Co-cultura de células BC: Cultura de células de câncer de mama com fragmentos ósseos para estudar a proliferação de células cancerígenas

Comece colocando um pedaço de cera óssea em duas placas de cultura de células rotuladas como teste e controle. Pipete uma quantidade adequada de bioluminescência expressando células de câncer de mama em cada centro da placa e incube as placas por um período específico para ajudar na fixação celular. Coloque um pequeno explante ósseo na cera óssea na placa de teste e prenda-o aplicando pressão.

Despeje lentamente um meio de cultura de células com soro fetal bovino, um suplemento de crescimento, em cada lado da placa para submergir o explante e incubar a 37 graus Celsius por um período específico. O tecido ósseo na placa de teste libera fatores solúveis, como citocinas e SRC quinase, que atraem células de câncer de mama, resultando em sua migração. Adicione um substrato a cada placa e coloque as placas em uma câmara de imagem de bioluminescência.

A célula cancerosa que expressa a proteína bioluminescente oxida o substrato e emite luz. Quantifique a proliferação medindo o total de fótons emitidos por cada célula usando o software. As células cancerígenas na placa de teste devem proliferar mais rapidamente do que as células na placa de controle. No protocolo a seguir, faremos co-cultur