Extração de DNA do clipe da cauda: um método usado na genotipagem do peixe-zebra

0 visualizações • 2:57 min. • April 30th, 2023

- Inicie o procedimento colocando um peixe adulto anestesiado em uma pilha de papel absorvente. Agora use uma lâmina de barbear estéril para cortar a barbatana caudal e transfira rapidamente o peixe para um tanque contendo água doce para recuperação. Transfira o clipe de cauda para um tubo limpo contendo um tampão de lise. O tampão de lise contém detergentes não iônicos, que solubilizam a membrana plasmática e a membrana nuclear de uma célula. O tampão também contém uma enzima chamada proteinase K que quebra as proteínas e permite a liberação de DNA no lisado. Também degrada nucleases, protegendo o DNA da digestão da nuclease.

Agora, deixe os tubos com clipes de cauda em uma incubadora durante a noite para quebrar completamente o tecido a 55 graus Celsius com rotação contínua. Em seguida, aqueça o tubo a 95 graus Celsius por 15 minutos para inativar a proteinase K. Centrifugue o tubo para granular material não digerido e transfira o sobrenadante contendo DNA para outro tubo. Adicione álcool para precipitar o DNA e centrifugue novamente para coletar o DNA em um pellet. No protocolo a seguir, isolaremos o DNA do clipe da cauda de um peixe-zebra adulto e de um embrião inteiro.

- No di

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Tampão de Lise