JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologia
0 vistas • 2:54 min • April 30th, 2023
- Para começar, transfira suavemente alguns embriões para uma placa de Petri contendo meio embrionário. Agora segure o córion com uma pinça e rasgue nele com outra pinça.
Em seguida, empurre suavemente o embrião através da lágrima. A remoção do córion do embrião acelera seu crescimento e movimento. Para se livrar dos detritos, transfira os embriões para outra placa de Petri contendo meio embrionário usando uma pipeta Pasteur.
Coloque a placa de Petri em uma incubadora e deixe os embriões crescerem a 28 graus Celsius. Defina uma platina de microscópio iluminada cheia de água para 28 graus Celsius antes do experimento para evitar quaisquer desvios relacionados à temperatura no comportamento larval.
Coloque a placa de Petri no palco e monte na câmera acima da placa. Em seguida, centralize o embrião no campo de visão da câmera. Agora toque suavemente o embrião com uma agulha cega e registre a resposta larval no software de gravação da câmera de vídeo.
Após o estímulo, o embrião exibe uma poderosa resposta de fuga - um mergulho explosivo junto com curvas fechadas. Meça o tempo entre o toque e o pico de aceleração das larvas durante sua fuga.
No protocolo de exemplo, observaremos a resposta das larvas do peixe-zebra a estímulos externos.
- Para realizar o ensaio, coloque uma placa de Petri cheia de aproximadamente 25 mililitros de meio embrionário em um estágio iluminado com temperatura controlada ajustado para aproximadamente 28 graus Celsius. Monte a câmera de alta velocidade acima do prato. Inicie o software de gravação de vídeo e defina a velocidade de captura para 1.000 quadros por segundo para garantir que velocidades rápidas de natação possam ser capturadas.
Posicione o embrião no centro da placa de Petri, claramente visível no campo de visão. Pressione o botão de gravação e, em seguida, forneça um estímulo mecanossensorial tocando suavemente o embrião com uma agulha romba no topo da cabeça.
Pare a gravação assim que o embrião nadar para fora do campo de visão ou voltar ao repouso.
- Testes repetidos das mesmas larvas podem levar à habituação ou promover fraqueza muscular em alguns modelos de doenças, resultando em resposta reduzida ao estímulo tátil. Portanto, cada embrião deve ser testado apenas uma vez.