Co-cultura 3D com interação direta: co-cultura de células cancerígenas com monócitos para estudar sua interação

Para começar, adicione o colágeno DQ IV, um substrato proteico extinto por corante fluorescente em um extrato de matriz extracelular ou ECME. Despeje este extrato em cada poço de uma lâmina de dois poços. Rotule o primeiro bem como co-cultura, o segundo como controle. Adicione uma quantidade apropriada de suspensão de células cancerígenas marcadas com fluorescência nos poços e incube a lâmina a 37 graus Celsius pelo tempo desejado para promover a fixação celular.

Adicione uma quantidade necessária de suspensão de células de monócitos ao primeiro poço. Deixe o ECME solidificar a 37 graus Celsius. Despeje proporções iguais de células cancerígenas e meios de cultura de monócitos em cada poço e incube a lâmina a 37 graus Celsius pela duração desejada em um ambiente de dióxido de carbono. No poço de co-cultura, as células cancerígenas secretam proteínas como a proteína quimioatraente de monócitos para atrair monócitos.

Em contraste, os monócitos produzem metaloproteinase da matriz ou MMP, para degradar o colágeno, promovendo a invasão das células cancerígenas. Observe a lâmina sob um microscópio confocal. A degradação do colágeno DQ emite fluorescência que pode ser observada mais nas cé