Preparação de amostras de microscopia de folha de luz: montagem de embriões vivos de peixe-zebra para imagens de longo prazo

- Primeiro, prepare a agarose adicionando meio E3, que fornece cálcio aos embriões descorionados para a agarose derretida. Em seguida, adicione MS222 para anestesiar embriões. Resfrie a mistura de agarose a 38 graus Celsius, perto de solidificar. Selecione alguns embriões descorionados que expressam proteínas fluorescentes e transfira-os para a mistura de agarose.

Em seguida, insira totalmente um êmbolo em um capilar de vidro e retire um embrião, certificando-se de que ele entre de cabeça primeiro. Assim que a agarose solidificar, use fita adesiva para manter o capilar na posição vertical em um béquer contendo meio E3. O fundo capilar aberto promove a troca gasosa para a amostra de embrião.

Colocar o capilar no suporte de amostras de um microscópio de fluorescência de folha de luz. O laser forma uma fina folha de luz, permitindo que uma objetiva de detecção - posicionada perpendicularmente à amostra - capture uma imagem transversal. No protocolo de exemplo, montaremos embriões de peixe-zebra para obter imagens do olho em desenvolvimento.

Comece preparando a agarose. Derreta uma alíquota preparada de 1 mililitro de agarose de baixo ponto de fusão a 1% em meio E3 a 70 graus Celsius.