Name: Derivação de células-tronco do rato trofoblasto de blastocistos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-06-08T17:03:00.000+00:00
Duration: 10 min 19 s
Description: Aprenda a derivar células-tronco trofoblásticas de blastocistos de camundongo, mantendo suas propriedades e induzindo diferenciação. Este método avança a pesquisa em biologia do desenvolvimento placentário.

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Os autores agradecem Janet Rossant para o protocolo original. Este estudo foi financiado pelo Instituto Nacional de Saúde para conceder CA106308 WH.

Neste protocolo, descrevemos a preparação de blastocistos do mouse e do estabelecimento de linhas de células TS. Manipulações do mouse geral antes da coleta de blastocistos, incluindo a criação de acasalamento natural e na indução da ovulação super, basicamente, seguir o protocolo padrão ilustrado por Nagy et al. 2003 (pp146-150). Derivação e manutenção das células TS <ol><li> Cruz configuração cruzamento entre ratos de interesse. </li><li> Prepare fibroblastos embrionárias de camundongos (MEFs) como células alimentadoras. Dois dias antes da coleta de blastocistos, MEFs (2 x 10 6 células) são banhados em 100 pratos mm. No dia seguinte, essas células são tratadas com 10 ml de meio de TS contendo mitomicina C (20 mg / ml) para um 2 horas de incubação a 37 ° C CO, 5% 2. Isso é seguido por lavagem de células duas vezes com PBS. As células tratadas mitomicina C são então semeadas em placas de 12 poços (1 x 10 5 células / poço). </li><li> No dia da coleta de blastocisto (3,5 dpc, referido como um dia), MEF meio de cultura é substituído por TS médio mais FGF4/Heparin 1x (0,5 ml / poço). </li><li> Preparação para a coleta do útero: euthanize o mouse e localizar o útero (Figura 1A). </li><li> Remover o útero, segurando-o com uma pinça no colo do útero (localizado atrás da bexiga) e atravessam a junção do útero e colo do útero (Figura 1B). Puxar o útero, a guarnição da membrana e tecidos de gordura fora e cortar o útero abaixo da junção com o oviduto (Figura 1C). Coloque o útero (Figura 1D) em um pequeno volume (0,2 ml) de meio de TS em uma placa de 60 mm. </li><li> Lave cada corno uterino com 1 ml de meio de TS utilizando uma seringa de 1 ml com uma agulha de 26 gauge. Inserir a agulha na base do útero e lavar lentamente em uma placa milímetros novo 60 com uma média TS ml. O útero deve ser inflado e totalmente estendido durante a lavagem. </li><li> Coletar e transferir os blastocistos cuidadosamente em um prato limpo e bem 12 contendo meio de TS utilizando uma pipeta boca controlada. Lavar blastocistos três vezes por transferência serial através de médio TS em 12-lamelas. Blastocisto um lugar por poço (Figura 2A) em uma placa de 12 poços contendo os mitomicina C tratados com alimentadores MEF e cultura a 37 ° C, 5% de CO 2. </li><li> Os blastocistos chocará da zona pelúcida e anexar aos poços em 24 a 36 horas. A conseqüência de pequeno porte será prontamente observado no dia 3. Alimentar as culturas com 500 mL de médio TS fresco, mais 1x FGF4/Heparin. </li><li> No dia 4 ou 5, o resultado natural de blastocisto deve estar pronto para desagregação dependendo do seu tamanho. O tamanho ideal para TS desagregação das células é ilustrada na Figura 3B. Lavar as culturas, uma vez com 0,5 ml de PBS. Adicione 100 ml 0,25% de tripsina / EDTA e incubar por 5 minutos a 37 ° C CO, 5% 2. Quebrar o desdobramento em pedaços pequenos, pipetando cima e para baixo vigorosamente com uma pipetteman P100. Parar o tripsinização adicionando TS-70CM-1.5F4H (TS médio de 30%, 70% MEF CM-plus FGF4/Heparin 1.5x) no poço. Mudança média 8 horas após a desagregação e continuar a alimentar as células a cada 2 dias. </li><li> Entre os dias 6 e 10 (muito variável) colônias de células TS podem ser observados. Eles têm folha plana epiteliais, como a morfologia com uma fronteira clara colônia (Figura 2C). Continuar a alimentar as culturas a cada 2 dias </li><li> Quando as células TS a confluência de 50% (geralmente entre os dias 15 e 20), lave uma vez com PBS e adicione 100 ml 0,25% de tripsina / EDTA. Pipeta para cima e para baixo durante tripsinização para garantir uma suspensão de uma única célula próximo. Parar o tripsinização adicionando TS-70CM-1.5F4H e transferência para novas placas de 6-bem ou 60 milímetros contendo o mitomicina C tratados com alimentadores MEF (2,5 x 10 5 cells/6-well ou 5 x10 5 cells/60mm placa). </li><li> Mudança média 8 horas após a passagem e continuar a alimentar as culturas a cada 2 dias. </li><li> Depois de mais uma ou duas passagens (3-5 dias entre as passagens) nos alimentadores MEF, as células podem ser cultivadas TS sem eles. Porque MEFs atribuem à placa de cultura muito mais rápido do que as células TS após tripsinização, essa diferença na taxa de aderentes podem ser utilizados para separar células TS do alimentadores MEF. Depois de passar as células cultivadas, incube-los a 37 ° CO C, 5% 2 para 30 min. Mais MEFs irá anexar a placa e da população TS permanece em suspensão. Transfira o sobrenadante para um novo prato. Repita este processo para várias passagens para obter uma população TS pura. </li><li> Manter as células em TS TS-70CM-1.5F4H e passá-las a cada 4 dias (01:10 - 01:20 split) ou quando a cultura atinge 70% confluência. Passando as células com alta densidade (maior do que dividir 1:5) ou cultivo los quando excessivamente confluentes podem causar a sua diferenciação. </li><li> A identidade das células TS pode ser confirmado por imunocoloração de um marcador celular, Cdx2 (Figura 3). </li></ol> Congelamento de células TS <ol><li> Prepare 2x meio de congelamento (50% FBS, 30 de médio TS% e DMSO 20%). </li><li> Cocélulas TS llect por tripsinização, seguido por centrifugação a 450g por 6 min. Ressuspender-los em meio TS com igual volume de meio de congelamento 2x. </li><li> Congelar as células lentamente utilizando uma câmara de álcool isopropílico a -70 ° C e transferir para o nitrogênio líquido após 24-48 horas. </li><li> Uma placa de 60 mm (70% confluentes) é normalmente mantida em 2 frascos. </li></ol> Descongelamento células TS <ol><li> Descongelar rapidamente o frasco em 37 ° C, recolher em 10 ml de mídia TS por centrifugação (450g, 6 min) e ressuspender em 30% TS media, 70cm-1.5F4H. </li><li> Um frasco de células é semeado em uma placa de 60 mm. </li></ol> TS diferenciação celular em TGC Diferenciação das células TS nas células trofoblásticas gigantes (CTGs) pode ser induzida pela retirada do MEF-CM, FGF4 e heparina. O fenótipo TGC (núcleos grandes) podem ser detectados quatro dias após a indução (Tanaka et al., 1998 e Chiu et al. 2008). Imunomarcação de p450scc detectar a expressão deste marcador TGC na cultura diferenciada (Figura 4A). Citometria de fluxo PI (iodeto de propídio) células coradas mostra ainda a presença de células diferenciadas que contêm alto teor de DNA (Figura 4B). Estes resultados sugerem que as células sofrem endorreduplicação TS para se tornar CTGs poliplóides. Resultados representante <img src="/files/ftp_upload/1964/1964fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Dissecção da úteros mouse. (A) Localização do útero é indicado por setas. (B) Corte através da junção do útero e colo do útero, como mostrado. (C) Corte do útero, logo abaixo do oviduto (OD) debaixo do ovário (OV). (D) Imagem do útero. <img src="/files/ftp_upload/1964/1964fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Fotos Representante figura 2. Ilustrar blastocisto mouse, conseqüência de blastocisto e colônia trofoblasto. (A) A blastocisto de rato coletados em E3.5 é mostrado. ICM, a massa celular interna; MT, trofectoderma mural; PT, trofectoderma polar. (B) A conseqüência trofoblasto em alimentadores MEF é mostrado. TS, células-tronco trofoblasto. (C) A trofoblasto colônia de células-tronco mostra uma clara vantagem em alimentadores MEF. Setas indicam o limite da célula. <img src="/files/ftp_upload/1964/1964fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Identificação de células TS por imunocoloração análise. TS (AD) e ES (controle, EH), as células estão sujeitos à identificação do marcador. Células estão com os anticorpos para reconhecer Oct4 (A, E) ou Cdx2 (B, F), e pela contra-DAPI (C, G) apresentado em imagens fundidas (D, H). Barra de escala, 50 mm. <img src="/files/ftp_upload/1964/1964fig4.jpg" alt="Figura 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 4"> Figura 4. Diferenciação de células in vitro TS. (A) Indiferenciado (undiff) ou diferenciados (Diff) células em cultura foram examinados para a expressão de um marcador TGC, p450scc (verde), contrastado com DAPI (vermelho). (B) análise por citometria de fluxo as células diferenciadas, marcadas com PI, mede o conteúdo de DNA (M1, 03:58 cópias; M2, mais de quatro cópias). A população M2 representa as células do trofoblasto poliplóides.

<ol><li>Chiu, S. Y., Asai, N., Costantini, F. &amp, Hsu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SUMO-specific+protease+2+is+essential+for+modulating+p53-Mdm2+in+development+of+trophoblast+stem+cell+niches+and+lineages%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">SUMO-specific protease 2 is essential for modulating p53-Mdm2 in development of trophoblast stem cell niches and lineages.</a> PLoS Biol. 6, E310-E310 (2008).</li>
<li>Kunath, T., Arnaud, D., Uy, D. G., Okamoto, I., Chureau, C., Yamanaka, Y., Heard, E., Gardner, R. L., Avner, P., Rossant, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imprinted+X-inactivation+in+extra-embryonic+endoderm+cell+lines+from+mouse+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Imprinted X-inactivation in extra-embryonic endoderm cell lines from mouse blastocysts.</a> Development. 132, 1649-1661 (2005).</li>
<li>Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNagy%2C+A+%22Manipulating+the+Mouse+Embryo%3A+The+Laboratory+Manual%22">Manipulating the Mouse Embryo: The Laboratory Manual</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, NY. (2003).</li>
<li>Tanaka, S., Kunath, T., Hadjantonakis, A. K., Nagy, A., Rossant, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Promotion+of+trophoblast+stem+cell+proliferation+by+FGF4%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Promotion of trophoblast stem cell proliferation by FGF4.</a> Science. 282, 2072-2075 (1998).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Neste vídeo, demonstramos o processo de coletar E3.5 blastocistos de procedimentos uterino e experimental para estabelecer linhagens de células TS. Descrevemos também a condição para manter a stemness de células TS e induzir sua diferenciação em células diferenciadas. Dois passos fundamentais para obter linhagens de células pura TS são o tempo para desagregação conseqüência (passo 9) e processamento de primeira passagem (passo 11). Tem sido relatado que a primitiva endoderme células derivadas podem surgir na cultura, ap...

Reagentes Médio TS: RPMI-1640, 20% FBS, piruvato de sódio 1 mM, 100 mM beta-mercaptoetanol e 100 mg / ml de penicilina-estreptomicina. Mitomicina C: Dissolver 2 mg mitomicina C (Sigma M-0503) em 2 ml de PBS e adicione essa mistura de 2 ml em 200 ml de médio TS (10 ng / ml). Fazer 20 alíquotas (10 ml) e armazenar a -20 ° C até o uso. Adicionar uma alíquota por 100 placa mm. Embrionárias de camundongos médio de fibroblastos-condição (MEF-CM): Placa MEFs em 100 placas mm (1 x 10 6 / placa). No dia seguinte, adicione 10 ml de meio de TS por prato e continuar a cultura por 48 horas. Recolher o meio de cultura, filtrá-los (0,45 mm) e armazenar a -20 ° C em 35 alíquotas ml. Descongelar cada alíquota, quando necessário, que pode ser armazenado a 4 ° C. O MEFs pode ser usado para se preparar para mais dois lotes da CM antes que eles se tornam confluentes. PBS / BSA: Dissolver BSA, fração V (Sigma A3311, de 0,1% (w / v)) em PBS (10 ml), através de um filtro de seringa de 0,45 milímetros de filtro e fazer um alíquotas ml em tubos de 1,5 ml. Armazenar a -70 ° C e descongelar um tubo quando necessário para preparar FGF4. FGF4 (1000x): Ressuspender liofilizado FGF4 (Sigma F8424, 25 mg) com 1 ml da solução de PBS / BSA. Misture bem e fazer 10 alíquotas (100 ml) em tubos de 1,5 ml e armazenar a -70 ° C. Descongelar cada tubo quando necessário e guardar o restante a 4 ° C, não re-congelar. Diluída 1000 vezes em meio TS para obter 1x FGF4 (25 ng / ml). Heparina (1000x): Ressuspender heparina (Sigma H3149, 10.000 unidades) em PBS para uma concentração final de 1 mg / ml (1000x). Fazer 100 ml alíquotas em tubos de 1,5 ml e armazenar a -70 ° C. Alíquotas descongelar quando necessário e guardar o restante a 4 ° C, não voltar a congelar. Diluir 1000 tempo em meio TS para obter 1x heparina (1 ng / ml).

derivação de células-tronco do rato trofoblasto de blastocistos

Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts

Especificação do trofectoderma é um dos eventos mais antigos diferenciação de desenvolvimento dos mamíferos. A linhagem trofoblasto derivados a partir da implantação medeia trofectoderma e gera a parte fetal da placenta. Como resultado, o desenvolvimento desta linhagem é essencial para a sobrevivência do embrião. Derivação de trofoblasto haste (TS) células de blastocistos mouse foi primeiramente descrita por Tanaka<em&gt; Et al.</em&gt; 1998. A capacidade das células TS para preservar a propriedade trofoblasto específicos e sua expressão de palco e de células de tipo específico marcadores após a estimulação adequada fornece um sistema modelo valioso para investigar o desenvolvimento da linhagem trofoblasto qual recapitulando eventos placentação cedo. Além disso, as células do trofoblasto são um dos poucos tipos de células somáticas submetidos a amplificação do genoma natural. Ainda que os percursos moleculares subjacentes poliploidização trofoblasto começaram a desvendar, o papel fisiológico e vantagem de amplificação do genoma do trofoblasto permanece em grande parte ilusória. O desenvolvimento de células-tronco em células diplóides trofoblasto poliplóide na cultura torna este<em&gt; Ex vivo</emSistema de&gt; uma excelente ferramenta para elucidar o mecanismo de regulação da replicação do genoma e da instabilidade na saúde e na doença. Aqui nós descrevemos um protocolo com base em relatórios anteriores com modificação publicado em Chiu<em&gt; Et al.</em&gt; 2008.

Neste vídeo, demonstramos o isolamento de blastocistos mouse ea derivação de células-tronco de blastocistos trofoblasto. Descrevemos também condições para a manutenção da propriedade de célula-tronco, bem como a indução de diferenciação em cultura.

Derivação de células-tronco do rato trofoblasto de blastocistos

A especificação do trofectoderma é um dos eventos de diferenciação mais precoces do desenvolvimento de mamíferos. A linhagem do trofoblasto derivada do...

O objetivo geral deste procedimento é obter células TS a partir de blastocistos de camundongo. Isso é realizado primeiramente isolando os cornos uterinos e recuperando os blastocistos de camundongos grávidos. O segundo passo do procedimento consiste em cultivar os blastocistos em células alimentadoras de metano e em condições que favoreçam o crescimento de células TS.O terceiro passo do procedimento é expandir colônias de TS e, eventualmente, cultivar células TS na ausência de células alimentadoras de metilação. O passo final do procedimento é cultivar células TS mantendo as propriedades de células-tronco, a fim de realizar criopreservação e induzir diferenciação em trofoblasto. Em última análise, podem ser obtidos resultados que demonstram a expressão de um marcador de célula-tronco de trofoblasto, ou seja, CDX2, em células TS indiferenciadas, ou um marcador diferenciado, P450 SCC, após sua maturação em células gigantes do trofoblasto por meio de microscopia de imunofluorescência.Olá, sou Shani Chu do laboratório do Departamento de Genética Biomédica do Centro Médico da Universidade de Rochester. Hoje vamos mostrar um procedimento de manutenção de células-tronco trofoblásticas. Utilizamos este procedimento para estudar o crescimento e a diferenciação do trofoblasto e seu papel nos tecidos extraembrionários na formação de uma placenta saudável.Então vamos começar. Para iniciar este procedimento, monte um cruzamento reprodutivo entre seus camundongos de interesse. Em seguida, prepare fibroblastos embrionários de camundongo ORMs como células alimentadoras.Dois dias antes da coleta de blastocistos, semeie as células MEH em placas de 100 milímetros no dia seguinte. Trate essas células MEH com 10 mililitros de meio TS contendo 20 microgramas por mililitro de mitomicina C durante duas horas a 37 graus Celsius, 5% de dióxido de carbono. Após duas horas, lave as células duas vezes com PBS, ressuspenda as células MEH tratadas com mitomicina C em 10 mililitros de meio TS e semeie as células em uma placa de 12 poços. No dia da coleta dos blastocistos, substitua o meio de cultura das células MEH por meio TS acrescido de FGF quatro heparina na concentração um X.Agora estamos prontos para coletar blastocistos do útero de camundongo. Primeiro, posicione o animal eutanasiado em decúbito dorsal e limpe a pele e o pelo com etanol 70%. Em seguida, faça uma pequena incisão lateral e puxe a pele em direção à cabeça para expor o abdômen; corte o peritônio lateralmente.Para expor a cavidade abdominal, localize o útero. Remova o útero segurando-o com uma pinça no colo do útero, localizado atrás da bexiga, e cortando na junção entre o útero e o colo do útero. Puxe o útero e retire a membrana e os tecidos adiposos.Em seguida, corte o útero abaixo da junção com o oviduto. Coloque o útero em 0,2 mililitros de meio TS em uma placa de 60 milímetros. Agora, encha uma seringa de um mililitro com um mililitro de meio TS.Acople uma agulha de calibre 26 e insira a agulha na base de um útero. Lave lentamente em uma nova placa de 60 milímetros. O útero deve ser inflado e estendido completamente durante a lavagem.Da mesma forma, lave o outro corno uterino utilizando uma pipeta controlada pela boca. Colete e transfira o blastocisto com auxílio cuidadoso para uma placa limpa de 12 poços contendo meio TS, lavando o auxílio do blastocisto três vezes por meio de transferência em série através do meio TS em placas de 12 poços.Coloque um blastocisto por poço. Em uma placa de 12 poços contendo os fibroblastos mitoticamente inativos tratados com mitomicina C, cultive a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono. Os blastocistos eclodirão da zona pelúcida e aderirão aos poços em 24 a 36 horas.Um pequeno crescimento será prontamente observado no terceiro dia. Alimente as culturas com 500 microlitros de meio TS fresco mais um X FGF quatro heparina no quarto ou quinto dia. O crescimento do blastocisto deverá estar pronto para desagregação, dependendo do seu tamanho.O tamanho ideal para a desagregação de TSL é ilustrado aqui. Lave as culturas uma vez com 0,5 mililitros de PBS. Em seguida, adicione 100 microlitros de trips a 0,25% em EDTA e incube por cinco minutos a 37 graus Celsius, 5% de dióxido de carbono.Agora estamos prontos para dissociar os blastocistos, que é provavelmente a parte mais crítica deste procedimento. Em seguida, quebre os extensões do blastocisto em pequenos aglomerados pipetando vigorosamente para cima e para baixo com uma pipeta P100. Pare a tripsinização adicionando 0,5 mililitros de meio 70 cm 1,5 F four H na placa e retorne as células imediatamente para o incubador. Oito horas após a dissociação, troque o meio.Continue a alimentar as células a cada dois dias entre os dias seis e 10. E isso é altamente variável. Colônias de TSL podem ser observadas.Eles apresentam uma morfologia plana, semelhante a uma lâmina epitelial, com limite claro da colônia. Continue alimentando os cultivos a cada dois dias quando as células TS atingirem 50% de confluência, geralmente entre os dias 15 e 20. Lave-as uma vez com PBS e adicione 100 microlitros de tripsina 0,25% EDTA, pipetando para cima e para baixo durante a tripsinização para garantir uma suspensão quase que totalmente de células isoladas.Após cinco minutos, interrompa a ação da tripsina adicionando sete DCM 1.5 F four H meio. Em seguida, transfira as células para novas placas de seis poços contendo os fibroblastos tratados com mitomicina C previamente preparados e incube a 37 graus Celsius, 5% dióxido de carbono. Troque o meio oito horas após a repicagem e continue alimentando as culturas a cada dois dias. Após mais uma ou duas passagens sobre os fibroblastos, as linhagens de células-tronco embrionárias (TSL) podem ser cultivadas sem eles, a fim de separar as TSL dos fibroblastos. Após a passagem, incubar as células cultivadas a 37 graus Celsius, 5% de dióxido de carbono, por 30 minutos. Como os mes se ligam à placa de cultivo muito mais rapidamente do que as células TS após a tripsina, a maioria dos mes se aderirá à placa, enquanto a população de TS permanecerá em suspensão. Transferir o sobrenadante para uma nova placa.Repita este processo de separação das células TS das células alimentadoras de metotrexato por várias passagens para obter uma população pura de TS. Mantenha as células TS em meio 70 cm, 1,5 F four H e realize passagens a cada quatro dias ou quando a cultura atingir 70% de confluência. Por fim, a identidade das células TS pode ser confirmada por imunomarcação de um marcador celular.Para congelar células TS com o CDX dois, colete-as por ization, seguido de centrifugação a 450 ×g por seis minutos. Re-suspenda as células em meio TS com um volume igual de meio de congelamento dois x e transfira para frascos criogênicos. Uma placa de 60 milímetros que esteja 70% confluentes geralmente é mantida em dois frascos.Congele as células lentamente usando uma câmara de álcool isopropílico a menos 70 graus Celsius. Transfira para nitrogênio líquido após 24 a 48 horas. O descongelamento de TSL deve ser feito rapidamente, descongelando o frasco a 37 graus Celsius.Transfira as células haw para um tubo de 15 mililitros contendo 10 mililitros de meio TS e recolha as células por centrifugação. Re-suspenda as células em 70 cm, meio F 1.5 quatro H e semeie cada frasco de células em uma placa de 60 milímetros. A diferenciação de células TS em células gigantes trofoblásticas ou TGC pode ser induzida pela retirada de MEC quatro e heparina. As TGCs são fáceis de identificar em cultura, apresentando núcleos e corpos celulares aumentados.O fenótipo TGC também pode ser detectado por imunomarcação de um marcador TGC, P450 SCC, mostrado em verde, com coloração de contraste com DAPI mostrada em vermelho, conforme observado aqui. Células diferenciadas expressam P450 SCC, enquanto células indiferenciadas não. A análise citométrica das células diferenciadas coradas com iodeto de propídio mostra ainda um conteúdo maior de DNA, sendo M1 representativo de duas a quatro cópias e M2 representativo de mais de quatro cópias de DNA.Esses resultados sugerem que os LTS passam por reduplicação endó para se tornarem CTS poliploides representados pela população M dois. Mostramos aqui como coletar blastocistos, ptoses e derivar células TS de camundongo a partir de blastocistos, ptoses. É importante lembrar de observar atentamente o crescimento externo ao estabelecer linhagens de LTS, garantindo que sua pluripotência seja mantida em condições de cultura.É isso aí. Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.

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Research

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Biologia

Este protocolo detalhes a derivação de células-tronco hematopoéticas para transplante de células-tronco embrionárias de rato (ESC) e sua posterior injeção em camundongos letalmente irradiados destinatário. Brevemente, ESC são diferenciados como corpos embrióides, que depois são infectadas com HoxB4 retroviral e co-cultivados com células do estroma OP9 e citocinas hematopoiéticas.

Derivação de Células-Tronco Hematopoéticas murino de Células-Tronco Embrionárias

A capacidade de células estaminais embrionárias humanas para a auto-renovar e diferenciar em todos os tipos de células do corpo sugere que eles são uma grande promessa para aplicações médicas e como ferramenta de pesquisa para abordar questões fundamentais no desenvolvimento e na doença. Aqui, fornecemos uma concisa, protocolo passo a passo para a derivação de células estaminais embrionárias humanas a partir de embriões pelo isolamento immunosurgical da massa celular interna.

Derivação de células estaminais embrionárias humanas por Immunosurgery

A capacidade de células germinais embrionárias de se diferenciarem em células germinativas primordiais durante estágios iniciais de desenvolvimento é um modelo perfeito para abordar nossa hipótese sobre o câncer e infertilidade. Este protocolo mostra como isolar células germinativas primordiais das gônadas em desenvolvimento 10,5-11,5 dias após a embriões de camundongos coitum.

Isolamento e derivação de células embrionárias de rato Germinal

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Isolamento de células primário do mouse trofoblasto e Ensaio invasão do trofoblasto

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Protocolo para a conversão directa de murino embrionárias fibroblastos em células-tronco trofoblásticas

Aqui, apresentamos um protocolo para gerar eficientemente células trofoblásticas humanas a partir de células-tronco pluripotentes humanas usando proteína morfogênica óssea 4 e inibidores das vias Activina/Nodal. Este método é adequado para a diferenciação eficiente de células-tronco pluripotentes humanas e pode gerar grandes quantidades de células para manipulação genética.

Na diferenciação in vitro de pluripotentes humanas Células-tronco em células Trofoblásticas

Este artigo descreve um protocolo para eficientemente derivar e cultura linhas de células-tronco pluripotentes de embriões de rato no estágio de blastocisto.

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