drosófila Ensaio de escavação e tunelamento: um método para avaliar a hipóxia tecidual em larvas de moscas

- Para montar a gaiola de coleta de embriões, use placas de ágar suco de uva suplementadas com pasta de fermento fresco e coloque as placas em gaiolas contendo moscas Drosophila machos e fêmeas do genótipo apropriado. O odor do fermento e do suco de uva é atraente e promove a postura de ovos pelas fêmeas. Permitir a postura dos ovos por um período cronometrado. Em seguida, remova os adultos e incube as placas embrionárias por 24 horas para obter as larvas de primeiro ínstar. Em seguida, transfira suavemente algumas larvas individuais do prato de suco de uva para uma placa de teste somente de ágar, onde um orifício no ágar no centro do prato foi cortado e preenchido com pasta de fermento.

As larvas jovens devem se alimentar para ganhar peso corporal para se desenvolver, então elas se enterram na fonte de alimento, a pasta de fermento. À medida que se desenvolvem, as larvas entram em uma fase errante e se afastam do alimento para procurar um local para a pupação. Para avaliar a hipóxia, examine os padrões de tunelamento que as larvas formam no substrato. A falta ou insuficiência de tunelamento é um sinal de privação de oxigênio. No protocolo de exemplo, veremos como configurar o ensa