Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 3:19 min. • April 30th, 2023
Lentivirus é um retrovírus que contém material genético de RNA. Este vírus fornece um método eficiente e estável de introdução de transgenes em linhagens de células cancerígenas. Comece adicionando neuraminidase a um tubo contendo lentivírus que expressa proteína fluorescente verde, ou GFP. Mantenha o tubo a 37 graus Celsius por uma hora para aumentar a eficiência de ligação do vírus.
Em seguida, centrifugue um tubo contendo suspensão de células tumorais para formar um pellet. Adicione meios de mamosfera contendo polibreno para ressuspender as células. Polybrene é um polímero catiônico que aumenta a eficiência da infecção lentiviral. Agora coloque o número ideal de células tumorais por poço em uma placa de cultura de tecidos de seis poços. Adicione a quantidade necessária de lentivírus em cada poço da placa de cultura.
Gire o prato para misturar o conteúdo e mantenha a 37 graus Celsius por 96 horas com um suprimento contínuo de dióxido de carbono. O lentivírus entra na célula e libera RNA. A transcriptase reversa viral converte o RNA em DNA de fita dupla que se integra ao genoma do hospedeiro. Coloque a placa sob um microscópio fluorescente e monitore as células para uma transdução
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