Injeção ortotópica na almofada de gordura mamária: estabelecendo câncer de mama em camundongos

Primeiro, estabeleça a linhagem celular de câncer de mama desejada em cultura. No dia anterior à operação, raspe o abdômen do camundongo e use creme depilatório para remover o pelo e expor os mamilos inguinais. No dia da operação, colete as células, anestesie o camundongo e confirme a falta de resposta ao beliscão do dedo do pé. Usando uma pinça, aperte a pele ao redor do mamilo para criar um túnel elevado.

Em seguida, com a seringa de células coletadas, perfure a pele. A agulha deve seguir o túnel até que a ponta se aproxime do mamilo. Mova suavemente a ponta da agulha para dentro da almofada de gordura mamária, logo abaixo do mamilo. Remova a pinça para formar uma tenda de pele com a agulha e, em seguida, injete lentamente as células.

Por fim, retraia a seringa, tomando cuidado para não perturbar a protuberância redonda ao redor do mamilo. As células injetadas e os tumores subsequentes expressam luciferase e podem ser rastreados usando imagens bioluminescentes. No protocolo de exemplo, mostraremos o estabelecimento do câncer de mama ortotópico murino. No dia anterior à operação, prenda manualmente o camundongo receptor e vire o lado da barriga do animal para cima até o pelo a ser raspado ao redor do quarto mamilo.

Limpe o pelo com uma fina camada de creme depilatório. Usou água destilada para remover o creme após 30 a 60 segundos. E seque o mouse com toalhas de papel macias. No dia da operação, dilua a suspensão de células de câncer de mama murino para uma concentração de 2 x 10 elevado a 5 células por mililitro de PBS em um tubo de microcentrífuga estéril em gelo.

Antes de cada injeção, carregue uma seringa de um mililitro equipada com uma agulha .45 por 16, com 50 microlitros de células por camundongo. E confirme a falta de resposta ao beliscão do dedo do pé em cada animal sedado. Aplique pomada nos olhos do animal e use uma pinça para cobrir a pele ao redor do quarto mamilo do primeiro camundongo para criar um túnel para a seringa seguir.

Segure a seringa com o chanfro voltado para cima e entre subcutaneamente na pele a cinco a 10 mililitros do mamilo, seguindo o túnel até que a ponta da agulha quase atinja o mamilo. - Usar uma pinça para cobrir a pele ao redor do primeiro mamilo cria um túnel para a seringa seguir. A agulha deve ser inserida entre as pontas da pinça e deve subir, em vez de pressionar o tecido. Mova cuidadosamente a ponta da agulha para dentro da almofada de gordura mamária até que o chanfro esteja sob o mamilo.

E solte a tenda da pele para permitir uma injeção lenta das células cancerígenas. - Após a inserção, mova cuidadosamente a ponta da agulha para dentro da almofada de gordura mamária até que o chanfro esteja sob o mamilo e sinta resistência para garantir a entrega das células no local correto. Quando todas as células tiverem sido injetadas, vire a agulha ligeiramente para o lado e retraia a seringa lentamente. Use um cotonete para aplicar pressão no enrolamento da agulha por 10 a 20 segundos, para garantir que não haja infiltração de fluido.

O mamilo injetado deve aparecer como uma esfera plana branca transparente, com o mamilo no centro