Ensaio de resposta optocinética: um método para medir a acuidade visual em peixe-zebra

- Prenda um peixe anestesiado em uma plataforma com seus olhos e guelras estendendo-se além da borda da plataforma. Posicione o peixe na vertical em um cilindro cheio de água dentro de um tambor bem iluminado que possa girar livremente. Assim que o peixe reviver, indicado pelo movimento das guelras e dos olhos, coloque uma grade ou padrão de listras verticais brancas e pretas alternadas no tambor. Agora coloque um oclusor preto sólido sobre as listras na visão do olho esquerdo.

Comece a rotação e registre a resposta optocinética, OKR, para o olho direito. O OKR consiste em movimentos oculares reflexivos em resposta a um estímulo visual. Substitua o padrão por listras pretas e brancas cada vez menores até que o movimento dos olhos não seja mais observado. Execute o mesmo procedimento para o olho esquerdo.

Para calcular a acuidade visual monocular, a capacidade de distinguir detalhes finos, medir a distância do centro da lente do olho até o padrão e o comprimento do menor padrão de um par de listras brancas e pretas em que o movimento dos olhos foi observado. No protocolo de exemplo, usaremos a resposta optocinética para medir a acuidade visual monocular e binocular em peixes-zebra adultos.

- Os estudos optocinéticos são realizados com um dispositivo de gravação personalizado usando um tambor rotativo de 14,5 centímetros de diâmetro, um microscópio estéreo com configurações ajustáveis de intensidade de luz, um computador e uma câmera para capturar imagens e gravar. Um microcontrolador operado por computador é usado para ajustar a velocidade do tambor rotativo e as direções de rotação. Usando peixes mantidos em condições padrão, inicie uma análise anestesiando um peixe em tricaína a 0,016% por dois a três minutos e, em seguida, colocando-o em uma pequena plataforma com os olhos e guelras suspensos sobre a borda.

Para manter o peixe imobilizado e evitar ferimentos, coloque uma esponja ou toalha fina sobre o corpo do peixe e prenda dois a três pedaços de espuma sobre o peixe, garantindo que o movimento da cauda seja limitado. Posicione o peixe dentro de um tanque cilíndrico cheio de água que se encaixa dentro do tambor giratório do dispositivo de gravação OKR. Use ímãs na plataforma para posicionar o peixe na posição vertical com os olhos a aproximadamente 7,3 centímetros da borda do tambor.

Assim que o peixe reviver da anestesia e a respiração normal e os movimentos oculares aleatórios forem observados, coloque uma grade de base de 0,07 ciclos por grau, ou CPD, no tambor rotativo e acione os controles do computador para iniciar a rotação e a captura de vídeo. Depois que um OKR inicial for eliciado pela grade base, pause a rotação brevemente e substitua a grade por uma grade menor com uma frequência espacial mais alta. Repita esse processo com grades sequencialmente menores até que um OKR não possa mais ser obtido. Para verificar a perda de OKR, seguindo uma abordagem de escada modificada, teste novamente com a menor grade que causou um OKR e, em seguida, com a grade que não conseguiu obter uma resposta para verificar a perda do OKR.

Para obter medições de acuidade monocular, coloque um oclusor de plástico preto sobre as listras adjacentes ao olho oposto e repita o processo de coleta de dados. Em seguida, mude para o outro olho reposicionando o oclusor e fazendo medições. Use a tira de medição de referência abaixo do aquário para anotar a distância de cada olho da tira para fazer medições precisas de acuidade.

Para determinar a acuidade visual, calcule o CPD usando a seguinte fórmula, onde a é a distância do centro da lente até a grade e h é a duração de um ciclo da menor grade em que o OKR foi observado. Para medições combinadas de acuidade visual, use uma média de um valor calculado a partir do olho esquerdo e direito.