Co-cultura de células BC: Cultura de células de câncer de mama com fragmentos ósseos para estudar a proliferação de células cancerígenas

Comece colocando um pedaço de cera óssea em duas placas de cultura de células rotuladas como teste e controle. Pipete uma quantidade adequada de bioluminescência expressando células de câncer de mama em cada centro da placa e incube as placas por um período específico para ajudar na fixação celular. Coloque um pequeno explante ósseo na cera óssea na placa de teste e prenda-o aplicando pressão.

Despeje lentamente um meio de cultura de células com soro fetal bovino, um suplemento de crescimento, em cada lado da placa para submergir o explante e incubar a 37 graus Celsius por um período específico. O tecido ósseo na placa de teste libera fatores solúveis, como citocinas e SRC quinase, que atraem células de câncer de mama, resultando em sua migração. Adicione um substrato a cada placa e coloque as placas em uma câmara de imagem de bioluminescência.

A célula cancerosa que expressa a proteína bioluminescente oxida o substrato e emite luz. Quantifique a proliferação medindo o total de fótons emitidos por cada célula usando o software. As células cancerígenas na placa de teste devem proliferar mais rapidamente do que as células na placa de controle. No protocolo a seguir, faremos co-cultura de células de câncer de mama adjacentes a explantes ósseos do fêmur para medir a proliferação de células mamárias.

Para este experimento, prepare uma suspensão de células de câncer de mama com 100.000 células por 50 microlitros de DMEM mais 10% de FBS. Além disso, prepare tampões de cera óssea para imobilizar os fragmentos ósseos. Usando as extremidades cortadas de uma ponta de micropipeta, guarde os plugues em uma placa de Petri. Em seguida, com uma pinça, transfira os plugues para uma placa de seis poços e, usando uma luva estéril, pressione os plugues na posição de 12 horas.

Em seguida, pipete 50 microlitros da suspensão celular no centro de cada poço. Coloque a placa em uma incubadora de cultura de tecidos por 45 minutos para promover a fixação das células. Enquanto a placa incuba, extraia os fragmentos ósseos. Com as células presas à placa, coloque os fragmentos de tecido ósseo sobre a cera óssea em 3 poços e pressione cada um para baixo usando o rongeur. Três poços sem fragmento servem como controles.

Em seguida, adicione lentamente cinco mililitros de DMEM mais 10% de FBS à parede de cada poço. A cera óssea e os fragmentos ósseos não devem ser desalojados. Em seguida, incube a cultura por 20 a 24 horas. No dia seguinte, faça a imagem das células. Primeiro, adicione 300 microgramas por mililitro de luciferina a cada poço e, em seguida, obtenha imagens imediatas da placa com uma plataforma de imagem IVIS.

• Cell Culture - The process of growing cells in a controlled laboratory environment.
• Bone Explant - A piece of bone tissue used in lab for biological research.
• Bioluminescence - Emission of light by a living organism, often used for tracking cell activity.
• SRC Kinase - Protein involved in cell signaling and cancer progression.
• Co-culturing - A lab technique where two or more cell types are grown together.

• The experiment involves cell culture and bioluminescence to study cancer cells (e.g., breast cancer cell culture).
• Both bone explants and cancer cells are cultured together, demonstrating co-culture technique (e.g., co-culturing).
• Bone tissues release SRC kinase, attracting cancer cells (e.g., SRC Kinase).
• The cell behavior is studied using light emission (bioluminescence) and corresponding software data processing.

• How does the co-culturing of cancer cells and bone explants work?
• What role does SRC Kinase play in cancer cell attraction?
• How is bioluminescence used to track cancer cell behavior?

• This study helps in better understanding cancer biology (e.g., cell culture).
• Our findings can potentially contribute to the development of cancer treatments (e.g., healthcare).
• Moreover, techniques used can be applied to various biological researches (e.g., cellular research).
• This co-culturing method represents advancements in the field of cancer research.