Encyclopedia of Experiments: Biology
É necessário ter uma assinatura JoVE para assistir este Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- לניתוח זה, השתמש בשני micropipettes: אחד עם פתח בערך באותו רוחב כמו ביצה ואחד כי הוא כפליים רחב, וסדרה של פתרונות מאורגנים בארות כדי להקל על העברה מהירה ביניהם.
ראשית, הנח הרמפרודיטים בוגרים לתמיסת מלח ביצים, המאוזנת באופן אוסמוטי כדי למנוע מתפוצצות עוברים.
לאחר מכן, לזהות עוברים שלב שני תאים. תאים אלה הם בלסטומרים שנוצרו על ידי חלוקת הביצית המופרית.
לאחר 40 עד 55 שניות בלבד, העבירו את העובר למדיום הגדילה של שלטון, או SGM. שטפו כל עובר לזמן קצר בשתי בארות SGM כדי להסיר את כל עקבות האקונומיקה לפני שהניחו אותם בבאר שלישית.
עכשיו, להשתמש micropipette קטן יותר כדי שוב ושוב פיפטה העובר מתן הכוח המכאני כדי להסיר את קליפת הביצה ולחשוף את blastomeres. בעדינות להמשיך פיפטה העובר כדי להפריד את תאי blastomere בודדים. בפרוטוקול הבא, נראה טכניקה זו בפעולה.
- החזק כל קצה של microcapillary בקיבולת של 10 microliters עם יד ימין ושמאל. משוך את microcapillary לכיוון שני הקצוות כדי להחיל מתח ולהביא את מרכז נימי מעל מבער לעשות שני נימים משכו ביד.
תחת מיקרוסקופ הניתוח, לקצץ את קצות הנימים משכו ביד עם מלקחיים.
חבר את נימי משך לתוך מנגנון צינור הפה. פיפט 45 microliters של תמיסת מלח ביצה על באר של שקופית רב היטב.
מניחים 5 עד 10 בוגרים C. elegans על הבאר. כדי לקבל מוקדם C. עוברי אלגנס, לחתוך מבוגרים לחתיכות על ידי הצבת שני מחטים מימין ומשמאל של ג ' אלגנס הגוף מחליק את המחטים אחד על פני השני.
פיפטה 45 מיקרוליטרים של פתרון היפוכלוריט על באר ליד הפתרון המכיל היטב מלח ביצה, ופיפט 45 מיקרוליטרים של מדיום הצמיחה של שלטון על הבא שלוש בארות.
לשטוף את העוברים על ידי העברת אותם לתוך שלוש הבארות עם מדיום הצמיחה של שלטון עם 1 עד 2 שניות בכל אחת משתי הבארות הראשונות.
לאחר מכן, פיפטה רציפה עם נימי מצויר ביד כדי להפריד את בלסטומרים עובריים שלב שני תאים.
- לאחר הסרת קליפת הביצה, למזער את הכוח בצנרת עוברים למעלה ולמטה כדי למנוע פרץ.
