in vivo Eletroporação: um método específico do local para transfectar o peixe-zebra

- Primeiro, coloque um peixe anestesiado com o lado dorsal voltado para cima em uma esponja pré-umedecida. Antes da eletroporação, injete material genético no tecido-alvo, neste caso, uma parte do prosencéfalo chamada telencéfalo. Em seguida, coloque uma pequena quantidade de gel de ultrassom na cabeça. Além disso, aplique o gel na ponta dos eletrodos para facilitar a operação eficiente. Coloque o eletrodo positivo no lado ventral da cabeça e o eletrodo negativo no lado dorsal.

Agora, pressione os eletrodos suavemente contra a cabeça e administre vários pulsos de corrente elétrica. A corrente cria poros temporários na membrana plasmática das células eletroporosas e as torna permeáveis. A corrente também facilita o movimento de partículas carregadas negativamente, como plasmídeos de expressão de DNA ou oligonucleotídeos de RNAi presentes no ambiente, para dentro das células. No exemplo a seguir, usaremos a eletroporação para introduzir um plasmídeo recombinante em células ependimogliais, células-tronco responsáveis pela geração de novos neurônios.

- Cubra o telencéfalo do peixe com uma pequena quantidade de gel de ultrassom. Para eletroporação do animal injetado com plasmídeo, remova a esponja da configuração de ejeção e mergulhe o lado interno das pontas dos eletrodos em gel de ultrassom. Posicione a cabeça do peixe entre os eletrodos, com o eletrodo positivo no lado ventral da cabeça e o eletrodo negativo no lado dorsal. Em seguida, enquanto ainda segura o corpo do peixe na esponja, pressione os eletrodos suavemente e com precisão contra o telencéfalo e administre a corrente com o pedal, segurando os eletrodos no lugar até que todos os cinco pulsos terminem.