0 visualizações • 3:54 min. • April 30th, 2023
- Coloque um peixe sacrificado em um leito de dissecação e use uma lâmina cirúrgica para decapitar o peixe no nível das guelras. Segure a cabeça com o lado ventral voltado para cima e remova os tecidos moles até ver o quiasma óptico, uma estrutura feita de nervos ópticos que conecta o cérebro aos olhos.
Corte os nervos ópticos e remova os olhos. Agora, oriente o peixe com o lado dorsal voltado para cima e remova as partes do crânio para isolar o cérebro. Transfira o cérebro para uma placa de Petri contendo um meio de dissecação para manter um pH constante do tecido. Observe as partes do cérebro.
Os bulbos olfatórios são um par de estruturas na extremidade anterior conectadas aos órgãos olfatórios que detectam sinais de odor. O telencéfalo inclui áreas relacionadas à memória. A habênula transmite informações do telencéfalo para outras partes do cérebro.
O tectum óptico é um centro de processamento de informações sensoriais. O cerebelo desempenha um papel na função motora somática e no equilíbrio. E a medula transmite informações da medula espinhal para o cérebro. No protocolo a seguir, isolaremos o cérebro de um peixe-zebra adulto para coletar células-tronco neurais de diferentes regiões.
Para começar, prepare um leito de dissecação enchendo uma placa de Petri com pacotes de gel. Em seguida, cubra o prato com a tampa correspondente e incube-o a menos 20 graus Celsius. Assim que o gel estiver congelado, retire o prato do freezer e coloque um quadrado limpo de papel de filtro em cima da tampa. Prossiga para embrulhar o papel e o prato com filme plástico.
Em seguida, trate todos os instrumentos de microdissecção com etanol a 70%. Coloque essas ferramentas esterilizadas ao lado de um microscópio de dissecação e posicione o leito de dissecção completo sob o microscópio com iluminação de fibra óptica. Coloque imediatamente uma amostra de cabeça previamente preparada em cima do leito de dissecção e oriente-a de forma que seu lado dorsal fique voltado para baixo.
Em seguida, use uma tesoura para fazer um corte longitudinal no tecido mole da parte de trás da cabeça até a boca. Depois, exponha a base do crânio com uma pinça e remova todo o tecido adjacente. Em seguida, corte uma das paredes laterais do crânio, começando na parte de trás da cabeça e movendo-se em direção à região do tectum do cérebro. Repita este processo para o lado contralateral. Prossiga para cortar o nervo óptico. E então remova os dois lados mais laterais do crânio no nível do tectum
Finalmente, vire a cabeça com o lado ventral para cima. E com uma pinça, retire a parte mais apical do crânio para expor o cérebro. Em seguida, transfira o cérebro e quaisquer partes restantes do crânio para um prato contendo meio de dissecação composto de DMM F12 suplementado com penicilina estreptomicina. Com o cabo de plástico de uma microfaca sob o microscópio, limpe o tecido cerebral, tomando cuidado para não danificar nenhuma estrutura neural. Use até dois cérebros de peixe-zebra para gerar neuroesferas derivadas de todo o cérebro.