Transplante ortotópico de aorta: um modelo de rato para estudar o desenvolvimento de vasculopatia crônica

O objetivo geral deste procedimento é estabelecer um modelo preciso e um método facilmente viável para investigar o desenvolvimento da vasculopatia de enxerto. Isso é realizado utilizando a combinação de linhagem PVG para CI. O segundo passo do procedimento é a coleta da aorta doador.

O terceiro passo do procedimento é preparar o receptor. O passo final do procedimento é anastomosar a aorta do doador com a aorta do receptor. Em última análise, podem-se obter resultados que demonstram a formação de neointima utilizando histopatologia.

Olá, sou Sonya Schwefel, professora de imunologia de transplantes no TS Eye Lab do Centro Cardíaco Universitário em Hamburgo, Alemanha. E eu sou Manish Duboff, também do TS Eye Lab.

O meu laboratório tem interesse em imunologia de transplantes. Neste vídeo, apresentaremos a você o modelo de transplante aórtico ortotópico, um modelo simples e válido para estudar o desenvolvimento da vasculopatia do enxerto em camundongos. Utilizamos este procedimento em nosso laboratório para investigar a rejeição crônica em questões cardiovasculares.

No modelo de transplante aórtico ortotópico, a aorta pode ser facilmente avaliada histologicamente. Além disso, o modelo de PVG para CI é especialmente útil para estudos de vasculopatia de transplante. Uma vez que a rejeição vascular aguda não é um fator de confusão importante e o desenvolvimento da vasculopatia é semelhante aos achados clínicos.

Então vamos começar. O doador utilizado neste transplante aórtico ortotópico é um rato PVG com peso aproximado de 250 a 300 gramas. Após anestesiar o animal, retire os pelos do abdômen e do tórax.

Coloque a rata em decúbito dorsal e posicione uma máscara facial sobre o nariz e a boca. Para manter a anestesia, desinfete amplamente a região abdominal e torácica utilizando iodo de Provídio, seguido por etanol a 80%. Em seguida, verifique os reflexos do animal pinçando suas patas traseiras.

Para confirmar que está suficientemente anestetizado. Exsanguine o rato abrindo o abdômen e fazendo um orifício na aorta abdominal. Abra cuidadosamente o tórax para localizar a aorta torácica descendente.

Disseque a aorta torácica dos tecidos circundantes, como gordura, nervos e esôfago. Retire um segmento de 1,5 centímetro da aorta utilizando acuta sem causar danos teciduais à aorta. Perfunda o enxerto aórtico abundantemente com solução salina fria e armazene o enxerto a 4 graus Celsius.

O receptor para este transplante aórtico ortotópico é um rato A CI com peso aproximado de 250 a 300 gramas. Para iniciar este procedimento, depile a região abdominal do rato anestesiado e aplique pomada oftálmica para prevenir o ressecamento dos olhos durante a anestesia. Posicione o rato em decúbito dorsal e coloque uma máscara facial sobre o nariz e a boca para manter a anestesia.

Em seguida, desinfete a área abdominal utilizando iodo provo, seguido por etanol 80%. Após pinçar as patas traseiras para confirmar que o rato está suficientemente anestesiado, abra o abdômen realizando uma incisão abdominal mediana e separando a pele e o músculo. Duas etapas.

Uma vez que o abdômen esteja aberto, coloque os intestinos na luva umedecida com solução salina. Dobre a luva ao redor dos intestinos para evitar a perda de umidade. Remova o tecido adiposo que recobre a aorta abdominal.

Disseque a aorta da região infrarrenal até a bifurcação, tomando cuidado para não causar danos aos ramos dos vasos. Se necessário, ligue os ramos da aorta após dissecar a aorta. Primeiro, use um clamp microcirúrgico na parte infrarrenal da aorta para interromper o fluxo sanguíneo.

A seguir, posicione um segundo grampo próximo à bifurcação da aorta. Agora que o fluxo sanguíneo foi interrompido, remova um segmento curto da aorta. Em seguida, pegue o enxerto aórtico doador que foi mantido em solução salina a 0,9% sob gelo.

Encurte-o até o comprimento apropriado e posicione-o na lacuna na aorta. Conecte a aorta do doador à aorta do receptor realizando suturas contínuas de prolene oito zero, começando pela anastomose término-terminal cranial. Quando a anastomose término-terminal distal for concluída, abra cuidadosamente o clamp distal.

Em seguida, abra cuidadosamente o prendedor craniano. Deve ser visível um pulso na extremidade distal da aorta. Agora, reposicione os intestinos dentro da cavidade abdominal e lave a cavidade abdominal com solução salina estéril pré-aquecida.

Fechamento da camada muscular da parede abdominal com suturas contínuas de polipropileno 6-0. Em seguida, utilize suturas contínuas de polipropileno 5-0 para fechar a pele enquanto o rato ainda estiver sob anestesia. Injete de quatro a cinco miligramas por quilograma de carprofeno por via subcutânea.

Retorne o animal à sua gaiola. Adicione metimazol à água de beber como medicação para dor durante três dias. Pós-transplante.

Os resultados de histopatologia após 120 dias serão demonstrados em nosso microscópio de histologia. As imagens mostrarão claramente o desenvolvimento da vasculopatia do transplante. O estreitamento luminal desenvolvido será destacado por meio de animação computadorizada.

Acabamos de mostrar como realizar um transplante aórtico alogênico em ratos. Também demonstramos o desenvolvimento bem-sucedido de vasculopatia do transplante após 120 dias utilizando histopatologia. Este método permite a investigação dos efeitos iniciais de fármacos sobre a vasculopatia crônica do enxerto.