Injeção intraductal: Aplicação da mistura de injeção nos ductos da glândula mamária do camundongo

Uma injeção intraductal é uma técnica de administração de uma mistura de injeção que pode conter células cancerígenas, vetores de expressão ou um agente terapêutico suplementado com um corante marcador nos ductos da glândula mamária.

Para este procedimento, coloque uma seringa com a mistura de injeção. Em seguida, coloque um camundongo anestesiado com o lado ventral para cima em uma cama cirúrgica. Faça uma incisão na pele entre o inguinal ou quinto par de glândulas mamárias. Separe cuidadosamente o retalho cutâneo do peritônio parietal para visualizar a árvore ductal.

Usando uma pinça, levante o mamilo e corte cuidadosamente sua parte externa para visualizar a abertura do duto. Use uma pinça para levantar a borda do retalho cutâneo e insira suavemente a agulha da seringa no mamilo para administrar a mistura de injeção. Monitore o movimento do corante traçador na árvore ductal mamária. O corante se espalha na árvore ductal sem vazar para o estroma, indicando uma injeção bem-sucedida.

Aguarde alguns segundos para evitar derramamento e, em seguida, remova lentamente a agulha do local da injeção. Feche a incisão com o clipe da ferida. No protocolo a seguir, realizaremos injeção intraductal para entregar adenovírus que expressa Cre na glândula mamária de camundongo.

Use técnicas assépticas durante todo o procedimento cirúrgico. Faça um local de incisão na pele com um comprimento de aproximadamente um centímetro entre as duas quartas glândulas mamárias inguinais. Separe cuidadosamente o retalho cutâneo do peritônio parietal, de modo a visualizar a árvore ductal mamária.

Segure cuidadosamente o mamilo com uma pinça de relojoeiro para remover o mamilo externo sem cortar a pele próxima usando uma tesoura de microdissecação. Carregue aproximadamente três a cinco microlitros da mistura de injeção de adenovírus Cre em uma seringa Hamilton de 25 microlitros com uma agulha de cubo de metal de calibre 33 afixada.

Estime o volume da mistura injetável na seringa com base no corante azul incluído na mistura. Segure suavemente a borda do retalho cutâneo com uma pinça fina e curva e injete a mistura de injeção de adenovírus Cre lentamente no mamilo enquanto monitora a disseminação do corante azul na árvore ductal mamária. Mantenha a taxa de injeção o mais lenta possível para evitar danos ao lúmen ductal.

Uma injeção intraductal bem-sucedida é indicada por fluidos injetados que se espalham por toda a árvore ductal sem vazar para o compartimento estromal. Retire suavemente a agulha do mamilo para evitar qualquer vazamento do fluido injetado. Examine o lado distal da glândula mamária ou a área circundante do mamilo injetado.

A difusão do corante no estroma próximo, como mostrado aqui, indica uma injeção de almofada de gordura mamária em vez de uma injeção intraductal bem-sucedida. Feche as feridas cirúrgicas e a pele com clipes de feridas.

Remova o mouse da anestesia e coloque-o em uma almofada de aquecimento dentro de uma gaiola limpa para recuperação. Monitore o desenvolvimento do tumor mamário conforme descrito no protocolo de texto.