0 visualizações • 5:15 min. • April 30th, 2023
- Para começar, coloque um peixe anestesiado com o lado ventral para cima em uma fenda em uma esponja molhada. Insira o eletrodo positivo na linha média do peixe ao nível da arteriose bulbosa. Em seguida, insira o eletrodo negativo abaixo do ventrículo e 0,5 a 1 milímetro à esquerda da linha média para criar um eletrodo bipolar através do qual as diferenças no potencial elétrico podem ser medidas. Por fim, insira o eletrodo de referência próximo à região anal para aterrar o sinal elétrico.
Comece a gravar e, após um curto período, revise o rastreamento para garantir que quatro critérios sejam atendidos. Todas as formas de onda devem ser visíveis e distintas umas das outras. A onda P, que representa a despolarização atrial, deve ser positiva. A soma líquida das ondas Q, R e S, que representa a despolarização ventricular, deve ser positiva. E, finalmente, a onda T, que representa a repolarização atrial, deve ser positiva. Se os critérios não forem atendidos, ajuste os eletrodos até que um traço adequado seja registrado.
Após a gravação, acorde o peixe submergindo-o em água oxigenada e esguichando água sobre as guelras até que as guelras ou os peixes comecem a se mover regularmente. No exemplo, realizaremos eletrocardiografia de superfície em um peixe-zebra adulto.
- No dia do experimento, transporte o peixe-zebra do aquário para o laboratório. Para configurar o sistema de gravação de ECG in vivo, conecte as peças essenciais do equipamento e insira os três eletrodos de aço inoxidável codificados por cores do eletrodo de ECG nos três portais de acesso de cores correspondentes do amplificador. Para indução de anestesia de nível 4, mergulhe um peixe-zebra adulto em um prato contendo uma solução de anestésicos nas concentrações mais baixas predeterminadas aprovadas pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais.
Uma vez que o peixe-zebra tenha mantido o nível para anestesia por três segundos, use um par de pinças rombas para transferir imediatamente o peixe para uma esponja úmida com uma superfície ventral cortada para a colocação dos três eletrodos de ECG. Insira suavemente o eletrodo positivo na linha média ventral no nível da arteriose bulbosa 1 a 2 milímetros acima de uma linha imaginária que conecta as duas bordas inferiores dos opérculos.
Posicione o eletrodo negativo caudalmente e 0,5 a 1 milímetro à esquerda lateralmente ao eletrodo positivo a uma distância maior que o comprimento apical-basal máximo do ventrículo do peixe-zebra adulto. Em seguida, posicione o eletrodo de referência caudalmente próximo à região anal. Para gravação de ECG, inicie o sistema e abra o programa de aquisição de dados de ECG. Selecione a configuração desejada nos menus suspensos para alcance, passa-baixa e passa-alta.
Pressione Iniciar para iniciar o registro contínuo de ECG sem lacunas a uma taxa de amostragem de 1 kilohertz. Para otimizar o posicionamento do eletrodo para a relação sinal-ruído máxima, pressione parar para interromper a gravação e review o traço logo após a primeira tentativa de gravação para cada coração. Se o ECG for normal, confirme se todas as formas de onda de ECG são distintas e prontamente visíveis e se a onda P, o complexo QRS líquido e a onda T são todos positivos.
- A etapa mais crítica é o posicionamento do eletrodo para maximizar a relação sinal-ruído. Aplique todos os quatro critérios de validação após a primeira tentativa de gravação de ECG para cada peixe para obter o feedback correto.
- Se um ECG normal for esperado, reposicione os eletrodos conforme necessário até que todos esses quatro critérios de validação sejam satisfeitos. Se uma onda T normal for esperada, mas a onda T for muito pequena, reposicione os eletrodos para maximizar a amplitude da onda T. Retome a gravação do ECG após otimizar o posicionamento do eletrodo, salvando as varreduras de ECG para análise subsequente.
No final da sessão de gravação de ECG, remova cuidadosamente os eletrodos sem ferir o peixe. Em estudos de sobrevivência, transfira o peixe para água fresca e oxigenada livre de tricaína. Observe que neste vídeo para facilitar a visualização dos leitores da recuperação dos peixes da anestesia, a oxigenação é descontinuada.
Para facilitar a recuperação da anestesia em estudos de sobrevivência, use uma pipeta de Pasteur para esguichar vigorosamente água sobre as brânquias até que o peixe retome o movimento regular das guelras ou a natação. Em seguida, monitore o peixe para recuperação total da anestesia antes de devolvê-lo ao aquário. O peixe é considerado totalmente recuperado da anestesia quando consegue nadar ereto por pelo menos 5 segundos.