Name: Transplante ortotópico de aorta: um modelo de rato para estudar o desenvolvimento de vasculopatia crônica (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-04T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: Aprenda o modelo de transplante ortotópico de aorta em ratos para estudar vasculopatia de transplante. Este método permite investigar a formação de neointima e mecanismos de rejeição crônica.

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Os autores agradecem Christiane Pahrmann por seu trabalho histológico. Financiamento Sonja Schrepfer recebeu uma bolsa de pesquisa do Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992 / 3 1 e SCHR992/4-1).]

Ratos com peso aproximado de 250-300g forem comprados de Charles River (Sandhofer Weg 7, D-97633 Sulzfeld). Transplantes são realizados com ratos PVG como doadores, e ratos ACI como destinatários. Os ratos são alojados em condições convencionais, alimentados padrão ração e água ad libidum. Todos os instrumentos cirúrgicos são esterilizados antes da utilização. Preparação dos doadores: Anestesiar ratos com isoflurano (2,5-3%) utilizando uma câmara de indução. <ol><li> Raspar o cabelo abdominal e torácica e coloque o rato sobre as suas costas e colocar uma máscara sobre seu nariz e boca para manter a anestesia. </li><li> Desinfectar a zona abdominal e torácica amplamente utilizando Iodo-Provo, use próxima de etanol 80%, repita este passo três vezes. </li><li> Verifique reflexos beliscar as patas traseiras para ter a certeza que o rato é suficiente anestesiado. </li><li> Desangrar o rato, abrindo o abdômen e corte um buraco na aorta abdominal. </li><li> Abra cuidadosamente o tórax para encontrar a aorta torácica descendente. </li><li> Dissecar a aorta torácica dos tecidos circundantes, como gordura, nervos e do esôfago. </li><li> Retirar um pedaço 1,5 centímetros da aorta utilizando um couter, sem danos aos tecidos da aorta. </li><li> Perfundir o enxerto aórtico cuidadosamente com salina estéril fria e guardar o enxerto, a 4 ° C. </li></ol> Destinatário: Anestesiar ratos com isoflurano (2,5-3%) utilizando uma câmara de indução. Temperatura corporal é mantida durante o procedimento cirúrgico. <ol><li> Shave área abdominal e aplicar pomada para evitar os olhos de secar durante a anestesia. </li><li> Coloque o rato sobre as suas costas e colocar uma máscara sobre seu nariz e boca para manter a anestesia. </li><li> Desinfetar a área abdominal utilizando Iodo-Provo, use próxima de etanol 80%, repita este passo três vezes. </li><li> Verifique reflexos beliscar as patas traseiras para ter a certeza que o rato é suficiente anestesiado. </li><li> Realizar uma incisão mediana abdominal separando a pele eo músculo em duas etapas para abrir o abdômen. </li><li> Coloque o intestino em uma luva de pó aquecido salina hidratada livre. Dobre a luva ao redor do intestino para evitar a perda de umidade. </li><li> Remover o tecido gorduroso que cobre a aorta abdominal. </li><li> Dissecar a aorta formam a região infra-renal até a bifurcação, cuidado para não causar danos nos ramos dos vasos. </li><li> Se necessário ramos ligadura da aorta. </li><li> Primeiro utilize uma pinça microcirúrgica por parte da aorta infra-renal dissecados para parar o fluxo de sangue. </li><li> Em seguida, coloque uma braçadeira segundo próximo à bifurcação da aorta. </li><li> Agora que o fluxo sanguíneo é interrompido, retire um pequeno segmento da aorta. </li><li> Leve o enxerto da aorta do doador, que foi mantida em 0,9% salina estéril no gelo, encurtá-lo para o comprimento adequado e posicioná-lo na brecha. </li><li> Conectam a aorta do doador para o receptor aorta, realizando sutura prolene 8-0 sutura usando (Ethicon, Norderstedt, Alemanha). Comece com a anastomose término-de-final do crânio. </li><li> Quando a anastomose término-a-ponta distal terminar, abra cuidadosamente a braçadeira distal. </li><li> Quando não há sangramento após a abertura da pinça distal, com cuidado abra o grampo craniana. Em caso de sangramento nas suturas, feche o clamp novamente, localizar o sangramento e parar o sangramento usando um ponto único. </li><li> Deve haver um pulso visível na extremidade distal da aorta. </li><li> Em seguida mova o intestino volta para o abdômen. </li><li> Lave o abdome com solução salina estéril pré-aquecido. </li><li> Feche a camada muscular da parede abdominal com prolene 6-0 sutura (Ethicon, Norderstedt, Alemanha). </li><li> Use 5-0 prolene (Ethicon, Norderstedt, Alemanha), sutura contínua para fechar a pele. </li><li> Enquanto o rato ainda está em anestesia, injetar 4-5mg/kg carprofeno por via subcutânea. </li><li> Para oferecer analgesia suficiente para este tipo de procedimento, metamizol é adicionado à água potável (50 mg por 100 ml metamizol) para dor medicação por 3 dias após o transplante. </li></ol>

<ol><li>Deuse, T., Hoyt, G., Koyanagi, T., Robbins, R. C., Schrepfer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+and+Inhibition+But+Not+Reversion+of+Chronic+Allograft+Vasculopathy+by+FK778%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Prevention and Inhibition But Not Reversion of Chronic Allograft Vasculopathy by FK778.</a> Transplantation. 85, 870-877 (2008).</li>
<li>Mennander, A., Tiisala, S., Halttunen, J., Yilmaz, S., Paavonen, T., Hayry, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+rejection+in+rat+allografts.+An+experimental+model+for+transplant+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Chronic rejection in rat allografts. An experimental model for transplant arteriosclerosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 11, 671-680 (1991).</li>
<li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 57, 225-225 (1969).</li>
<li>Poston, R. S., Billingham, M., Hoyt, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin+reverses+chronic+graft+vascular+disease+in+a+novel+cardiac+allograft+model%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Rapamycin reverses chronic graft vascular disease in a novel cardiac allograft model.</a> Circulation. 100, 67-100 (1999).</li>
<li>Schrepfer, S., Deuse, T., Koch-Nolte, F., Krieger, T., Haddad, M., Schäfer, H., Pelletier, M. P., Robbins, R. C., Reichenspurner, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FK778+in+Experimental+Xenotransplantation%3A+A+Detailed+Analysis+of+Drug+Efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">FK778 in Experimental Xenotransplantation: A Detailed Analysis of Drug Efficacy.</a> J Heart Lung Transplant. 26, 70-77 (2007).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Por várias razões encontramos o modelo de transplante ortotópico aórtica de forma mais precisa para investigar o desenvolvimento de TVP em comparação com o modelo de transplante cardíaco heterotópico: Quanto a técnica cirúrgica, o modelo de transplante aórtica incorpora um método de fácil possível, exigindo apenas o cumprimento de fim-de-final da anastomose, enquanto que o modelo de transplante cardíaco heterotópico pode ser considerado um desafio mais complexo e propenso a erros de habilidades do cirurgião s , e...

<table><tbody><tr><td>Microscópio cirúrgico (ampliação 25x)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aparador</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Provo-Iodina</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soro fisiológico a 0,9% gelado</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soro fisiológico estéril a 0,9% pré-aquecido</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pomada oftálmica</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Luva</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tesoura microcirúrgica</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pinça</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Clipes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sutura 8-0 (prolene)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sutura 6-0 (prolene)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sutura 5-0 (prolene)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Carprofeno</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metamizol</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cotonetes</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

transplante ortotópico de aorta: um modelo de rato para estudar o desenvolvimento de vasculopatia crônica

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Modelos de pesquisa de rejeição crônica são essenciais para investigar processos fisiopatológicos Pathobiological e durante o desenvolvimento da vasculopatia do transplante (TVP). O modelo animal comumente utilizado para estudos cardiovascular rejeição crônica é o modelo de transplante cardíaco heterotópico realizado em roedores de laboratório. Este modelo é amplamente utilizado em experimentos desde Ono e Lindsey (3) publicaram a sua técnica. Para analisar os achados nos vasos sanguíneos, o coração tem que ser seccionado e todos os navios têm de ser medidos. Outro método para investigar a rejeição crônica em questionamentos cardiovascular é o modelo de transplante da aorta (1, 2). No modelo ortotópico aórtica transplante, a aorta pode ser facilmente avaliada histologicamente (2). O modelo de PVG-to-ACI é especialmente útil para CAV estudos, pois a rejeição vascular aguda não é um fator importante de confusão e tratamento Ciclosporina A (CsA) não impede o desenvolvimento do CAV, similar ao que encontramos no contexto clínico (4 ). A7-dia período de CsA é necessária neste modelo para evitar a rejeição aguda e para alcançar sobrevivência a longo prazo com o desenvolvimento de TVP. Este modelo também pode ser usado para investigar rejeição celular aguda e necrose media em modelos xenogénicos (5).

Este vídeo demonstra o modelo de transplante ortotópico aórtica como um modelo simples para estudar o desenvolvimento de vasculopatia do transplante (TVP) em ratos.

Transplante ortotópico de aorta: um modelo de rato para estudar o desenvolvimento de vasculopatia crônica

Modelos de pesquisa de rejeição crônica são essenciais para investigar processos patobiológicos e fisiopatológicos durante o desenvolvimento do transplante...

O objetivo geral deste procedimento é estabelecer um modelo preciso e um método facilmente viável para investigar o desenvolvimento da vasculopatia de enxerto. Isso é realizado utilizando a combinação de linhagem PVG para CI. O segundo passo do procedimento é a coleta da aorta doador.O terceiro passo do procedimento é preparar o receptor. O passo final do procedimento é anastomosar a aorta do doador com a aorta do receptor. Em última análise, podem-se obter resultados que demonstram a formação de neointima utilizando histopatologia.Olá, sou Sonya Schwefel, professora de imunologia de transplantes no Laboratório do Olho TS no Centro Cardíaco Universitário em Hamburgo, Alemanha. E eu sou Manish Duboff. Também do Laboratório do Olho TS.O meu laboratório tem interesse em imunologia de transplantes. Neste vídeo, apresentaremos a você o modelo de transplante aórtico ortotópico, um modelo simples e válido para estudar o desenvolvimento da vasculopatia do enxerto em camundongos. Utilizamos este procedimento em nosso laboratório para investigar a rejeição crônica em questões cardiovasculares.No modelo de transplante aórtico ortotópico, a aorta pode ser facilmente avaliada histologicamente. Além disso, o modelo de PVG para CI é especialmente útil para estudos de vasculopatia de transplante. Uma vez que a rejeição vascular aguda não é um fator de confusão importante e o desenvolvimento da vasculopatia é semelhante aos achados clínicos.Então vamos começar. O doador utilizado neste transplante aórtico ortotópico é uma rata PVG pesando aproximadamente 250 a 300 gramas. Após a anestesia do animal, retire os pelos do abdômen e do tórax.Coloque a rata de costas e posicione uma máscara facial sobre seu nariz e boca. Para manter a anestesia, desinfete amplamente a área abdominal e torácica utilizando iodo de Provo, seguido por etanol a 80%. Em seguida, verifique os reflexos do animal pinçando suas patas traseiras.Para confirmar que está suficientemente anestesiado. Exsanguine o rato abrindo o abdômen e fazendo um orifício na aorta abdominal. Abra cuidadosamente o tórax para localizar a aorta torácica descendente.Disseque a aorta torácica dos tecidos circundantes, como gordura, nervos e esôfago. Retire um segmento de 1,5 centímetro da aorta utilizando acuta sem causar danos teciduais à aorta. Perfundir o enxerto aórtico abundantemente com solução salina fria e armazenar o enxerto a quatro graus Celsius.O receptor para este transplante aórtico ortotópico é um rato A CI com peso aproximado de 250 a 300 gramas. Para iniciar este procedimento, depile a região abdominal do rato anestesiado e aplique pomada ocular para prevenir o ressecamento dos olhos durante a anestesia. Posicione o rato em decúbito dorsal e coloque uma máscara facial sobre o nariz e a boca para manter a anestesia.Em seguida, desinfete a área abdominal utilizando iodo provo, seguido por etanol a 80%. Após pinçar as patas traseiras para confirmar que o rato está suficientemente anestesiado, abra a cavidade abdominal realizando uma incisão mediana na região abdominal e separando a pele e o músculo. Duas etapas.Uma vez que o abdome esteja aberto, coloque os intestinos na luva com solução salina. Dobre a luva ao redor dos intestinos para evitar perda de umidade. Remova o tecido adiposo que recobre a aorta abdominal.Disseque a aorta da região infrarrenal até a bifurcação, tendo cuidado para não danificar os ramos dos vasos. Se necessário, ligue os ramos da aorta após a dissecação da aorta. Primeiro, use uma pinça microcirúrgica na parte infrarrenal da aorta para interromper o fluxo sanguíneo.A seguir, posicione um segundo grampo próximo à bifurcação da aorta. Agora que o fluxo sanguíneo foi interrompido, remova um segmento curto da aorta. Em seguida, pegue o enxerto aórtico doador que foi mantido em solução salina a 0,9% sob gelo.Encurte-o até o comprimento apropriado e posicione-o na lacuna na aorta. Conecte a aorta do doador à aorta do receptor realizando suturas contínuas de prolene oito zero, começando pela anastomose ponta a ponta na extremidade cranial. Quando a anastomose ponta a ponta na extremidade distal for concluída, abra cuidadosamente o clamp distal.Em seguida, abra cuidadosamente o prendedor craniano. Deve-se observar um pulso visível na extremidade distal da aorta. Agora, reposicione os intestinos dentro da cavidade abdominal e lave a cavidade abdominal com solução salina estéril pré-aquecida.Fechamento da camada muscular da parede abdominal com suturas contínuas de polipropileno 6-0. Em seguida, utilize suturas contínuas de polipropileno 5-0 para fechar a pele enquanto o rato ainda estiver sob anestesia. Injetar quatro a cinco miligramas por quilograma de carprofeno por via subcutânea.Retorne o animal à sua gaiola. Adicione metimazol à água de beber como medicação para dor durante três dias. Após o transplante.Os resultados de histopatologia após 120 dias serão demonstrados em nosso microscópio de histologia. As imagens mostrarão claramente o desenvolvimento da vasculopatia do transplante. O estreitamento luminal desenvolvido será destacado por meio de animação computadorizada.Acabamos de mostrar como realizar um transplante aórtico alogênico em ratos. Também demonstramos o desenvolvimento bem-sucedido de vasculopatia do transplante após 120 dias utilizando histopatologia. Este método permite a investigação dos efeitos iniciais de fármacos sobre a vasculopatia crônica do enxerto.

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Medicina

Descrevemos uma técnica em que uma secção da aorta abdominal de um rato é transplantado ortotopicamente para um pouco abaixo das artérias renais de um receptor alogénico ou singeneicos. Esta técnica pode ser útil em estudos em que o transplante de grandes artérias de tamanho uniforme é considerada vantajosa.

Transplante ortotópico de aorta em camundongos para o Estudo da Doença Vascular

Descrevemos um protocolo para enxerto de interposição aórtica em camundongos. O objetivo do protocolo é fornecer um modelo para estudar processos patológicos e estratégias terapêuticas relevantes para reações aloimunes nas artérias e as alterações arteriais resultantes que contribuem para a falha do transplante de órgãos.

Modelo rato de rejeição vascular induzida por Aloimune e Transplante Arteriosclerose

Inserção de cateter de poliuretano para o lúmen aórtico e ligadura da sutura da aorta induz hipóxia crônica devido a hipoperfusão da adventícia vasa vasorum. Este artigo descreve um novo modelo animal de aneurisma da aorta abdominal (AAA) com características semelhantes da AAA em seres humanos.

Criação de um modelo de roedor de aneurisma da Aorta Abdominal, bloqueando adventícia Vasa Vasorum perfusão

Aqui, apresentamos um protocolo de transplante heterotópico da aorta em camundongos usando a técnica de manguito não sutura em um modelo de urina cervical. Este modelo pode ser usado para estudar a patologia subjacente da vasculopatia aloenxerto crônica (CAV) e pode ajudar a avaliar novos agentes terapêuticos, a fim de evitar a sua formação.

Murine Modelo de Transplante de Aorta Cervical usando uma técnica de manguito não sutura modificada

Descrevemos um modelo de transplante de coração abdominal heterotópico em ratos, implicando modificações nas estratégias atuais, que levam a uma abordagem cirúrgica simplificada. Além disso, descrevemos um novo modelo de rejeição pela injeção in-ear de células musculares cardíacas vitais, permitindo novas análises imunológicas de transplante em ratos.

Um modelo imunológico para transplante heterotópico de células cardíacas e cardíacas em ratos

Este artigo apresenta um protocolo de transplante de retalho osteomyocutâneo heterotópico em ratos e seus resultados potenciais no acompanhamento a médio prazo.

Modelo de transplante de hindlimb heterotópico parcial em ratos

Este protocolo descreve um método simples e eficiente para o transplante de folhetos de válvulas aórticas sob a cápsula renal para permitir o estudo da aoreatividade das válvulas cardíacas.

Um modelo simplificado para transplante de válvula cardíaca heterotópica em roedores

Demonstramos como estabelecer um modelo murino de implantação de raízes pulmonares na aorta descendente para simular o procedimento ross. Este modelo permite a avaliação a médio/longo prazo da remodelação do autoenxerto pulmonar em posição sistêmica, representando a base do desenvolvimento de estratégias terapêuticas para promover sua adaptação.

Um modelo de roedor da operação Ross: Implantação de enxerto de artéria pulmonar sinténica em posição sistêmica

O modelo de transplante renal ortotópico de rato contribui para investigar o mecanismo de rejeição de aoenxerto renal. O modelo atual aumenta a sobrevivência dos receptores sem interferência com o suprimento de sangue e refluxo venoso da parte inferior do corpo usando uma anastomose de ponta a ponta da implantação renal e um método de "túnel" de ponta a ponta de anastomose ureter-bexiga.

Um modelo de transplante renal ortotópico de rato para rejeição de aoenerxerto renal

Este estudo demonstra uma técnica reprodutível de transplante cardíaco abdominal heterotópico em ratos que iniciantes podem aprender e executar. Além disso, um novo modelo de regurgitação aórtica em ratos é gerado pela realização de transplante cardíaco abdominal heterotópico e lesão da valva aórtica do doador usando fio-guia após a coleta.

Transplante Cardíaco Heterotópico Abdominal Modificado e um Novo Modelo de Regurgitação Aórtica em Ratos

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Modelo de Transplante Cardíaco Heterotópico Neonatal em Rato para Estudo da Transição Endotelial-Mesenquimal

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