Name: Modelo de isquemia focal cerebral por oclusão Suture Endovascular da artéria cerebral média no Rat (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-05T17:15:00.000+00:00
Duration: 13 min 50 s
Description: Aprenda a induzir isquemia cerebral focal em ratos por oclusão endovascular da artéria cerebral média. Este modelo reproduz infartos corticais e subcorticais para pesquisa em acidente vascular cerebral e testes terapêuticos.

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Agradecemos a Beth Rauch e da Universidade de Wisconsin Facility Imagem de Pequenos Animais de ressonância magnética. O Departamento de Cirurgia Neurológica da Universidade de Wisconsin-Madison forneceu o financiamento para este trabalho.

MCAO modelo Rat Os preparativos pré-cirúrgica Técnica asséptica deve ser usado para todos os procedimentos cirúrgicos de sobrevivência. Desinfetar a superfície de trabalho cirúrgico com desinfectante comercial e preparar pacotes cirúrgicos estéreis de instrumentos, cortinas, gazes, compressas, suturas, e lâminas de bisturi em autoclave. A máscara cirúrgica, gorro cabelo e luvas estéreis devem ser usados. A Germinator seca talão de esterilização também é usado para reesterilize instrumentos cirúrgicos entre os procedimentos de cirurgias de ratos se vários será feito durante uma sessão. Pré-aquecer um cobertor jaqueta de água homeotérmicos e colocar sob um pano absorvente para evitar a hipotermia do rato durante a cirurgia. <ol><li> Lugar espontaneamente ratos hipertensos (ou tensão outro rato de escolha) em uma câmara de indução e induzir a anestesia com 5% de isoflurano (aparelho de anestesia deve ser ajustado para 1,0 L / min O 2 e 1,0 L / min N 2 O). Inferior a 1-2% de isoflurano para manter a anestesia. </li><li> Aplicar pomada lágrimas artificiais para ambos os olhos. </li><li> Raspar a garganta e região do pescoço esquerda, além do local da incisão prospectivos usando cortadores (Oster A5 com lâmina # 10). </li><li> Aplicar a Betadine uma gaze e desinfectar a pele a partir do centro da região cirúrgica, em espiral para fora. Enxágüe com gaze estéril, contendo etanol 70%, passando pad em um padrão similar. Repita os passos para um total de três ciclos. </li><li> Injetar 0,2 mL de bupivacaína a 0,5% por via subcutânea ao longo do local da incisão em perspectiva. </li><li> Rat lugar na meia estéril ou cobrir com uma cortina cirúrgica estéril. </li></ol> Oclusão transitória da MCA <ol start="7"><li> Sob um microscópio cirúrgico, uma incisão mediana ventral é realizada e da fáscia superficial é dissecado. </li><li> Abaixo da fáscia superficial, não há tecido glandular para a esquerda e três músculos que formam um triângulo: o esterno-hióideo, que se situa na linha média sobre a traquéia, o digástrico (facilmente identificada com sua porção tendinosa branco brilhante) e, por último, o músculo esternocleidomastóideo. </li><li> Dissecção cortante e contundente cuidado é realizado dentro do triângulo para identificar a artéria carótida (dissecção romba exclusiva pode ser preferido por alguns para minimizar os danos dos tecidos acidental). As artérias externa, interna e carótida comum (ECA, ICA, CCA) são expostos. A artéria carótida é grande e visivelmente pulsos. O nervo vago é visto correndo ao longo da face lateral de ambos comum e artérias carótidas internas e é fortemente dissecadas as artérias carótidas comum e interna. </li><li> Dois ramos ECA são, então, dissecados acentuadamente, o ramo medial e primeiro título do segundo ramo título lateralmente. Ambos os ramos são cauterizados e corte, que permite maior facilidade na mobilização dos navios de maior porte. </li><li> O ECA é agora dissecado mais rostralmente. O osso hióide pode ser encontrado e isso vai limitar a extensão da dissecção rostral. A artéria carótida externa é amarrado como distalmente possível com um fio de seda 6-0. </li><li> Outro fio de seda 6-0 é colocado frouxamente em torno do ECA, perto da bifurcação com a ICA. Certifique-se de não obstruir o vaso como a sutura intraluminal para ser usado para a oclusão estará passando por aqui em uma etapa posterior. </li><li> Clips microcirúrgicas são colocados em comum e artérias carótidas internas, perto da bifurcação. </li><li> Uma arteriotomia parcial inicial é criada entre os dois laços de seda de sutura na artéria carótida externa. </li><li> Introduzir um 2,2 cm de comprimento -3,0 de sutura 4-0 monofilamento nylon, com um centímetro de sua kink 2,0 arredondado, ponta de silício revestido, no lúmen ECA em direção ao CCA, onde o clipe está localizado microcirúrgica. Estes pontos são disponíveis comercialmente (Doccol Corp, Redlands, CA, EUA). Corte a porção restante da ECA (no local da arteriotomia parcial) para libertar o coto ea posição do tronco abaixo da bifurcação da ECA e ICA, o que irá permitir mais facilmente a sutura intraluminal para deslizar no ICA. </li><li> Aperte o fio de seda ao redor do coto ECA para proteger o fio de náilon intraluminal e prevenir o sangramento, e depois remover o clipe microvascular do ICA. Abra o clipe lentamente antes de removê-lo para verificar se há sangramento. </li><li> Continuar avançando a sutura de nylon do ECA para ICA lúmen da artéria cerebral média (MCA). Este comprimento é tipicamente 18-20 mm e é a razão para colocar uma torção na sutura antes da inserção. Depois de um comprimento variável de sutura nylon é inserido, a resistência pode ser sentida. Se isso ocorre com grande parte do fio de náilon ainda presente no exterior do navio, isso indica que a sutura é provável entrada da artéria pterigopalatina (ver nota abaixo). Puxar para trás e curva a sutura ligeiramente para continuar ao longo do ICA, que será executado mais medialmente. Além disso, a dissecção da origem do PPA pode ser feito para melhor visualizar o caminhodo filamento intraluminal. Continue a inserir o fio de náilon até sentir resistência durante e após a posição cm 2 torcida. Neste ponto, a sutura intraluminal bloqueou a origem do MCA. MCA oclusão pode ser confirmada através do monitoramento da redução do fluxo sanguíneo cerebral regional através de um laser fluxômetro Doppler (ver tabela Materiais para uma fonte de equipamento). Observe também que a origem da artéria pterigopalatina fora do ICA pode estar diretamente ligada off, se preferir, a fim de evitar a intubação acidental deste navio com o fio intraluminal. </li><li> Iniciar o cronômetro e registrar o tempo começar a oclusão. </li><li> Remover o microclip do CCA. </li><li> Fechar a incisão (derme, panículo carnosus, camadas de tecido subcutâneo) rapidamente com fio de seda 3-0 (um padrão simples contínuo irá facilitar a reabertura de reperfusão) e cuidadosamente coloque o rato em uma gaiola de recuperação. Verifique se o piso da gaiola em volta do nariz e da boca estão livres de material de cama e recuperação monitor da anestesia. </li></ol> Restauração do fluxo sanguíneo MCA (reperfusão) <ol start="21"><li> Pouco antes do período de oclusão deve terminar, re-anestesiar o rato, desinfectar o local da incisão com Betadine e etanol a 70% (3 ciclos, como antes) e reabrir a incisão através da remoção das suturas de fechamento. </li><li> Coloque um microclip no CCA, como antes. </li><li> Retirar a sutura parcialmente a oclusão da ACI até o final de sutura é visível através do ICA. NÃO remover completamente a sutura do ICA / ECA! </li><li> Coloque um microclip na ICA acima da extremidade do fio intraluminal. </li><li> Remover completamente a sutura oclusão e amarrar firmemente o coto ECA. Fim registro de oclusão (start reperfusão) tempo. </li><li> Remover o microclip do ICA. </li><li> Remover o microclip do CCA. </li><li> Umedecer a região com algumas gotas de solução salina estéril e fechar a incisão camadas (derme, panículo carnosus, tecido subcutâneo) com fio de seda 3-0 com um padrão simples interrompido. </li><li> Administrar a buprenorfina 0,05 mg / kg (ou outro analgésico pós-operatório adequado na sequência de suas diretrizes institucionais) para o espaço peritoneal. </li><li> Injetar 5cc de solução salina intraperitoneal pré-aquecido. Isto irá fornecer a hidratação durante a fase de recuperação. </li><li> Monitorar a recuperação de ratos da anestesia. </li><li> Depois de o rato se recuperou, teste comportamental para indicação de infarto mantendo o rato pelo rabo e observando se o rato pode girar para ambos os lados. Curling para um lado só é esperado. Escalas de classificação simples pode ser usado para gravar funcionamento pós-infarto inicial Behavorial (ver Discussão). </li><li> Injeções adicionais de buprenorfina (mesma dosagem acima) deve ser administrada a cada 6 a 8 horas para 24 horas de alívio da dor. Estender analgesia se o animal está mostrando sinais de desconforto. </li></ol> Resultados representante <img src="/files/ftp_upload/1978/1978fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Oclusão da artéria cerebral média por sutura endovascular. Um diagrama simplificado do sistema circulatório do crânio do rato é mostrado com uma sutura de silício revestido intraluminal ocluindo a origem da MCA. A OA e ramos ST fora do ECA esquerda têm sido ligada e uma gravata de sutura ao redor do coto ECA detém a sutura intraluminal no lugar. ACA, artéria cerebral anterior; BA, artéria basilar; CCA, artéria carótida comum; ECA, da artéria carótida externa; ICA, artéria carótida interna; MCA, artéria cerebral média; OA, artéria occipital; PCA, artéria cerebral posterior; PComA, comunicante posterior artéria; PPA artéria, pterigopalatina; ST, artéria tireóidea superior. Figura adaptada de Sasaki et al. 4 e Lee 3. <img src="/files/ftp_upload/1978/1978fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Ressonância magnética representante de cortes coronais de cérebro de rato, 24 horas após uma hora MCAO transitória. Edema cerebral que acompanha a isquemia focal é visualizado em T2 de ressonância magnética. A zona de infarto aparece hiperintenso (claro) em imagens de T2. Padrões de infarto semelhante pode ser visto com mais avançadas técnicas de ressonância magnética, como imagem ponderada em difusão e coeficiente de difusão aparente mapeamento 5. <img src="/files/ftp_upload/1978/1978fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Representante cortes coronais do cérebro de ratos corados com TTC 24 horas após uma hora MCAO transitória. Coloração TTC revela branco (sem manchas) regiões de infarto do córtex cerebral e estriado em ratos mesmo que é mostrado na Figura 2. Note-se que o padrão geral de lesões isquêmicas focais é semelhante à observada na ressonância magnética T2, embora a área de infarto final determinado histologicamente pode ser ligeiramente menor do que a lesão T2.

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</ol>

Os autores não têm interesses conflitantes de divulgar. Este protocolo foi aprovado pelo Institutional Animal Care e do Comitê Use na Universidade de Wisconsin-Madison School of Medicine e da Saúde Pública e age de acordo com os Institutos Nacionais de Saúde diretrizes para o uso de animais experimentais.

Modelos de roedores de isquemia cerebral pode ser classificado como global ou focal e como reversível ou irreversível. Nós usamos um modelo de isquemia focal reversível, a fim de imitar a lesão de reperfusão, que pode ocorrer em humanos após recanalização pacientes com AVC. Enquanto as ações de ratos a vantagem de circulação cranial semelhante ao humano, a extensa circulação colateral intracraniana devido ao Círculo de Willis e os resultados leptomeníngea anastomoses em volumes incompatíveis infarto 6. Nós usamos o rato espontaneamente hipertensos (SHR) tensão por causa do tamanho do infarto é maior em SHRs expostos a isquemia cerebral focal em comparação com ratos normotensos 70-10. Indução de acidente vascular cerebral em SHRs também é mais consistente e pode gerar menor mortalidade do que em outras cepas comumente usados ​​11. Além disso, parâmetros fisiológicos devem ser monitorados durante toda a cirurgia, porque as flutuações pode adicionar à variabilidade nos volumes de infarto; estes parâmetros incluem pressão arterial O 2 e CO 2 níveis, hipotermia e hiperglicemia, que pode agravar a lesão isquêmica 2,12 . A hipotermia é particularmente preocupante, pois pode diminuir o grau de lesão neuronal isquêmica e, portanto, colocando o rato sobre uma almofada de aquecimento de termorregulação durante a cirurgia é essencial. Nós empregamos comercialmente preparado de silício revestido suturas neste procedimento, na tentativa de aumentar a consistência no tamanho do infarto 13-15. Tradicionalmente, suturas intraluminal usado para ocluir o MCA foram preparados pelo fogo-de arredondamento uma ponta de sutura 3-0 nylon ou usando uma pistola de cola quente para cobrir a ponta de sutura com uma cola pequena pérola 16. Tais procedimentos produzem suturas com diâmetros variando ponta e, assim, pode exigir várias tentativas de oclusão antes de encontrar uma sutura que coincide com o diâmetro do vaso de um rato dado. Variações adicionais sobre o método MCAO descritos neste vídeo incluem oclusão mais distal, poupando os ramos lenticulostriate a fim de ter um infarto puro cortical 17, e oclusão simultânea do MCA e artéria carótida comum ipsilateral para reduzir o fluxo de sangue colateral 6,9. Os efeitos funcionais de acidente vascular cerebral pode ser avaliado usando uma variedade de testes comportamentais, em que os déficits em tarefas específicas se refletem em uma escala de pontuação simples. Por exemplo, Bederson et al. 18 desenvolveu uma classificação neurológica ratos pontuação do grau de flexão do membro anterior em uma posição corporal elevada, resistência assimétrica para um empurrão lateral, e comportamento em campo aberto circulando. Ratos estendendo ambos os membros anteriores para o chão quando elevado e que não apresentam déficits de outras foram classificadas &quot;Normal (0)&quot;, enquanto os ratos com a flexão do membro anterior contralateral só foram classificados com &quot;déficits moderados (1)&quot;. &quot;Grave grau 2&quot; ratos diminuiu a resistência exibida no lado contralateral a uma força lateral e &quot;grave grau 3&quot; ratos circulando adicionalmente envolvidos em comportamentos. Menor grau de déficits comportamentais foram sempre observadas no grau imediatamente superior (por exemplo, grau 2 e 3 os animais também exibido flexão forelimb) e os escores foram preditivos de diferenças no tamanho do infarto 18. Assim, como um sistema de pontuação simples permite uma rápida avaliação semi-quantitativa consistente dos déficits funcionais de acidente vascular cerebral. A medida da extensão do infarto cerebral é comumente realizada por coloração histológica de dano tecidual utilizando TTC, violeta cresil (Nissl mancha) ou hematoxilina e eosina. Técnicas de ressonância magnética, incluindo a difusão ponderada MRI para visualizar o infarto em momentos iniciais após a oclusão, permitem a determinação de um volume de infarto em cada rato individuais sem a necessidade de colheita de tecidos. Isto é especialmente valioso em estudos destinados a determinar a eficácia de um tratamento neuroprotetor após o AVC; imagem do rato após administração do tratamento MCAO mas antes dá a confiança investigador que todos os animais experimentais e controle experientes cursos semelhantes para começar, reduzindo os efeitos de confusão de variabilidade na indução de acidente vascular cerebral.

<table><tbody><tr><td> Fio de sutura de náilon 4-0</td><td>Doccol Corporation</td><td></td><td>Comprimento do revestimento de silicone de 2-3 mm, diâmetro da ponta de 0,39 mm</td></tr><tr><td>Ratos espontaneamente hipertensos</td><td>Charles River Laboratories</td><td></td><td>290-300 g, macho</td></tr><tr><td>Bomba e placas termorregulatórias Gaymar T/Pump</td><td>Gaymar Industries</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Unidade eletrocirúrgica bipolar Vetroson V-10</td><td>Summit Hill Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sterilizador por microesferas de vidro Germinator 500</td><td>CellPoint Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Monitor de perfusão sanguínea Vasamedics Bpm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;Laserflo</td><td>TSI Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

modelo de isquemia focal cerebral por oclusão suture endovascular da artéria cerebral média no rat

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

AVC é a principal causa de incapacidade e terceira causa de morte em adultos no mundo inteiro 1. Em tempos humanos, existe um estado altamente variáveis ​​clínicas; no desenvolvimento de modelos animais de isquemia focal, no entanto, conseguir reprodutibilidade de volume de infarto induzida experimentalmente é essencial. O rato é um modelo animal amplamente utilizado para acidente vascular cerebral devido a seus custos relativamente baixos criação de animais e à semelhança de sua circulação cranial ao dos humanos 2,3. Em humanos, a artéria cerebral média (MCA) é mais comumente afetados em acidente vascular cerebral e síndromes múltiplos métodos de MCA oclusão (MCAO) têm sido descritos para imitar essa síndrome clínica em modelos animais. Porque recanalização comumente ocorre após um acidente vascular cerebral na reperfusão, humana depois de um período de oclusão foi incluído em muitos desses modelos. Neste vídeo, demonstramos o transitório endovascular de sutura modelo MCAO em ratos espontaneamente hipertensos (SHR). Um filamento com um revestimento de ponta de silicone é colocado na origem intraluminalmente MCA por 60 minutos, seguida de reperfusão. Note que o período de oclusão ideal pode variar em linhagens de ratos, tais como Wistar ou Sprague-Dawley. Vários indicadores comportamentais de acidente vascular cerebral em ratos são mostrados. Isquemia focal é confirmada usando T2 imagens de ressonância magnética e pela coloração seções cérebro com 2,3,5-cloreto de trifeniltetrazólio (TTC) 24 horas após MCAO.

Indução cirúrgica de uma lesão cerebral isquêmico no rato é um modelo amplamente utilizado para a pesquisa acidente vascular cerebral. Aqui nós demonstram a indução de isquemia cerebral focal por oclusão da artéria cerebral média. Visualização do infarto resultantes de coloração histológica e ressonância magnética também é mostrada.

Modelo de isquemia focal cerebral por oclusão Suture Endovascular da artéria cerebral média no Rat

O acidente vascular cerebral (AVC) é a principal causa de incapacidade e a terceira principal causa de morte em adultos em todo o mundo1. No AVC humano, existe uma variabilidade elevada...

Neste vídeo, demonstraremos um método para gerar um infarto cerebral por oclusão endovascular da artéria cerebral média em ratos. Este é um modelo animal amplamente utilizado na pesquisa de acidente vascular cerebral, que produz isquemia na córtex cerebral, bem como em estruturas subcorticais, incluindo os gânglios basais e o hipotálamo. Este modelo pode gerar isquemia cerebral permanente ou transitória.Dependendo se o sutura intraluminal é deixada no lugar ou removida após um período definido de tempo. A isquemia cerebral produz um núcleo de infarto no qual ocorre a morte celular, e uma região peri-isquêmica denominada penumbra, na qual alguma recuperação celular pode ser possível. Antes de começarmos, vamos dedicar um momento para descrever os passos que seguiremos.Aqui vemos um diagrama simplificado do sistema circulatório craniano da rata. Nesta cirurgia, exporemos a artéria carótida esquerda próxima à bifurcação da artéria carótida comum, ou CCA, nas artérias carótida externa (ECA) e carótida interna (ICA). Duas pequenas ramificações da ECA, a artéria occipital e a artéria tireóidea superior, serão ligadas utilizando coagulação bipolar, e a ECA será amarrada distalmente a essas duas ramificações. Usando um fio de seda, clipes microvasculares serão colocados sobre as artérias carótida comum e carótida interna.Um fio de sutura de monofilamento de náilon com ponta revestida de silicone será então inserido através de uma incisão na artéria carótida externa (ECA) e direcionado para cima, entrando na artéria carótida interna (ICA). Esse fio intraluminal é levemente amarrado no lugar com um fio de seda ao redor da ECA antes de liberar o clipe microcirúrgico da ICA. O fio de sutura intraluminal de náilon é então avançado aproximadamente dois centímetros até que a ponta de silicone obstrua a origem da artéria cerebral média ou MCA.O segundo clipe micro é removido da ACA e o período de oclusão é cronometrado. Agora que temos uma visão geral do procedimento, vamos prosseguir para a cirurgia. Prepare o rato como faria para qualquer procedimento cirúrgico, de acordo com as diretrizes de cuidados com animais da sua instituição; colocamos o rato sob anestesia usando 5% de isoflurano para indução, com uma taxa de fluxo de um litro por minuto de oxigênio e um litro por minuto de óxido nitroso; reduzimos a concentração de isoflurano para 1 a 2% para manutenção.Uma vez atingido o plano anestésico, aplicamos pomada de lágrimas artificiais em ambos os olhos e realizamos a depilação do pescoço com tesoura elétrica. Em seguida, a região é desinfetada com solução de betadine, seguida por etanol 70%. Esse processo deve ser repetido por um total de três ciclos de enxágues com Betadine e etanol 70%.O rato é colocado em uma meia estéril e posicionado sobre um cobertor térmico regulatório. Para prevenir hipotermia. É útil elevar ligeiramente o pescoço, deslizando um tubo cônico de 15 ml sob a cabeça do rato.Isso auxiliará na exposição das artérias carótidas posteriormente. Finalmente, 0,2 mils de uma solução anestésica a 0,5% são injetados subcutaneamente ao longo do local presumível da incisão para proporcionar alívio da dor pós-operatória sob um microscópio cirúrgico. Faça uma incisão mediana utilizando uma lâmina de bisturi nº 10.A dissecação restante será realizada no lado esquerdo do animal em relação à linha média. Comece a dissecar através da fáscia superficial. Isso é feito por meio de uma combinação de dissecação romba e afiada.Extensa tecido glandular é visível lateralmente, enquanto o grande músculo esternal od reside na linha média sobreposta. A traqueia utilize aplicadores de algodão para dissecar a glândula lateralmente e o músculo esterno hi medialmente. Sob o tecido glandular, você verá os músculos digástrico e esternocleidomastoideo, que juntamente com o músculo esterno hi na linha média formam um triângulo muscular sutil cujo ápice está circulado.É dentro desse triângulo que a dissecação prosseguirá até a artéria carótida. Use tesoura microcirúrgica para cortar a fáscia que recobre os músculos. Isso permitirá a retração dos músculos para expor os vasos subjacentes.Aplicadores de algodão podem ser usados para retrair os músculos e expor as artérias comum, externa, profunda e interna. Continue trabalhando para expor a AEC em seus ramos. Isso exigirá uma dissecação precisa e cuidadosa dos vasos.O objetivo dessas etapas é liberar a ACE e a ACI do tecido conjuntivo subjacente. Continue a dissecar a ACE completamente. Observe que o osso da mandíbula pode ser encontrado e isso limitará a extensão da dissecação rostral.O nervo vago, que apresenta coloração branca, é visto percorrendo a face lateral das artérias carótidas comum e interna, sendo então dissecado com precisão da CCA e da ICA. Duas ramificações provenientes da AEC também são dissecadas com precisão. O primeiro ramo, que se dirige lateralmente, é a artéria occipital, e o segundo ramo, que se dirige medialmente, é a artéria tireóidea superior.Os dois primeiros ramos da ECA são cauterizados e posteriormente cortados. O corte desses ramos permite maior facilidade para mobilizar os vasos. Mais adiante no procedimento, utilize um fio de seda para ligar firmemente a ECA o mais distalmente possível.Coloque outro fio de seda solto ao redor da ECA proximal à bifurcação da artéria carótida comum. Certifique-se de não ocluir o vaso com este laço, pois o fio endovascular utilizado para a oclusão da artéria cerebral média passará por esta porção da ECA. Em seguida, coloque clipes microvasculares tanto na artéria carótida comum quanto na artéria carótida interna.Essa posição um pouco afastada da origem da AEC. Em seguida, crie uma arteriotomia parcial entre os dois laços de sutura de seda da AEC. Pode ser liberada uma pequena quantidade de sangue residual, mas um sangramento extenso provavelmente indica fixação inadequada com os clipes microvasculares.Neste caso, certifique-se de que nenhum tecido subjacente foi preso nas lâminas do clipe, impedindo o fechamento completo. O próximo passo é inserir um segmento de três centímetros de sutura de náilon monofilamentar na AEC. É útil marcar a sutura a dois centímetros da sua ponta revestida com silicone.Esses fios cirúrgicos estão disponíveis comercialmente, e o diâmetro da ponta e o comprimento do revestimento de silicone podem ser personalizados conforme suas especificações, dependendo da idade e do peso dos ratos que você utilizará. Para ratos de 300 gramas, utilizamos um diâmetro da ponta de 0,39 milímetro e um comprimento do revestimento de silicone de dois a três milímetros em um fio cirúrgico de náilon 4-0. Introduza o fio cirúrgico oclusivo de náilon na luz da AEC em direção à artéria carótida comum.Afirme o nó de seda ao redor do coto da ECA para fixar o sutura intraluminal de náilon e evitar sangramento. Corte a porção remanescente da ECA para liberar o coto e posicione o coto da ECA abaixo do ponto de bifurcação, de modo que fique aproximadamente alinhado com a artéria carótida interna. Isso permitirá com maior facilidade que a sutura intraluminal deslize para dentro da artéria carótida interna.Remova o clipe microvascular da AIC. Lembre-se de abrir os clipes lentamente para verificar sangramento antes de removê-los completamente. Continue avançando o fio de náilon dentro da luz da AIC até que ele atinja a artéria cerebral média.Este comprimento é tipicamente de cerca de dois centímetros e é a razão pela qual se faz uma marca no fio cirúrgico antes da inserção. Após a inserção de um comprimento variável de fio cirúrgico de náilon, pode-se sentir resistência; se essa resistência ocorrer quando grande parte do fio de náilon ainda estiver fora do vaso, provavelmente indica que o fio está entrando na artéria tegopalatina. Nesse caso, recue e curve ligeiramente o fio para continuar ao longo da artéria carótida interna, que seguirá um trajeto mais imediato.Observe a alteração na posição da sutura dentro da luz da ACI nestas duas imagens comparativas. Prossiga avançando a sutura através da ACI até que a maior parte da sutura esteja inserida e nova resistência seja sentida neste ponto. A sutura intraluminal bloqueou a origem da ACM.Inicie o cronômetro e registre a oclusão. Hora de início. Remova o outro clipe microvascular da AC, feche a incisão rapidamente e com cuidado.Coloque o rato em uma gaiola de recuperação. Verifique se o piso da gaiola ao redor do nariz e da boca está livre de material de cama pouco antes do término do período de oclusão, anestesie o rato e reabra a incisão removendo os pontos de sutura. Coloque um clipe micro no CCA como anteriormente.Retire parcialmente o ponto oclusivo da AIC até que a extremidade do ponto fique visível através da AIC. Ainda não remova completamente o ponto. No entanto, coloque outro clipe microcirúrgico na AIC acima do local do ponto intraluminal, remova completamente o ponto oclusivo e feche o coto da AEC.Registre o horário de início da reperfusão. Remova os microclips da AIC e da ACC, umedecendo a região com várias gotas de solução salina estéril, e feche a incisão com sutura. Administramos buprenorfina na dose de 0,05 miligramas por quilograma de peso corporal para analgesia pós-operatória adicional.Também administramos cinco mililitros de solução salina por via intraperitoneal para garantir a hidratação durante a fase de recuperação. Após o rato recuperar-se da anestesia, teste a presença de sinais comportamentais de infarto segurando o rato pela cauda e observando se ele consegue virar para ambos os lados neste teste de oscilação corporal elevada, pois é esperado que se enrole apenas para um lado. Ratos que apresentam sintomas de acidente vascular cerebral também podem circular para um único lado durante movimentos em campo aberto.Aqui apresentamos os resultados de 60 minutos de oclusão da artéria cerebral média em ratos espontaneamente hipertensos. A imagem por ressonância magnética foi realizada 24 horas após a OACM, e são mostradas imagens ponderadas em T2. Este rato desenvolveu um grande infarto envolvendo regiões tanto corticais quanto esteroidais.A área hipointensa na RNM é destacada em amarelo, embora não mostremos os resultados aqui. As áreas infartadas visualizadas por RNM podem ser analisadas mais detalhadamente por imagens ponderadas em difusão e mapas do coeficiente aparente de difusão. As regiões infartadas também são confirmadas por coloração histológica de cortes cerebrais recém-isolados com cloreto de trien tetra alium ou desidrogenase TTC, em que os tecidos vivos convertem o substrato em um corante vermelho insolúvel.Assim, as regiões infartadas permanecem não coradas e aparecem brancas. Observe que o tamanho do infarto pode ser afetado por diversos fatores, incluindo a linhagem do rato e o tamanho do animal. Utilizamos ratos espontaneamente hipertensos, pois eles produzem tamanhos de infarto mais consistentes do que outras linhagens comumente usadas, como as de ratos frogg, dolly ou wistar.Também é importante padronizar um peso-alvo para o rato, a fim de reduzir as variações no diâmetro dos vasos e, consequentemente, na eficácia resultante da oclusão da ACM. Esperamos que este vídeo tenha sido útil para você ao realizar a técnica de oclusão da ACM em seu próprio laboratório. Obrigado por assistir e boa sorte em seus experimentos.

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Demonstramos no vídeo um método para produzir uma oclusão da artéria cerebral média em ratos adultos utilizando um monofilamento intraluminal. Também mostramos como avaliar a extensão do infarto cerebral por 2,3,5-trifeniltetrazólio cloreto de coloração (TTC).

Modelo do rato de Oclusão da Artéria Cerebral Média

Este vídeo demonstra o procedimento de realização da oclusão permanente da artéria cerebral média distal, ou MCAO, com a artéria carótida comum, ou ligadura CCA, em ratos idosos para modelar o AVC isquêmico. Isso bloqueia o fluxo sanguíneo para o cérebro, levando à morte neuronal e gerando um modelo para estudar os mecanismos do AVC e possíveis tratamentos.

Induzindo isquemia via oclusão do cérebro médio e da artéria carótida comum em um modelo de rato

Fonte: Larpthaveesarp, A., et. al. Modelo transitório de oclusão da artéria cerebral média de acidente vascular cerebral neonatal em ratos P10. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra o estabelecimento do modelo de oclusão da artéria cerebral média em um filhote de rato. A artéria carótida interna (ACI) é exposta e uma ligadura é fixada para restringir a inundação do sangue. Um ocluído é inserido através da ACI para atingir a Artéria Cerebral Média. O filhote é então autorizado a se recuperar...

Gerando uma oclusão da artéria cerebral média em um filhote de rato para induzir isquemia cerebral local

Nós descrevemos um método altamente reprodutível para a oclusão permanente de um roedor grande vaso sanguíneo cerebral. Esta técnica pode ser realizado com muito pouco dano periférica, a perda de sangue mínima, uma elevada taxa de sobrevivência a longo prazo, e o volume de enfarte consistente comensurável com a população de clínica humana.

Permanente oclusão vascular cerebral<em&gt; Via</em&gt; Dupla ligadura e transecção

Aqui apresentamos um protocolo para produzir oclusão média distal permanente da artéria cerebral em ratos fêmeas idosos com oclusão simultânea das artérias carótidas de gerar grandes infartos corticais e déficits sustentados. Mostramos confirmação do tamanho da lesão utilizando MRI estrutural às 24 h e 8 semanas após o acidente vascular cerebral.

Realizando Permanente Distal Oriente cerebral com carótida comum Oclusão da Artéria em ratos idosos para estudar Cortical Isquemia com Deficiência Sustentada

Descrevemos um modelo de camundongo de AVC induzido pela oclusão da artéria cerebral média usando uma sutura revestida de silicone. O protocolo pode ser aplicado para induzir oclusão permanente ou isquemia temporária, seguida de reperfusão.

Indução de Acidente Vascular Cerebral Isquêmico e isquemia-reperfusão em ratos usando a técnica de oclusão da artéria Oriente e Visualização de infarto Área

Para investigar a fisiopatologia do AVC, é criado um modelo do rato de isquémia-reperfusão cerebral. Nós distalmente ligate da artéria cerebral média direita e artéria carótida comum direita e restaurar o fluxo sanguíneo após 10 ou 40 min de isquemia.

Modelo de Mouse de dois vasos oclusão de isquémia-reperfusão Cerebral

Este protocolo descreve o modelo de isquemia cerebral focal transitória em camundongos através da oclusão intraluminal da artéria cerebral média. Além disso, exemplos de avaliação de resultados são mostrados usando ressonância magnética e testes comportamentais.

Modelo de Oclusão Transitória da Artéria Cerebral Média do Acidente Vascular Encefálico

O protocolo atual descreve um modelo de oclusão/reperfusão da artéria cerebral média em ratos que preserva a estrutura anatômica dos vasos cerebrais sem causar danos.

Um modelo de rato de oclusão/reperfusão da artéria cerebral média sem danificar a estrutura anatômica dos vasos cerebrais

Modelos in vivo de ratos são ferramentas indispensáveis para investigar os mecanismos patológicos e alvos terapêuticos do AVC isquêmico. Este trabalho descreverá a realização de coloração por imunofluorescência em fatias de cérebro infartadas após oclusão da artéria cerebral média (MCAO) em ratos.

Avaliação da sinalização de morte celular por imunofluorescência em um modelo de rato de AVC isquêmico

O objetivo deste estudo foi estabelecer um método reprodutível para realizar uma craniectomia seguida de oclusão permanente e seletiva da artéria cerebral média em ratos, para aplicação em estudos experimentais de déficits de memória motora e espacial.

Oclusão Seletiva e Permanente da Artéria Cerebral Média em Ratos: Uma Abordagem Experimental para Estudar Déficits de Memória Motora e Espacial

Aprenda a induzir isquemia cerebral focal em ratos por oclusão endovascular da artéria cerebral média. Este modelo reproduz infartos corticais e subcorticais para pesquisa em acidente vascular cerebral e testes terapêuticos.

Modelo de isquemia focal cerebral por oclusão Suture Endovascular da artéria cerebral média no Rat

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