C. elegans Dissecção de blastômeros: um método para remover a casca do ovo e dissociar células embrionárias

- Para esta dissecção, use duas micropipetas: uma com uma abertura aproximadamente da mesma largura de um ovo e outra com o dobro da largura, e uma série de soluções organizadas em poços para facilitar a transferência rápida entre elas.

Primeiro, coloque hermafroditas adultos em solução de sal de ovo, que é osmoticamente equilibrada para evitar que os embriões estourem. Corte os vermes ao meio para liberar os embriões em desenvolvimento.

Em seguida, identifique embriões em estágio de duas células. Essas células são os blastômeros formados pela divisão do óvulo fertilizado. Use a micropipeta com a abertura maior para transferir um embrião para uma solução de hipoclorito, alvejante, que começará a quebrar a casca protetora do ovo.

Após apenas 40 a 55 segundos, transfira o embrião para o meio de crescimento de Shelton, ou SGM. Lave cada embrião brevemente em dois poços de SGM para remover todos os vestígios do alvejante antes de colocá-los em um terceiro poço.

Agora, use a micropipeta menor para pipetar repetidamente o embrião, fornecendo a força mecânica para remover a casca do ovo e expor os blastômeros. Continue a pipetar suavemente o embrião para separar as células individuais dos