0 visualizações • 3:14 min. • April 30th, 2023
- Um olho de peixe-zebra compreende córnea, esclera, cristalino e retina. A córnea é um tecido transparente que permite que a luz entre no olho. A esclera é um tecido opaco que é contínuo com a córnea, formando uma camada protetora externa. A lente é uma estrutura esférica que focaliza a luz na retina, que é uma camada de tecido sensível à luz que converte a luz em um sinal neural.
Para dissecar o olho, encha uma placa de Petri com silicone e deixe endurecer. Agora, coloque um peixe anestesiado no prato e excise os olhos usando uma microtesoura. Transfira os olhos para uma placa cheia de PBS para manter um pH constante no tecido e oriente o olho com o lado posterior voltado para cima. Segure o olho com uma pinça e faça cuidadosamente três cortes radiais na esclera e na retina.
Em seguida, dobre o tecido para revelar a lente. Agora, posicione o olho com o lado anterior voltado para cima e remova a esclera e a retina. Retire a lente do olho dissecado e remova qualquer tecido restante ao redor dele. No protocolo a seguir, realizaremos dissecções de lentes de larvas e peixes-zebra adultos para analisar a morfologia do cristalino.
Após a confirmação da sedação suficiente com tricaína, use uma tesoura de microdissecção para extirpar imediatamente os dois olhos de um peixe-zebra adulto ou larval e coloque os dois olhos em uma placa de Petri de 35 milímetros feita sob medida com um molde de dissecação de silicone preenchido com PBS. Para colher a lente de um peixe-zebra adulto, coloque o lado posterior do olho para cima e insira uma pinça em um ângulo inferior a 45 graus através do disco óptico. Use uma tesoura de dissecção para fazer duas ou três incisões radiais através da retina e esclera do disco óptico até a zona ciliar no olho imobilizado e descasque a retina e a esclera como pétalas de flores. Inverta o olho, com a córnea voltada para cima, e use o lado plano da tesoura para imobilizar o cristalino indiretamente por meio da manipulação da esclera e da córnea enquanto usa uma pinça para afastar a retina e os tecidos anexados. Em seguida, corte cuidadosamente qualquer excesso de tecido da lente.
Para a colheita de lentes de peixe-zebra larval, joga um olho larval com o lado posterior para cima na parte plana de um prato de silicone de PBS. E use uma agulha de tungstênio afiada para fazer cortes de rádio na retina e na esclera enquanto imobiliza o olho com outra agulha ou fórceps. Em seguida, retire suavemente a lente do olho dissociado com o lado cego de uma agulha de fio de tungstênio feita sob medida e retire cuidadosamente o tecido anexado.