Microinjeção de embriões: uma técnica para entregar um composto na gema do peixe-zebra

- Coloque duas fêmeas e dois machos em um tanque de reprodução dividido uma noite antes da injeção. Na manhã seguinte, remova a divisória e deixe os peixes se reproduzirem até observar os ovos no fundo do tanque. Recolha os ovos e lave-os com meio E3 contendo azul de metileno, um fungicida. Observe os ovos ao microscópio e remova os ovos não fertilizados. Os ovos não fertilizados têm uma membrana vitelina clara, enquanto os ovos fertilizados têm uma membrana vitelina escura.

Mantenha 10 embriões em uma placa de Petri separada como controles não injetados. Usando uma pipeta de transferência, alinhe os embriões na calha de uma placa de microinjeção à temperatura ambiente e coloque-a sob o microscópio. Empurre suavemente a agulha de microinjeção através do córion para a gema e injete lentamente um composto de interesse contendo um marcador como o vermelho de fenol. O fluxo citoplasmático permite que o composto se difunda nas células embrionárias.

Após a injeção, cultive os embriões em meio E3 com azul de metileno a 28 graus Celsius. Continue verificando a saúde dos embriões. Remova quaisquer embriões mortos ou em desenvolvimento anormal e troque o meio diariamente. No protocolo a segu