centrifugue a 6.000 RPM por cinco minutos.Descarte o sobrenadante e adicione 200 microlitros de PBS aos pellets, agitando em vórtex para ressuspender. Em seguida, detecte *Salmonella* com uma placa de ágar BB. Use de 10 a 100 microlitros de solução de matéria fecal por placa, espalhando na placa conforme mostrado na seção dois.As espécies de salmonela apresentam coloração mar devido a diferenças metabólicas na presença de cromógenos selecionados. Conte as colônias de salmonela na placa para comparar o nível de infecção entre camundongos individuais. Neste procedimento experimental, utilizamos camundongas fêmeas livres de patógenos específicos da linhagem C 57 black six, com seis a sete semanas de idade.Os camundongos foram infectados com salmonela e estreptomicina mais HBSS. Os camundongos foram controlados por gavagem com estreptomicina apenas. As cepas de salmonela utilizadas incluem a cepa selvagem de Salmonella typhimurium, ATCC 1 4 0 2 8 S FPC, uma cepa mutante não patogênica de salmonela e três cepas FPC do laboratório do Dr. James Madera portando o gene de virulência associado AAV R age no plasmídeo de baixa cópia PSKW 29. Utilizando este protocolo, a colonização por Salmonella typhimurium pode ser detectada no intestino do camundongo.A infecção crônica por salmonela foi medida por meio da análise de matéria fecal e foram coletadas amostras de peso corporal e de tecido intestinal para coloração por imunofluorescência. Normalmente, ocorre perda de peso corporal e morte dentro de quatro semanas após a infecção. As proporções de sobrevivência quatro semanas após a infecção são mostradas aqui.Uma vez que os camundongos sobrevivem quatro semanas após a infecção, eles ganham peso corporal e a incidência de morte diminui nas 23 semanas restantes. No geral, mais de 65% dos camundongos infectados com as cepas de salmonela, FSY fsy, A VRA nula ou fsy. A VRA heterozigota conseguem sobreviver por mais de seis meses com infecção persistente de salmonela no intestino.Após a infecção aguda, os sobreviventes ainda carregavam salmonela, que pôde ser detectada seis meses após a infecção utilizando o método descrito neste protocolo. A análise de imunofluorescência de amostras de tecido do intestino de camundongo mostra a invasão da salmonela na mucosa intestinal em 27 semanas após a infecção. Nesta imagem, os núcleos são corados em azul e as células infectadas por salmonela são mostradas em verde.Como mostrado no grupo controle, não há coloração verde brilhante, o que indica ausência de colonização por salmonela. Já em camundongos infectados com salmonela aos 27 semanas após a infecção, observa-se coloração verde brilhante na mucosa intestinal. Isso demonstra a persistência da infecção por salmonela no camundongo pré-tratado com estreptomicina.Acabamos de mostrar como induzir infecção crônica em alguns modelos murinos. Ao realizar este procedimento, é importante lembrar-se de preparar um cultivo fresco para a infecção, empregar técnicas corretas de infecção e detectar a presença de ANA para garantir que o seu modelo experimental esteja funcionando. É isso aí.Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.

Research

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Biologia

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