Injeção de morfolino: um método para derrubar a expressão gênica alvo para estudar a função em peixe-zebra

- Uma abordagem para determinar a função de um gene é derrubar sua expressão e observar o efeito. Os oligômeros morfolinos são frequentemente usados em estudos knock-down em peixes-zebra. Um morfolino é uma molécula sintética semelhante ao DNA com cerca de 25 bases de comprimento, que inibe a expressão do gene alvo.

Para o tratamento com morfolino, coloque um peixe anestesiado com barbatana caudal parcialmente amputada em uma placa de injeção e posicione a placa sob um microscópio estéreo. Injete apenas o lado dorsal enquanto o lado ventral não injetado atua como controle. Os morfolinos podem funcionar de duas maneiras, dependendo da sequência que visam. Primeiro, eles se combinam com o local de início da tradução em um mRNA e impedem a síntese de proteínas bloqueando a tradução.

Em segundo lugar, ele pode se ligar à junção íntron-exon em um pré-mRNA e impedir o splicing adequado, resultando em um transcrito defeituoso que será degradado pela célula. Mais tarde, examine as barbatanas caudais em busca de crescimento. As diferenças entre o crescimento das regiões tratadas com morfolino e não tratadas indicam que a proteína-alvo desempenha um papel na regeneração da nadadeira. Neste p