0 visualizações • 4:47 min. • April 30th, 2023
- A cardiomiopatia é uma condição na qual o músculo cardíaco enfraquece e perde a capacidade de bombear sangue. Esta condição pode ser replicada no peixe-zebra. Primeiro, dilua uma solução estoque de um medicamento responsável pela cardiotoxicidade na solução salina balanceada de Hanks para preparar várias concentrações de trabalho. Em seguida, coloque um peixe anestesiado com tricaína, com o lado ventral para cima, em uma esponja de retenção sob um microscópio de dissecação. Posicione a agulha entre as nadadeiras pélvicas em um ângulo de 45 graus em relação à horizontal.
Agora empurre suavemente a agulha de 1 a 2 milímetros na cavidade peritoneal e injete lentamente a solução do medicamento. Aguarde cinco segundos antes de retirar a agulha para evitar que a solução vaze. Transfira imediatamente o peixe para um tanque limpo contendo água fresca do sistema. Registre o número de peixes que morrem a cada dia devido a cardiotoxicidade grave, danos ao músculo cardíaco. A droga se liga aos receptores de morte presentes na membrana celular dos cardiomiócitos e desencadeia a apoptose, resultando em cardiotoxicidade grave.
Crie uma curva de sobrevivência, um gráfico exibindo a probabilidade de sobrevivência ao longo do tempo para cada concentração de droga. No exemplo, injetaremos doxorrubicina, ou DOX, para induzir cardiomiopatia em um peixe-zebra adulto de duas maneiras.
Antes de injetar DOX no peixe, jejue o peixe por 24 horas. Em seguida, agrupe os peixes. Enquanto anestesiado, use um papel de filtro limpo para secar cada peixe e medir seu peso corporal. Faça grupos de peixes que estejam todos dentro de 10% do mesmo peso corporal para que cada grupo possa ser injetado com a mesma dose de DOX. Em seguida, calcule a concentração de trabalho de DOX para cada grupo de modo que cada grupo seja injetado com cinco microlitros de solução e receba a mesma dose de DOX por peso corporal.
Em seguida, dilua o estoque de DOX em 1x HBSS. Misturar a diluição com um vórtice e, em seguida, rodar a diluição por pulso para a manter agrupada no tubo. Para a injeção, prepare uma plataforma de injeção. Em uma placa de Petri limpa de 100 milímetros, coloque uma esponja. Com a ajuda de um microscópio de dissecação, corte uma cavidade na esponja para segurar um peixe, quatro centímetros geralmente funciona.
Em seguida, em uma agulha de calibre 34, coloque uma microsseringa de 10 microlitros. Em seguida, enxágue a agulha com 1x HBSS para remover quaisquer bolhas ou blocos da seringa e do tubo. Agora, anestesifique brevemente o peixe adulto com tricaine. Em seguida, mergulhe a esponja na água do embrião com tricaína e transfira um peixe para a esponja com o abdômen para cima para a injeção. Agora, injete a solução DOX por via intraperitoneal inserindo rapidamente a agulha em um ângulo de 45 graus na linha média entre as nadadeiras pélvicas com cerca de 1 a 2 milímetros de profundidade.
Em seguida, solte lentamente toda a solução DOX. Antes de retrair a agulha, aguarde cinco segundos. Alternativamente, o peixe pode ser posicionado lateralmente com o interior para a direita. Em seguida, injetou a linha lateral acima da barbatana pélvica com o chanfro para cima apontando para as 7 horas em um ângulo de 45 graus e 3 a 4 milímetros de profundidade. Se qualquer um dos métodos injetáveis for bem-sucedido, haverá uma tonalidade vermelha na barriga.
Após a injeção, transfira rapidamente o peixe para um tanque de travessia limpo cheio de água fresca do sistema, onde ele possa se recuperar. Em seguida, lave a agulha com HBSS e prossiga para injetar o próximo peixe. Posteriormente, retorne o peixe injetado a um sistema com circulação contínua, mas separado do sistema principal para evitar contaminação cruzada. Pelas próximas 24 horas, continue a jejuar os peixes. Durante a primeira semana, após a injeção, certifique-se de verificar os peixes diariamente e remover todos os peixes mortos.