0 visualizações • 2:53 min. • April 30th, 2023
- Jejue um peixe adulto por 24 horas antes da injeção para esvaziar o trato gastrointestinal e criar espaço adicional no abdômen. No dia do procedimento, anestesie o peixe com tricaína e coloque-o em uma fenda em uma esponja úmida com o lado ventral voltado para cima.
Em seguida, pipete a quantidade desejada de solução injetável em um pedaço de filme de laboratório e puxe-o para uma agulha de insulina. Posicione a agulha entre as nadadeiras pélvicas em um ângulo de 45 graus em relação ao eixo ântero-posterior do corpo e empurre-a suavemente na linha média. Avance a agulha aproximadamente 1 a 2 milímetros na cavidade abdominal, o espaço entre a parede abdominal e os órgãos internos, e injete lentamente a solução de interesse. Aguarde cinco segundos antes de retirar a agulha para evitar qualquer derramamento. Agora, remova cuidadosamente a agulha.
Após a injeção, transfira rapidamente o peixe para um tanque de recuperação contendo água fresca do tanque. Se o peixe não começar a nadar imediatamente, gire a água perto das guelras para ajudá-lo a se recuperar da anestesia. No protocolo de exemplo, injetaremos uma solução de mycobacterium marinum em peixes mutantes RAG1 para estudar a infecção.
- Primeiro, canalize uma gota de 5 microlitros da solução bacteriana diluída para um pedaço de filme de parafina. Em seguida, puxe a gota para uma agulha de insulina de calibre 30. Use um peixe de cinco a oito meses de idade para este experimento, sendo um peixe do tipo selvagem e o outro um peixe mutante RAG.
Posicione esses peixes com o lado ventral para cima nas fendas de um pedaço de espuma de plástico úmido. Injete a agulha de insulina entre as nadadeiras pélvicas em um ângulo de 45 graus. Mantenha a abertura da agulha para cima para garantir que toda a abertura esteja dentro da cavidade abdominal. Em seguida, injete lentamente a solução bacteriana. Depois disso, remova cuidadosamente a agulha e transfira imediatamente o peixe para um tanque de recuperação cheio de água fresca do tanque.
Colher amostras da alíquota bacteriana utilizada de 15 em 15 minutos em placas 7H10. Incube essas amostras a 29 graus Celsius por cinco dias para verificar a dose de infecção. Verifique o bem-estar dos peixes regularmente, certificando-se de sacrificar qualquer peixe com sintomas de infecção, incubando-os em água com mais de 0,02% de éster etílico de ácido 3-aminobenzóico.