Ablação hepática direcionada: induzindo a morte de hepatócitos com metronidazol em larvas de peixe-zebra transgênico

- Dissolva o metronidazol em água de ovo contendo DMSO, um solvente, e adicione feniltioureia, que evita a formação de pigmentos nos embriões. Transfira algumas larvas da idade apropriada para placas de tratamento e controle. Em seguida, adicione a concentração desejada da solução de metronidazol à placa de teste e água de ovo contendo DMSO à placa de controle.

Deixe as larvas em ambas as placas crescerem a 28 graus Celsius. As larvas transgênicas produzem nitroredutase apenas nos hepatócitos, que converte o metronidazol em uma droga citotóxica, resultando na morte apenas dos hepatócitos alvo. Após o tratamento, remova a solução de metronidazol da placa de tratamento e lave os embriões com água de ovo.

Adicione tricaína para anestesiar as larvas e examine-as em um microscópio de epifluorescência para ablação grave de hepatócitos - a destruição das células do fígado. Você observará um fígado muito menor em indivíduos tratados do que em indivíduos do grupo controle. No protocolo de exemplo, usaremos metronidazol para ablação de hepatócitos em larvas de peixe-zebra transgênicas para estudar a regeneração hepática.

- Transfira até 100 embriões para uma placa de Petri de 100 milímetros